线虫实验11
11种盐酸苯肼衍生物对烟草根结线虫的室内毒力测定
第1卷第1期植物医学2022年2月V o l.1N o.1P l a n tH e a l t h a n dM e d i c i n e F e b.2022D O I:10.13718/j.c n k i.z w y x.2022.01.00711种盐酸苯肼衍生物对烟草根结线虫的室内毒力测定王金峰,江其朋,龚杰西南大学植物保护学院,重庆400715摘要:本研究在室内条件下采用直接接触法测定了11种苯肼盐酸盐衍生物对烟草根结线虫的毒力.结果显示,大部分药剂对烟草根结线虫都有较高的毒力,其中4-氟苯肼盐酸盐,4-溴苯肼盐酸盐和4-氯苯肼盐酸盐对烟草根结线虫的毒力最高,L C50值分别为13.2752m g/L,9.8244m g/L, 6.9551m g/L.且在阿维菌素和4-氟苯肼盐酸盐的比为4ʒ1时,有明显增效作用.另外,由于4-氯苯肼盐酸盐具有一定的腐蚀性,可以更好地促进阿维菌素发挥药效.本研究对防治南方根结线虫的含有苯肼基团的化合物的制备及功能团的选择具有一定的指导意义.关键词:根结线虫;苯肼盐酸盐;室内毒力测定中图分类号:S482.3+9文献标志码:A文章编号:20971354(2022)01004806T o x i c i t y o f11P h e n y l h y d r a z i n eD e r i v a t i v e s t oT o b a c c oR o o tK n o tN e m a t o d eWA N GJ i n f e n g,J I A N G Q i p e n g, G O N G j i eC o l l e g eo f P l a n t P r o t e c t i o n,S o u t h w e s t U n i v e r s i t y,C h o n g q i n g400715,C h i n aA b s t r a c t:T o x i c i t y o f11k i n d s o f p h e n y l h y d r a z i n e h y d r o c h l o r i d e d e r i v a t i v e s a g a i n s t t o b a c c o r o o t-k n o t n e m a t o d e sw a s d e t e r m i n e db y d i r e c t c o n t a c tm e t h o du n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s.T h e r e-s u l t s s h o w e d t h a tm o s t o f t h e i n s e c t i c i d e s h a d h i g h t o x i c i t y t o t o b a c c o r o o t-t i e n e m a t o d e,a m o n g w h i c h4-f l u o r o p h e n y l h y d r a z i n eh y d r o c h l o r i d e,4-b r o m o p h e n y l h y d r a z i n eh y d r o c h l o r i d ea n d4-c h l o r o p h e n y l h y d r a z i n e h y d r o c h l o r i d e h a d t h e h i g h e s t t o x i c i t y t o t o b a c c o r o o t-t i e n e m a t o d e,w i t h L C50v a l u e s o f13.2752m g/L,9.8244m g/La n d6.9551m g/L,r e s p e c t i v e l y.W h e n t h e r a t i o o f a b a m e c t i n t o4-c h l o r o p h e n y l h y d r a z i n eh y d r o c h l o r i d ew a s4ʒ1,t h e s y n e r g i s t i c e f f e c tw a so b v i-o u s.I na d d i t i o n,b e c a u s e4-c h l o r o b e n z a z i dh y d r o c h l o r i d e i s c o r r o s i v e t o s o m e e x t e n t,i t c a nb e t-t e r p r o m o t e t h e e f f i c a c y o f a v e r m e c t i n.A t t h e s a m e t i m e,t h i s s t u d y h a s c e r t a i n g u i d i n g s i g n i f i-c a n c e f o r t h e p r e p a r a t i o no f c o m p o u n d s c o n t a i n i n gp h e n y l h y d r a z i n e g r o u p a n dt h es e l e c t i o no f f u n c t i o n a l g r o u p s f o r t h e c o n t r o l o f r o o t-k n o t n e m a t o d e.K e y w o r d s:r o o t-k n o t n e m a t o d e;p h e n y l h y d r a z i n eh y d r o c h l o r i d e;t o x i c i t y m e a s u r e m e n t收稿日期:20211123作者简介:王金峰,硕士,主要从事烟草根结线虫病的防控.四川省是中国重要的烟草生产基地,连作栽培较为普遍,土传病害逐年加剧,其中根结线虫病尤为严重,其种类主要为南方根结线虫.根结线虫是一类寄生于根部的植物性害虫,发生较为普遍[1].25ħ时,20d 即可完成1代[2],在四川一年可发生5~7代[3].国内外关于根结线虫的防治方法有很多,但仍以化学防治为主,且阿维菌素为主要的防治药剂[4],其原药对根结线虫的L C 50值(24h )为23.89m g /k g [5].另外阿维菌素制剂也多种多样,主要以颗粒剂为主,其制剂0.26%阿维菌素粉剂4k g /667m 2对花生根结线虫病的防效达68.2%[6];0.5%阿维菌素颗粒剂3.5k g /667m 2对胡椒根结线虫病的防效达74.63%[7];以阿维菌素和噻唑膦为主的复配药剂10.5%阿维菌素㊃噻唑膦颗粒剂1.8k g /667m 2对黄瓜根结线虫病的防效达83.11%[8].生物炭[9]㊁生物肥料[10]㊁药肥联用[11]等新型防治技术也广泛用于根结线虫病的防治.苯肼的分子结构式如图1所示.盐酸苯肼及其衍生物对小麦锈病具有良好的防治效果[12-14].此外,苯肼衍生物是化工合成中常见的一个起始产物或者中间产物,例如在农药合成中可以以盐酸苯肼为原料合成姜黄素二苯腙[15]㊁1,2,4-三唑啉酮类化合物[16],其衍生物可以合成氰氟虫腙双吡唑类化合物[17]㊁吡唑醚菌酯[18]㊁杀虫脒[19]㊁恶唑酮[20]㊁三唑酰草胺[21]等;在医药合成中,曲坦类药物[22]等也离不开苯肼盐酸盐;在其他方面也具有较大的用途,如磺酸钠苯肼盐酸盐可以制备毛笔快速清洗液[23]等.苯肼盐酸盐及其衍生物的合成方法也得到了迅速的发展.然而,目前尚未有人报道其对根结线虫的毒力.本试验选取了11种苯肼盐酸盐衍生物,测试了其对根结线虫的毒害作用,以期可以找到一种廉价水溶性化合物来防治根结线虫,并为取代苯肼类化合物的合成提供一定的指导意义.图1 苯肼的分子结构式1 材料与方法1.1 供试根结线虫根结线虫选自在烟草(品种: 云烟87)上繁育的烟草根结线虫,后经贝尔曼漏斗法分离所得的二龄根结线虫,制成2000~3000头/m L 二龄线虫悬液.1.2 供试药剂4-磺酰胺基苯肼盐酸盐㊁2-氯苯肼盐酸盐㊁3,4-二甲基苯肼盐酸盐㊁4-硝基苯肼盐酸盐㊁3-氯苯肼盐酸盐㊁4-特丁基肼盐酸盐㊁4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐㊁4-甲基苯肼盐酸盐㊁4-甲氧基苯肼盐酸盐,共11种药剂,市购;5%阿维菌素乳油,上海沪联生物药业(夏邑)股份有限公司提供.1.3 药剂的两次初筛所有试验均采用直接接触法进行.首先进行初次筛选,将药剂用蒸馏水分别配制成1.25g /L的母液,在96孔细胞培养板上分别滴加100μL 药液和100μL 二龄线虫悬液,置于25ħ(黑94第1期 王金峰,等:11种盐酸苯肼衍生物对烟草根结线虫的室内毒力测定暗)条件下的培养箱中培养24h 后调查线虫死亡数量和存活数量,计算死亡率.紧接着进行二次筛选,对上述死亡率超过90%的药剂进行二次试验.分别将3,4-二甲基苯肼盐酸盐㊁3-氯苯肼盐酸盐㊁4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐㊁4-甲基苯肼盐酸盐㊁4-甲氧基苯肼盐酸盐配制100m g/L 的溶液按照上述方法进行试验.1.4 对死亡率95%以上的药剂及5%阿维菌素乳油的L C 50值的测定称取4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐和5%阿维菌素乳油(4种)药剂,并配制为100m g /L 的标液,置于4ħ冰箱保存.后将3种苯肼盐酸盐药剂分别稀释为100m g /L ,50m g /L ,25m g /L ,12.5m g /L ,6.25m g /L ,3.125m g /L ,1.5625m g /L .在96孔细胞培养板上分别滴加100μL 药液和100μL 二龄线虫悬液,置于25ħ(黑暗)条件下的培养箱中培养24h 后对线虫死亡数量和存活数量进行计数.1.5 5%阿维菌素乳油与3种苯肼盐酸盐混合后对烟草根结线虫的增效作用将3种苯肼盐酸盐衍生物稀释至20m g /L ,5%阿维菌素乳油稀释至1.25m g/L ,按照0ʒ5,1ʒ4,2ʒ3,3ʒ2,4ʒ1,5ʒ0的比例混合.取混合后的药剂100μL 和100μL 二龄线虫悬液(根结线虫数量大于50头/μL )置于96孔细胞培养皿中,置于黑暗㊁25ħ培养箱中培养24h 后,于倒置显微镜下观察根结线虫死亡数量和存活数量并计数.1.6 数据分析试验数据处理使用S P S S26.0和E x c e l 软件,计算毒力回归方程,L C 50值及95%的置信区间,并标出r 2.按下列公式计算死亡率和矫正死亡率.死亡率(%)=死亡线虫数量/(存活线虫数量+死亡线虫数量)ˑ100%校正死亡率(%)=(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)ˑ100%2 结果与分析2.1 药剂两次筛选结果由试验对药剂的2次筛选结果可以看出,当浓度较高时,3,4-二甲基苯肼盐酸盐㊁3-氯苯肼盐酸盐㊁4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐㊁4-甲基苯肼盐酸盐㊁4-甲氧基苯肼盐酸盐对二龄根结线虫有较好的效果.当浓度降低时,仅有4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐3种苯肼盐酸盐的防效可以达到95%以上(表1).表1 试剂筛选试验结果%化学试剂名称第1次筛选死亡率校正死亡率第2次筛选死亡率校正死亡率4-磺酰胺基苯肼盐酸盐80.0177.352-氯苯肼盐酸盐54.9048.893,4-二甲基苯肼盐酸盐98.2297.9870.7363.784-硝基苯肼盐酸盐75.0071.67 3-氯苯肼盐酸盐96.7296.2890.2787.984-特丁基肼盐酸盐28.3318.784-氯苯肼盐酸盐100.00100.0099.6799.594-氟苯肼盐酸盐100.00100.0099.7499.674-溴苯肼盐酸盐100.00100.00100.00100.004-甲基苯肼盐酸盐100.00100.0061.6152.494-甲氧基苯肼盐酸盐100.00100.0092.5290.74对照(空白)11.7619.20 05植物医学 h t t p ://x b b jb .s w u .e d u .c n 第1卷2.23种苯肼盐酸盐的对根结线虫的毒力试验结果看出,3种药剂对根结线虫的毒力从大到小依次为4-氟苯肼盐酸盐㊁4-溴苯肼盐酸盐㊁4-氯苯肼盐酸盐,其L C 50值分别为13.2752m g /L ,9.8244m g /L ,6.9551m g /L (表2).表2 3种苯肼盐酸盐对根结线虫的毒力(24h)药剂回归方程L C 50值/m g ㊃L -195%置信区间相关系数(r2)4-氯苯肼盐酸盐y =2.7585x +2.67656.95513.4381~20.58430.98684-氟苯肼盐酸盐y =1.4678x +3.351613.275210.9485~30.79520.98964-溴苯肼盐酸盐y =2.9628x +2.06009.82445.0597~24.24460.99315%阿维菌素乳油y =2.0669x +4.76431.30030.8918~2.53120.9782注:所有的回归方程及L C 50相对于有效成分而言.2.3 阿维菌素与3种苯肼盐酸盐混配后对根结线虫的毒力试验结果看出,当1.25m g /L 阿维菌素和20m g/L 的4-氟苯肼盐酸盐按照4ʒ1混合后,对烟草根结线虫的毒力变大,具有明显的增效作用(表3).表3 5%阿维菌素乳油与3种苯肼盐酸盐混合对二龄根结线虫的毒杀效果药剂实际死亡率/%预期死亡率/%毒效比评价阿维菌素27.17阿维菌素ʒ4-氟苯肼盐酸盐=1ʒ412.8016.110.7943相加阿维菌素ʒ4-氟苯肼盐酸盐=2ʒ316.5918.880.8786相加阿维菌素ʒ4-氟苯肼盐酸盐=3ʒ222.0521.641.0187相加阿维菌素ʒ4-氟苯肼盐酸盐=4ʒ161.1724.412.5064增效4-氟苯肼盐酸盐13.35阿维菌素23.10阿维菌素ʒ4-氯苯肼盐酸盐=1ʒ428.5532.860.8687相加阿维菌素ʒ4-氯苯肼盐酸盐=2ʒ313.5230.420.4443拮抗阿维菌素ʒ4-氯苯肼盐酸盐=3ʒ228.9827.981.0356相加阿维菌素ʒ4-氯苯肼盐酸盐=4ʒ140.5525.541.5879增效4-氯苯肼盐酸盐35.31阿维菌素30.83阿维菌素ʒ4-溴苯肼盐酸盐=1ʒ427.5126.591.0347相加阿维菌素ʒ4-溴苯肼盐酸盐=2ʒ317.7827.650.6430拮抗阿维菌素ʒ4-溴苯肼盐酸盐=3ʒ216.0128.710.5577拮抗阿维菌素ʒ4-溴苯肼盐酸盐=4ʒ123.1429.770.7773相加4-溴苯肼盐酸盐25.53注:1.阿维菌素的浓度为1.25m g /L ,3种苯肼盐酸盐均为20m g /L ,按照上图比例将两种药剂混合后与二龄烟草根结线虫1ʒ1混合;2.所有的药品在稀释后均在4ħ冰箱保存6d .3 结论与讨论不同结构的化学物质对根结线虫的毒力有着较为明显的差别.经过两次筛选和室内毒力测定,可以得出4-氟苯肼盐酸盐在根结线虫防治效果最好,4-氯苯肼盐酸盐和4-溴苯肼盐酸盐次之,且4-氟苯肼盐酸盐的毒性远远大于4-氯苯肼盐酸盐及4-溴苯肼盐酸盐;3种化合物中,15第1期 王金峰,等:11种盐酸苯肼衍生物对烟草根结线虫的室内毒力测定25植物医学h t t p://x b b j b.s w u.e d u.c n第1卷4-氯苯肼盐酸盐和4-氟苯肼盐酸盐与阿维菌素按照一定比例混合后,具有明显的增效作用. 3种化合物均具有一定的腐蚀性.盐酸苯肼具有中等毒性,可经呼吸道㊁胃肠道㊁皮肤吸收[24],与牛血清蛋白相互作用[24];致使小鼠血液中网织红细胞下降[25],造成血虚症[26],轻则可恢复,严重时导致死亡;与人大量接触后,可致使头昏㊁恶心㊁乏力[27],具有很大的毒性.大量的苯胺类㊁盐酸苯肼衍生物类试剂是芳香烃受体(A h受体)激动剂[28],这可能与苯肼盐酸盐类衍生物对根结线虫有较高的毒力有关.综合比较11种盐酸苯肼衍生物与阿维菌素原药和噻唑膦原药对南方根结线虫的室内毒力,发现4-氯苯肼盐酸盐㊁4-氟苯肼盐酸盐和4-溴苯肼盐酸盐3种化合物对根结线虫的毒力远远大于阿维菌素和噻唑膦,阿维菌素原药和噻唑膦原药对根结线虫的L C50值(24h)为23.89m g/k g和56.55m g/k g[5],约为23.89m g/L和56.55m g/L.另外经研究发现,1.25m g/L的阿维菌素乳油与20m g/L的4-氟苯肼盐酸盐复配,比例在4ʒ1时具有增效作用,且增效作用明显.另外,汪学伦[29]㊁王先锋[30]㊁王洋[31]㊁张力志[32]陆续通过化学合成的方法合成了多种含有苯肼基团化合物,并测试了其杀菌活性.盐酸苯肼类衍生物大部分为水溶性盐,不仅可以直接运输,也可以制备成高浓度的水剂,减少有机溶剂的使用量.本研究通过室内毒力测定的方法测试了11种盐酸苯肼衍生物对烟草根结线虫的室内毒力;该研究对防治根结线虫的含有苯肼基团的化合物的制备及功能团的选择具有一定的指导意义.最后,由于本试验是在室内进行的毒力测定,缺少田间实践证明(田间自然环境复杂,变化因素较多),可能在使用时会有较大差异,但该研究对防治烟草根结线虫的化学物筛选及药剂复配具有很大意义.参考文献:[1]王金峰,江连强,刘东阳,等.烟草根结线虫病防治方法及发展趋势[J].植物医生,2021,34(2):9-12.[2]孔凡玉,王静.烟草根结线虫病研究进展[J].沈阳农业大学学报,2001,32(3):232-235.[3]唐唯生,谢小波,陈昌权,等.利用天敌和抗病品种防治烟草根结线虫研究[J].烟草科技,1998,31(5):45-46.[4]刘芳,李劲松,廖新福,等.几种复混药剂防治厚皮甜瓜南方根结线虫的效果[J].中国瓜菜,2016,29(2):27-29.[5]王泊理,赵江克.阿维菌素与噻唑膦混配对南方根结线虫的联合毒力测定[J].植物医生,2019,32(6):24-27.[6]陈兵,韩佩娥,朱凤香,等.生物农药阿维菌素防治果蔬根结线虫病试验[J].浙江农业科学,2003,44(2):87-89.[7]马世龙.0.5%阿维菌素颗粒剂防治黄瓜根结线虫病药效试验[J].北方园艺,2012(4):138-139.[8]鲁毅,张毅,周玲.10.5%阿维菌素㊃噻唑膦颗粒剂防治黄瓜根结线虫病田间药效试验[J].陕西农业科学,2018,64(5):34-36.[9]张涵,焦永吉,赵世民,等.利用生态炭肥修复土壤防治烟草根结线虫病与黑胫病[J].烟草科技,2016,49(6):30-35.[10]谢平.生物肥料 宁盾 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初中生物常见的趣味的实验
2.观察水绵3。
观察叶片的结构4.绿叶在光下制造淀粉5。
观察鲫鱼的形态结构6.观察动物的绕道取食行为7.观察细菌的形态8.人体呼吸产生二氧化碳9。
观察血液的流动``10.观察鸡蛋的结构11。
观察种子的呼吸现象实验12：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验13 植物细胞的质壁分离和复原实验14：烟草浸出液对鱼呼吸的影响15、细胞的作用16、生物小实验：面包霉菌17、生物小实验：白花变色18、生物小实验:鸡蛋冒汗实验19：生物电池的制作实验20：琥珀”标本的制作实验21：玻璃棒能点燃冰块实验22：蛋壳刻画23、生物小实验：鱼尾的作用24、生物小实验：水培植物25、生物小实验：植物的向光性26、生物小实验：根吸收水分27、细胞的作用28、纸片诱蝶29、纸上产卵小实验30、吃叶趋化性31、镰孢菌实验:32、线虫来源：黄瓜、西红柿、苦瓜根瘤部位。
33、黄豆发芽率初步实验方案34、果酒和果醋的制作35、腐乳的制作目的要求1、学会制作临时装片，认识细胞的结构2、初步学会画细胞的结构材料用具：显微镜、稀碘液、生理盐水、清水、消毒牙签，镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片、洋葱方法步骤：根据下面提供的两组实验,分组（或自由选择)进行操作。
实验结束后交流实验结果和体会1、制作临时装片2、观察细胞结构A观察视野内参照图找细胞及各部分结构B画图并标注名称讨论1、制作临时装片大致分为哪几个步骤?2、人口腔上皮细胞与洋葱表皮细胞的基本结构是什么?比较他们的异同。
2.观察水绵目的要求:通过显微镜观察水绵的结构材料用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、标本瓶、滴管、水绵等方法步骤1、在载玻片的中央滴一滴清水,用镊子夹住少量的水绵放在水中，盖上盖玻片，制成临时装片.2、将装片放在低倍镜下观察，注意观察每一条水绵的形态.3、对照课本上的图片，一个水绵细胞的结构讨论：1、水绵的生活环境是怎样的？2、水绵的结构特点是怎样的？3、影响实验观察效果的因素有哪些?3。
人体少见寄生线虫全
免疫学检查：本组病例免疫 学检查阳性率达84%； 温州 市苍南县已被确定为
广州管圆线虫的流行区。
防治
预防：不吃生或半生中间宿 主，不吃生菜不喝生水，加 强健康教育、建立监测和预 警机制
治疗：
1、可试用杀灭组织内寄生虫药物 甲苯咪唑，3mg/Kg体重，可
使成虫减少90%以上；
2使用脱水剂，降低颅内压；
1、 诊断：
从患者尿液沉淀物中或 粪便中检出虫体或虫卵； 2、治疗：甲苯咪唑、阿苯 达唑、左旋咪唑。
兽比翼线虫 P206
寄生于虎、猫、牛、羊、河马等 动物，偶尔可寄生在人体咽喉、气管、 支气管等部位。 ♂3-6mm ♀8-24mm 。
目前对其生活史不清楚；
人体感染方式： 生吃龟、鳖的肝、胆、
血等引起感染。
时间：1995.3.11.军区总院.患者钟兰 珍，女，41岁，农民。简阳云龙区金 马村启木三组人。家里养猪、鸡、鹅。 主述：小便时疼痛，尿频尿急，坠胀， 便秘，以为有热，吃消炎药不起作用。 加重半年，近2月来腰痛剧烈，不能摸， 医生打“吗啡针”才能止痛。入院诊 断：左肾积水、肾结核。粪便检查发 现大量艾氏小杆线虫。经驱虫治疗痊 愈。
第二次腰穿又发现数条 幼虫，并将标本送日本横川 Yokogawa（野村）氏，经鉴 定为鼠血圆线虫。 次年， Dougherty为了纪念陈心陶教 授，定名为广州管圆线虫。
中国大陆首先由黄贤磷等 （1979）在广州报道有人体 感染。病人为广州郊区农民， 剧烈头痛，疑为脑膜炎，后 定为“酸脑”。并提出CSF要 做EOS计数。
1984年，朱师晦、 何竟智，各报道一例病人， 并在病人脑脊液中查到了 幼虫。
1997年10-11 月，浙江温州出 现过爆发流行。
虫体大小：
动物线虫病常见病原的形态学观察(二)
动物线虫病常见病原的形态学观察（二）一、实验目的及要求熟悉线虫的基本构造，掌握小动物常见线虫的主要形态特征。
二、实验器材1．器械。
光学显微镜、手持放大镜、镊子、解剖针、平皿、载玻片与盖玻片等。
2．试剂。
乳酸酚透明液等。
3．标本。
（1）浸渍标本。
钩口科线虫：犬钩口线虫、锡兰钩口线虫及管形钩口线虫等。
尾旋科线虫：狼尾旋线虫。
双瓣科线虫：犬恶丝虫。
尖尾科线虫：疑似钉尾线虫。
异刺科线虫：鸡异刺线虫等。
比翼科线虫：斯氏比翼线虫、气管比翼线虫。
裂口科线虫：鹅裂口线虫。
毛细科线虫：有轮毛细线虫、鸽毛细线虫和膨尾毛细线虫等。
锐形科线虫：旋锐形线虫和钩状锐性线虫。
龙线科线虫：四川鸟蛇线虫和台湾鸟蛇线虫。
（2）病理标本。
异刺线虫引起的鸡盲肠病变、锐形线虫引起的鸡腺胃和肌胃病变、鸟蛇线虫引起鸭下颌和腿部瘤样肿块等。
三、实验方法、步骤和操作要领1．挑取犬钩口线虫、旋锐形线虫或钩状锐性线虫的雌雄虫各一条，分别放在两张载片上，滴加乳酸酚透明液1-2滴，盖上盖片，在光学显微镜下观察透明虫体的详细构造。
2．用肉眼或借助手持放大镜观察虫体浸渍标本及病理标本。
四、实验注意事项1．乳酸酚透明液具有一定的腐蚀性，因此不宜滴加太多，以防溢出载玻片之外而腐蚀光学显微镜的载物台。
2．虫体在滴加乳酸酚透明液后，应尽快放到光学显微镜下进行观察，若虫体透明过度，则不利于虫体内部形态构造的观察。
五、实验报告1．绘犬钩口线虫虫体头端、雄虫尾端构造；或绘出旋锐形线虫与钩状锐性线虫的前部、雌虫及雄虫后部的形态构造图，并标出各部的名称。
2．列出实验中所观察线虫的中间宿主、终末宿主与寄生部位。
附：参考资料（一）小动物常见线虫的形态特征1．犬、猫钩虫。
钩口科（Ancylostomatidae）的钩口属 (Ancylostoma)、板口属 (Necator)和弯口属 (Uncinaria)的一些线虫寄生于犬、猫的小肠（主要以十二指肠为主），是犬、猫较为常见的重要线虫之一。
作人体线虫釆集步骤
作人体线虫采集步骤引言人体线虫（Caenorhabditis elegans）是一种常见的实验动物，广泛应用于生命科学领域的各个方面。
作为一种模式生物，人体线虫在研究神经、生殖、发育和老化等方面起到了重要的作用。
为了进行实验研究，采集人体线虫是一个必要的步骤。
本文将详细介绍作人体线虫采集的步骤。
仪器和材料在进行人体线虫采集之前，需要准备以下仪器和材料： 1. 无菌培养皿：用于培养人体线虫的基本工具。
2. 索引螺钉：用于标记采集点。
3. 10%漂白液：用于分离线虫和细菌。
4. 磷酸盐缓冲液（PBS）：用于洗涤线虫。
5. 丁氧乙酸（Sedoheptulose）：用于减少背景噪音。
6. 显微镜：用于观察和鉴定线虫。
7. 吸管：用于转移线虫。
线虫采集步骤第一步：准备培养皿1.在无菌培养皿中加入一层厚度约为1mm的NGM琼脂（Nematode GrowthMedium）。
2.使用索引螺钉在培养皿上标记采集点。
第二步：准备采样样本1.选择待采样的样本，例如喀斯特地区的土壤或果蔬。
2.将待采样样本放入一个大型培养皿中。
3.在培养皿中滴加足够的PBS液体以湿润样本。
第三步：筛选线虫1.使用显微镜检查采集点，观察是否存在线虫。
2.找到含有线虫的培养皿，记录采集点的位置。
第四步：分离线虫1.使用吸管将液体和样本转移到一个离心管中。
2.离心管中的液体与样本静置一段时间，使线虫沉淀到底部。
3.弃掉上层液体，只保留含有线虫的沉淀。
第五步：漂白处理1.向离心管中加入适量的10%漂白液。
2.轻轻摇动离心管，使线虫和细菌充分接触。
3.静置一段时间，使线虫的身体软化并与细菌分离。
第六步：洗涤线虫1.加入足够的PBS液体到离心管中，悬浮沉淀的线虫。
2.轻轻摇动离心管，使线虫与PBS充分混合。
3.离心管中的液体与线虫沉淀静置片刻。
4.弃掉上层液体，只保留沉淀的线虫。
第七步：加入减背景噪音剂1.向离心管中加入适量的丁氧乙酸。
人体寄生虫学实验 线虫(实验课)
皮具横纹。
● 咽管：末端膨大呈球形，称
咽管球（pharyngeal bulb）
● 生殖器官：雌虫为双管型，
雄虫为单管型。
3、虫卵形态：
1. 颜色：无色透明 2. 大小：50 ~ 60×20 ~ 30 m 3. 形状：两侧不对称，一侧较平，
一侧稍凸，呈“D”型。
4. 结构：卵壳由一脂层及两层壳质 层组成，外还有光滑的蛋 白质膜；内为一幼虫。
寄生虫学第三次实验
蛔虫、鞭虫、钩虫、蛲虫
实验内容：
一、自学标本： 1、蛔虫卵
2、钩虫卵 3、蛲虫卵 4、绦虫
二、示教标本：（示教室） 三、录 像： 四、实验操作： 五、绘 图： 1、受精蛔虫卵 2、未受精蛔虫卵 3、钩虫卵、鞭虫卵、蛲虫卵 4、带绦虫卵
似蚓蛔线虫
（Aascaris lumbricoides）
（蛔 虫）
形态:
成 虫
圆柱形, 体表有细横纹
雌雄异体, 雌虫 > 雄虫 生殖器官: 雌虫为双管型
雄虫为单管型
蛔虫（♀♂）成虫
♀
♂
蛔虫生殖器官
受精蛔虫卵
受精蛔虫卵
受精蛔虫卵（两个卵细胞）
卵内含卷曲的幼虫
感染期蛔虫卵
蛔虫卵
（感染期）
未受精蛔虫卵
未受uris trichiura）
（鞭虫）
鞭虫成虫
鞭虫（♀♂）成虫
鞭虫卵
鞭虫卵
蠕形住肠线虫
（Enterobius vermicularis）
（蛲虫）
1、成虫形态:
细小，长1cm左右，
似线头或针尖；虫
体呈乳白色，中部 膨大，雌虫尾端直 而尖细，雄虫尾端 弯曲。
2、成虫结构：
● 头翼：呈灯笼罩样，虫体角
寄生虫实验
15.疟原虫
（1）间日疟原虫 ③裂殖体 通常100×10倍
15.疟原虫
（1）间日疟原虫 ④配子体 （比较圆） 通常100×10倍
15.疟原虫
（2）恶性疟原虫 ①环状滋养体 （双钻石） 通常100×10倍 Nhomakorabea5.疟原虫
（2）恶性 疟原虫 ②配子体 （月牙状） 通常100×10倍
16.刚地弓形虫
14.鞭毛虫
（1）杜氏利什曼原 虫 ②无鞭毛体 （利杜体） 通常100×10倍
14.鞭毛虫
（2）蓝氏贾弟 鞭毛虫 ①包囊 通常100×10倍
14.鞭毛虫
（2）蓝氏贾弟 鞭毛虫 ②滋养体 通常40×10倍
15.疟原虫
（1）间日 疟原虫 ①环状滋养体 通常100×10倍
15.疟原虫
（1）间日疟原虫 ②滋养体 （阿米巴型） 通常100×10倍
第一部分 线虫
1.蛔虫
（1）受精蛔虫卵 （比较圆） 通常10×10倍
1.蛔虫
（2）未受精蛔虫卵 （里面乱七八糟） 通常40×10倍
2.钩虫
（1）钩虫卵 （边缘很清晰） 通常10×10倍
2.钩虫
（2）钩虫口囊 ①美洲钩虫口囊 通常10×10倍 （主要注意板齿）
2.钩虫
（2）钩虫口囊 ②十二指肠 钩虫口囊 通常10×10倍 （注意钩齿）
通常10×10倍 （注意有小刺）
11.带绦虫
（1）带绦虫卵 （比较小只，很圆） 通常10×10倍
11.带绦虫
（2）带绦虫头节 ①猪带绦虫头节 通常10×10倍 （注意小钩&吸盘）
11.带绦虫
（2）带绦虫头节 ②牛带绦虫头节 通常10×10倍 （传说中的四头电动 剃须刀，无小钩）
旋毛虫病肉品检验技术
旋⽑⾍病⾁品检验技术旋⽑⾍病⾁品检验技术旋⽑⾍病是重要的⼈畜共患寄⽣⾍病，它是由⽑形科的旋⽑形线⾍（Trichinella spiralis）成⾍寄⽣于肠管，幼⾍寄⽣于横纹肌所引起的。
该病流⾏于哺乳类动物间，鸟类可实验感染。
⼈若摄⾷了⽣的或未煮熟的含旋⽑⾍包囊的猪⾁可感染⽣病，主要临床表现为胃肠道症状、发热、肌痛、⽔肿和⾎液嗜酸性粒细胞增多等，严重者可以导致死亡，故⾁品卫⽣检验中将旋⽑⾍列为⾸要项⽬。
旋⽑⾍病的⾁品检验是⽣猪屠宰检疫中的⼀项重要内容，通过该项检验可以检出感染旋⽑⾍的猪只。
对于杜绝病猪⾁流⼊⾁品市场，有着重要的作⽤。
⼀、实验⽬的及要求1．掌握肌⾁旋⽑⾍压⽚镜检法、消化法的操作⽅法。
2．了解酶联免疫吸附试验的⽅法。
3．掌握旋⽑⾍病⾁的处理⽅法。
⼆、实验器材（⼀）旋⽑⾍压⽚镜检法1．材料：被检⾁品。
2．器材：载玻⽚，剪⼑，镊⼦，天平，显微镜。
3．试剂：50%⽢油⽔溶液，10%稀盐酸。
（⼆）旋⽑⾍集样消化法1．材料：被检⾁品。
2．器材：组织捣碎机，采样盘，磁⼒加热搅拌器，圆盘转动式计数镜检台，集⾍器，载玻⽚，表⾯⽫，烧杯，剪⼑，镊⼦，天平，温度计，显微镜。
3．试剂：0.04%胃蛋⽩酶溶液，盐酸。
（三）旋⽑⾍酶联免疫吸附试验（ELISA）1．材料：被检⾁品。
2．器材：滤纸⽚，玻璃瓶，剪⼑，酶标测定仪，反应板，加样器。
3．试剂：（1）阳性⾎清，阴性⾎清；（2）旋⽑⾍抗原；（3）酶标抗体（⼜称酶结合物、酶标记免疫球蛋⽩）；（4）包被液：Na2CO3 1.59g、NaN3 0.2g、NaHCO3 2.93g，⽤蒸馏⽔加⾄1000ml，调整pH为9.6。
放4℃冰箱中保存备⽤。
（5）洗涤液：NaCl 8.9g、Tween-20 0.5g、KH2PO4 0.2g、NaN3 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、KCl 0.2g，⽤蒸馏⽔加⾄1000ml，调整pH为7.4。
（6）底物溶液（OPD-H2O2）：称取邻苯⼆胺40mg，溶解于100ml pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液（0.1M 柠檬酸24.3m1，加0.2M NaH2PO4 25.7ml，加⽔50ml）中，然后加30％过氧化氢0.15ml，现配现⽤。
线虫1--本科 共71页PPT资料
人体最常见的，感染率最高的寄生虫之一。
是真正的全球性分布的寄生虫，世界上几乎任何地方都有散 发病例。全球13亿人感染。
我国是流行最严重的国家之一。
2019/11/4
一、形
态（Morphology）
（一）成虫
引起：胆道大出血， 肝脓肿 ， 胆结石、胆囊破裂， 胆汁性腹膜炎。
2019/11/4
钻入胆总管 的蛔虫
--蛔虫性肠梗阻
回肠多见。 发展：绞窄性肠梗阻、 肠扭转、肠套叠和肠 坏死，甚至肠穿孔、急 性腹膜炎。
35
2019/11/4
港台女星自残式减肥大公开 -催吐法养蛔虫减肥药
新浪娱乐 2019-09-12 10:05
艺人包翠英减肥减出大病，最后还是回到以前欧巴桑的身材，根本得 不偿失，其实圈内有许多女明星和包翠英一样，缺乏健康减肥的观念，只 要能瘦，各种恐怖又残忍的酷刑式方法，让人听了简直头皮发麻，相对也 误导许多女性跟着依样画葫芦，最后不是连命都没有，就是一辈子的健康 都毁掉。
十年前香港富婆、贵夫人间曾流行一种既恶心又恐怖的减肥方法，那 就是在肚子养蛔虫，不管吃了多少东西，养份热量都被虫虫吸收，当然就 胖不起来。外传叶玉卿和叶茜文都曾用这种方法，达到瘦身目标，难怪两 人怎么狂吃，还是保持苗条的身材。
长期下来，肠胃消化系统受到严重破坏， 送医院急诊好几次，身体健康也受到影响，所以 她奉劝天下女性，减肥最好的方法，还是少吃多 运动，其它的旁门左道还是少用为妙。
2019/11/4
叶玉卿的曼妙身材是用恐怖减肥法 “锤炼”出来的？
蛔虫减肥经“何洁一夜暴瘦”炒作后，被不少网友效仿 对此，消化科专家特别提醒各位爱美人士，
11：线概、蛔虫、钩虫
幼虫在体内有一个移行的过程
但不经过肝
总 结
比较钩虫与蛔虫生活史的异同 1、相同点
（1）均为土源性线虫 （2）寄生部位（小肠）
（3）虫卵在外界有一个发育的过程
幼虫在体内有一个移行的过程
2、不同点
（1）感染时期 （2）感染途径
（3）蛔虫幼虫体内移行经过肝， 钩虫则不经过肝。
1、两种钩虫的共同特征
3、内含2-4个卵细胞，与卵壳之 间有明显的间隙(卵周间隙）
1、杆状蚴
思 考 题
1、蛔虫常见的并发症有哪些？
2、比较蛔虫和钩虫生活史的异同？ 3、蛔虫感染普遍的主要原因有哪些？ 4、绘受精蛔虫卵、钩虫卵图。
活感染期蛔虫卵内幼虫
（3）卵壳外有一层凹凸不平的蛋白质
膜，被胆汁染成棕黄色
（4）卵内容物：
充满了大小不等的折光颗粒
颜色变为无色透明
卵内为一幼虫 余同受精蛔虫卵
1、粪便查虫卵：
直接涂片法 2、粪便查成虫
1 、雌虫产卵量大 2、虫卵对外界抵抗力强 3、粪便处理不当 4、不良的卫生习惯
（一）治 疗
复方甲苯咪唑、丙硫咪唑
1、寄生部位：小 肠 2、感染时期：感染期虫卵 感染途径：经 口 3、虫卵在外界有一个发育的过程
幼虫在体内有一个移行的过程
4、新鲜粪便污染后能否感染蛔虫病？
（一）幼虫：蛔蚴性肺炎
1、致病机理：
分泌物、代谢产物等所致的变态反应 2、临床表现： 发热、咳嗽、哮喘、呼吸困难 3、病程：1~2周
（二）成 虫
（1）虫体较细长（1cm） （2）前端微向背侧仰屈
（3）前端有口囊一个，头腺一对
（4）生殖系统：雌虫双管型；雄虫单管型
2、两种钩虫的鉴别
线虫的运动
11、线虫的运动，基本运动方式：波浪式蠕动1.线虫体壁只有纵肌，无环肌；2.假体腔充满体腔液,膨压大,形成一个支持和传送肌肉收缩的流体静力学支架, 不能伸缩运动,只能做像蛇一样的波浪式运动；3.线虫在基质中摆动产生的体波沿身体向后传播时,对土壤颗粒、水膜等产生作用力, 而其反作用力就推动线虫向前移动。
12、(一)线虫生命活动中各种行为：取食、交配、产卵、出鞘、孵化、迁移、扩散、趋向运动（对化学/物理刺激的反应）、侵入、静止、盘绕等。
(二)趋向运动的外界刺激因素：1、性外激素：两性吸引聚合交配；2、CO2和植物的渗出物：吸引作用；3、离子或化合物：吸引或排斥作用；4、光、温度、电场--趋向或避离运动。
(三)感觉外源刺激的感受器官：头感器、乳突和尾感器。
13、呼吸：线虫没有专门的呼吸器官,体内外气体交换是以扩散作用通过体壁进行的。
线虫假体腔的体液,在气体交换和运输中起着呼吸和循环系统的作用。
14、休眠：线虫以休眠状态度过逆境。
在休眠状态下,线虫以极低的代谢活性维持生命延迟老化,避免死亡,待度过逆境后,又恢复正常活动, 完成生活循环。
（一）诱导线虫休眠的不良环境：低温[机理：较低的组织温度导致相应的代谢下降]、低湿、高渗透压、缺氧等15、植物对线虫侵染的反应感病性、耐病性、抗病性。
16、1. 病理变化2. 过敏性坏死反应3. 产生植物保卫素4. 胶质物产生17、线虫对植物的影响1. 机械损伤（寄生性线虫在植物组织细胞间移动引起机械刺激；口针的刺穿作用）2. 线虫分泌物的化学作用（酶促作用）⑴细胞发育过度：根结线虫刺激形成的巨型细胞；⑵中胶层的分解：茎线虫果胶酶溶解中胶层引起软腐；⑶细胞壁的分解：柑桔穿孔线虫破坏根部皮层形成空洞⑷剌激或抑制细胞分裂：根结线虫导致畸形根端；⑸细胞变色坏死：菊花叶枯线虫分泌多酚类物质。
19、地上部分症状(1) 叶片：扭曲畸形、叶尖干枯、坏死或变色、叶瘿;(2) 茎：肿胀、扭曲、腐烂、红色坏死环；(3) 花：花序变短、不孕小花增多，花瓣变色腐烂；(4) 整株死亡：松材线虫引起松树萎蔫病。
浙江大学2021年《原生物学》：人体寄生虫学-线虫测试题及答案
第1章总论三、选择题（一）A型题1．人体寄生虫病的传染源包括A.病人和带虫者B.医学节肢动物C.所有野生动物D.所有家畜E.病人、带虫者、感染的动物2．寄生虫能在人体内长期生存，但宿主无临床症状，此人被称为A.急性病人B.慢性病人C.带虫者D.亚急性期病人E.健康者3．寄生虫的幼虫或无性阶段寄生的宿主叫A.final hostB.intermediate hostC.reservoir hostD.paratenic hostE.carrier4．寄生虫病的流行特点是A.无地方性B.无季节性C.仅有季节性D.既有地方性，又有季节性E.仅有地方性5．在寄生虫类型中，按寄生生活的时间分A.体内寄生虫和体外寄生虫B.永久性寄生虫和暂时性寄生虫C.兼性寄生虫和专性寄生虫D.体内寄生虫和暂时性寄生虫E.偶然寄生虫6．有些寄生虫既可营自由生活，又可营寄生生活，可偶被人食入，或经伤口或经身体其它开口进入人体寄生，这种寄生虫称A.兼性寄生虫B.专性寄生虫C.机会寄生虫D.永久性寄生虫E.偶然寄生虫7．有些寄生虫完成一代的发育，需经无性世代和有性世代两种生活方式交替进行，这种现象叫A.幼体增殖B.世代交替C.无性或有性生殖D.孢子生殖E.配子生殖8．对不需要中间宿主并经口感染的寄生虫，采取的预防措施中不包括A.管理粪便B.防止粪便污染食物、水源和环境C.注意个人卫生D.注意饮食卫生和饮水卫生E.改变不良的饮食习惯9．The host in which a parasite reaches sexual maturity and reproduction occurs in the life of the parasite isA.fierst intermediate hostB.paratenic hostC.reservoir hostD.final hostE.second intermediate host10．机会致病寄生虫是A.免疫功能正常时易感染的寄生虫B.免疫功能低下时致病的寄生虫C.偶然寄生虫D.体外寄生虫E.暂时性寄生虫11．Types of life cycle的划分标准是A.是否需要中间宿主B.是否需要终宿主C.是否需要保虫宿主D.是否需要转续宿主E.是否需要终宿主和中间宿主（一）A型题1.E2.C3.B4.D5.B6.A7.B8.E9.D10.B11.A第2章线虫测试题三、选择题（一）单选题1.线虫幼虫在发育过程中最显著的特征是A．都经自由生活阶段B．都有蜕皮过程C．幼虫只在宿主体内蜕皮D．幼虫均需经宿主肺部移行E．刚孵出的幼虫就有感染性2.蛔虫卵的形态与其他线虫虫卵的主要不同是A. 椭圆形B．卵壳透明 C.内含幼虫D. 呈棕黄色E．有明显的凹凸不平的蛋白膜3．产卵量最大的线虫是A.美洲钩虫B.蛔虫C.蛲虫D.鞭虫E.十二指肠钩虫4．蛔虫感染引起并发症主要是由于A.寄生于小肠B.钻孔习性C.以半消化物为食D.幼虫在肺部发育E.幼虫在人体内移行5．蛔虫性哮喘的免疫学反应是A.I型变态反应B.Ⅱ型变态反应Ｃ.Ⅲ型变态反应D.Ⅵ型变态反应E.抑制抗体反应6．幼虫在宿主肺泡内蜕皮并发育的线虫是A．钩虫B．蛲虫C．鞭虫D．蛔虫E．美丽筒线虫7．蛲虫与蛔虫的相同点是A．寄生部位B．产卵场所C．成虫寿命D．感染途径E．致病症状8．人患蛔虫病是由于误食A．受精蛔虫卵B．未受精蛔虫卵C．感染期蛔虫卵D．脱蛋白膜的蛔虫卵E．新鲜蛔虫卵9．Ascaris lumbricoides对人体最为严重的危害是A．成虫夺取营养，造成营养不良B．幼虫移行造成肺部损害C．由于成虫的扭结、钻孔而造成的多种并发症D．成虫在肠腔内移动，造成肠粘膜损伤、炎症E．成虫代谢产物造成宿主的中毒反应10．蛔虫寄生导致的并发症中最常见的是A．肠梗阻B．肠穿孔C．胆道蛔虫症D．蛔虫性阑尾炎E．似蚓蛔线虫钻入气管，引起窒息11．蛔虫病最常用的实验诊断方法为A．肛门拭子法B．碘液涂片法C．粪便生理盐水涂片法D．自然沉淀法E．饱和盐水漂浮法12．下列哪种虫体可经肺移行，引起肺部的损害?A．Trichuris trichiura B．Ascaris lumbricoidesC．结膜吸吮线虫D．Enterobius vermicularis E．丝虫13．经口感染、幼虫必须经过宿主肺部移行的线虫有A．似蚓蛔线虫、毛首鞭形线虫B．似蚓蛔线虫、蠕形住肠线虫C．似蚓蛔线虫、钩虫D．似蚓蛔线虫、旋毛形线虫E．钩虫、毛首鞭形线虫14．如下哪种寄生虫的中间宿主是蚊?A.似蚓蛔线虫B.蠕形住肠线虫C.十二指肠钩虫D.丝虫E.旋毛形线虫15．吃半生不熟的猪肉，可能感染下列哪种线虫？A．十二指肠钩虫B．TrichinelLa spiralis C．丝虫D．Enterobius vermicularis E．Ascaris lumbricoides16．蠕形住肠线虫在人体的主要寄生部位是A．小肠B．结肠C．回盲部D．直肠E．阑尾17．人体感染蛲虫主要是由于误食A．infective eggs B．蠕形住肠线虫幼虫C．杆状蚴D．丝状蚴E．内含卵细胞的蛲虫卵18．蛲虫病的主要症状为A．消化功能紊乱B．贫血C．肠梗阻D．肛门及会阴部皮肤瘙痒E．直肠粘膜脱垂19．可引起ectopia parasitism的线虫是A．Ascaris lumbricoides和丝虫B．Enterobius vemicularisC．十二指肠钩虫D．Trichuris trichiura E．丝虫20．下列哪种寄生虫主要通过“肛门→手→ 口”方式引起自身重复感染?A．Enterobius vermicularis B．Ascaris lumbricoidesC．毛首鞭形线虫D．十二指肠钩虫E．丝虫21．蛲虫致病的主要因素是A．夺取宿主营养B．成虫特殊的产卵习性和产卵部位C．成虫寄生导致局部粘膜的轻度损害 D.虫体代谢产物和崩解物的毒害E．成虫和larvae的毒性作用22．鞭虫实验诊断的依据为粪中检出A．卵B．杆状蚴C．丝状蚴D．microfilaria E．larva23．The infective stage of Trichuris trichiura isA. 幼虫B．新鲜鞭虫卵C．infective eggs D．杆状蚴E．丝状蚴24．重症鞭虫病患者的主要症状为A．烦躁不安、失眠、食欲减退B．消化功能紊乱、肠梗阻C．并发阑尾炎、肠穿孔D．引起肺部感染、咳嗽和咯血E．腹泻、便血、直肠脱垂、贫血和虚弱等症状25．鞭虫病最常用的实验诊断方法为A．粪便生理盐水涂片法B．肠粘膜活检C．免疫诊断法D．肛门拭子法E．十二指肠引流液检查法26．鞭虫成虫主要寄生部位是A．十二指肠B．升结肠 C.盲肠 D.阑尾E．直肠27．可能导致严重贫血的寄生虫是A．Ascaris lumbricoides B．Enterobius vermicularisC．Trichuris trichiura D．丝虫E．Ancylostoma duodenale28. 何种寄生虫在幼期发育中不需要中间宿主?A．旋毛形线虫B．Trichuris trichiura C．班氏吴策线虫D．马来布鲁线虫E．链状带绦虫29．以下哪种寄生虫可引起皮炎?A．Ascaris lumbricoides B．旋毛形线虫C．蠕形住肠线虫D．十二指肠钩虫E．丝虫30．钩虫幼虫侵入人体最常见的部位是A．头面部B．足掌部C．手掌部D．手指、足趾间E．腰背部31．钩虫排离人体阶段和感染阶段分别是A．虫卵和杆状蚴B．虫卵和丝状蚴C．杆状蚴和丝状蚴D．含蚴卵和微丝蚴E．微丝蚴和丝状蚴32．诊断钩虫病，下列哪种方法最常用，阳性率又高?A．粪便直接涂片法B．饱和盐水漂浮法C．自然沉淀法D．碘液染色法E．肛门拭子法33．丝虫的传播期和感染期分别是A．微丝蚴和杆状蚴B．虫卵和丝状蚴C．杆状蚴和丝状蚴D．微丝蚴和丝状蚴E．虫卵和杆状蚴34．丝虫感染人体的主要方式为A．经口B．经皮肤钻入C．经蜱叮咬D．经蚊叮咬E．经白蛉叮咬35．马来布鲁线虫感染早期主要引起A．深部淋巴系统炎症B．腰干淋巴管炎C．四肢浅部淋巴系统炎症D．主动脉旁淋巴结炎E．四肢浅部淋巴系统和深部淋巴系统炎症36．可引起精索炎、附睾炎和睾丸炎的线虫是A．马来布鲁线虫 B. 班氏吴策线虫C．旋毛形线虫D．hookworm E．毛首鞭形线虫37．外周血液中可查出丝虫的哪个阶段?A．丝状蚴B．microfilaria C．腊肠蚴D．杆状蚴E．adult38．在我国传播马来布鲁线虫的主要媒介为A．淡色库蚊，致倦库蚊B．中华按蚊，嗜人按蚊C．中华按蚊，致倦库蚊D．中华按蚊，淡色库蚊E．中华按蚊，微小按蚊39．在我国下列哪些蚊种是班氏吴策线虫的主要传播媒介?A．淡色库蚊，微小按蚊B．中华按蚊，微小按蚊C．淡色库蚊，中华按蚊D．中华按蚊，嗜人按蚊E．淡色库蚊，致倦库蚊40．诊断丝虫感染，最适宜的采血时间为A．晚10点至次晨2点B．晨2点至晨4点C．晚6点至晚10点D．清晨空腹采血E．白天任何时间均采血41．丝虫引起四肢皮肤淋巴管炎的红线走向应为A．上肢为向心性B．下肢为向心性C．上肢为向心性，下肢为离心性D．上肢为离心性，下肢为向心性E．上、下肢均为离心性42．精索、睾丸淋巴管阻塞、破裂可引起A．睾丸炎B．附睾炎C．精索肿胀D．睾丸鞘膜积液E．睾丸肿块43．丝虫的final host isA．mosquito B．man C．cat D．pig E．mouse44．可引起丹毒样皮炎的寄生虫是A.旋毛形线虫B.日本血吸虫C.丝虫D．hookworm E.毛首鞭形线虫45．哪一期可鉴别班氏吴策线虫和马来布鲁线虫的虫种?A．microfilaria B．杆状蚴C．丝状蚴D．腊肠蚴E．egg46．丝虫对人体的感染阶段是A.微丝蚴B.丝状蚴C.腊肠蚴D.感染性卵E.脱鞘后微丝蚴47．引起“流火”症状的线虫是A.钩虫B.旋毛虫C.蛔虫D.丝虫E.美丽筒线虫48．防蚊灭蚊可控制的线虫病是A．广州管圆线虫B．结膜吸吮线虫C．美丽筒线虫D．丝虫 E.棘颚口线虫49．人体旋毛虫病最主要的传染源是A．病人及带虫者B．鼠C．猫D．猪E．犬50．人体感染旋毛虫是由于A．吞人感染性虫卵B．吞食幼虫囊包C．幼虫从皮肤钻入D．误食新生幼虫E．饮用含丝状蚴生水51．旋毛虫幼虫移行期可引起主要症状是A.腹痛B．腹泻C．低热D．恶病质 E. 肌肉疼痛52．治疗旋毛虫病的首选药物是A．甲苯咪唑B．阿苯达唑 C.噻苯咪唑 D.丙硫咪唑 E.枸橼酸哌嗪53．属于生物源性蠕虫的是A．似蚓蛔线虫和毛首鞭形线虫B．蠕形住肠线虫和毛首鞭形线虫C．似蚓蛔线虫和旋毛形线虫D．钩虫和丝虫E．丝虫和旋毛虫54．结膜吸吮线虫的感染阶段为A．egg B．杆状蚴C．丝状蚴D．infective larvae E．microfilaria 55．生活史包括有自生世代和寄生世代的线虫是A. 丝虫B．旋毛虫C．钩虫D．美丽筒线虫E．粪类圆线虫56．粪类圆线虫的感染阶段为A．egg B．杆状蚴 C.丝状蚴D．腊肠蚴E．microfilaria三、选择题(一) 单型题1.B2.E3.B4.B5.A6.D7.D8.C9.C10.C11.C ` 12.B13.C14.D15.B16.C17.A18.D19.B20.A21.B22.A23.C24.E25.A26.C27.E28.B29.D30.D31.B32.B33.D34.D35.C36.B37.B38.B39.E40.A41.E42.D43.B44.C45.A46.B47.D48.D49.D50.B51.E52.D53.E54.D55.E56.C。
动物线虫病常见病原的形态学观察(二)
动物线虫病常见病原的形态学观察（二）一、实验目的及要求熟悉线虫的基本构造，掌握小动物常见线虫的主要形态特征。
二、实验器材1．器械。
光学显微镜、手持放大镜、镊子、解剖针、平皿、载玻片与盖玻片等。
2．试剂。
乳酸酚透明液等。
3．标本。
（1）浸渍标本。
钩口科线虫：犬钩口线虫、锡兰钩口线虫及管形钩口线虫等。
尾旋科线虫：狼尾旋线虫。
双瓣科线虫：犬恶丝虫。
尖尾科线虫：疑似钉尾线虫。
异刺科线虫：鸡异刺线虫等。
比翼科线虫：斯氏比翼线虫、气管比翼线虫。
裂口科线虫：鹅裂口线虫。
毛细科线虫：有轮毛细线虫、鸽毛细线虫和膨尾毛细线虫等。
锐形科线虫：旋锐形线虫和钩状锐性线虫。
龙线科线虫：四川鸟蛇线虫和台湾鸟蛇线虫。
（2）病理标本。
异刺线虫引起的鸡盲肠病变、锐形线虫引起的鸡腺胃和肌胃病变、鸟蛇线虫引起鸭下颌和腿部瘤样肿块等。
三、实验方法、步骤和操作要领1．挑取犬钩口线虫、旋锐形线虫或钩状锐性线虫的雌雄虫各一条，分别放在两张载片上，滴加乳酸酚透明液1-2滴，盖上盖片，在光学显微镜下观察透明虫体的详细构造。
2．用肉眼或借助手持放大镜观察虫体浸渍标本及病理标本。
四、实验注意事项1．乳酸酚透明液具有一定的腐蚀性，因此不宜滴加太多，以防溢出载玻片之外而腐蚀光学显微镜的载物台。
2．虫体在滴加乳酸酚透明液后，应尽快放到光学显微镜下进行观察，若虫体透明过度，则不利于虫体内部形态构造的观察。
五、实验报告1．绘犬钩口线虫虫体头端、雄虫尾端构造；或绘出旋锐形线虫与钩状锐性线虫的前部、雌虫及雄虫后部的形态构造图，并标出各部的名称。
2．列出实验中所观察线虫的中间宿主、终末宿主与寄生部位。
附：参考资料（一）小动物常见线虫的形态特征1．犬、猫钩虫。
钩口科（Ancylostomatidae）的钩口属 (Ancylostoma)、板口属 (Necator)和弯口属 (Uncinaria)的一些线虫寄生于犬、猫的小肠（主要以十二指肠为主），是犬、猫较为常见的重要线虫之一。
线虫练习试卷6(题后含答案及解析)
线虫练习试卷6(题后含答案及解析) 题型有：1. A1型题1．在旋毛虫病流行中起重要作用的传染源是A．蛇B．狼C．旋毛虫病带虫者D．旋毛虫病病人E．猪正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫2．透明胶纸法或棉签拭子法可检查下列哪种寄生虫病A．丝虫B．毛首鞭形线虫C．似蚓蛔线虫D．蠕形住肠线虫E．猪巨吻棘头虫正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫3．关于旋毛形线虫的描述错误的是A．猪是旋毛形线虫的终宿主B．人是旋毛形线虫的中间宿主C．猪是旋毛形线虫的中间宿主D．人是旋毛形线虫的终宿主E．以上都不是正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫4．蠕形住肠线虫致病的主要机制为A．成虫特殊的产卵习性和产卵部位B．虫体代谢产物和崩解物的作用C．成虫的机械刺激作用D．成虫寄生导致局部黏膜损害E．夺取宿主营养正确答案：A 涉及知识点：线虫和棘头虫5．线虫卵的特点为A．无卵盖，内含毛蚴B．有明显的卵盖，内含卵细胞和多个卵黄细胞C．无卵盖，卵壳有蛔甙层D．有一个不明显的卵盖E．有一明显的卵盖正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫6．鞭虫病最常用的实验诊断方法为A．透明胶纸法B．肠黏膜活检C．免疫诊断法D．直接涂片法E．以上都不是正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫7．关于旋毛形线虫的描述正确的是A．中间宿主和终宿主为统一宿主，完成生活史不需要更换宿主B．幼虫寄生在宿主的肠道C．人是旋毛形线虫的唯一终宿主D．旋毛虫病是人兽共患寄生虫病E．以上都不是正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫8．丝虫的中间宿主为A．人B．蚊C．蝇D．狗E．白蛉正确答案：B 涉及知识点：线虫和棘头虫9．可在人口腔黏膜寄生的线虫是A．旋毛形线虫B．结膜吸吮线虫C．美丽筒线虫D．丝虫E．粪类圆线虫正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫10．鞭虫病的传染源是A．人B．甲虫C．犬D．猫E．猪正确答案：A 涉及知识点：线虫和棘头虫11．关于蠕形住肠线虫卵的描述哪项是错误的A．卵自虫体排出后，约6h发育为感染期卵B．感染期卵内含一条盘曲的幼虫C．卵壳外有凹凸不平的蛋白膜D．无色透明E．两侧不对称，一侧扁平，一侧稍凸正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫12．蛔虫病的并发症是主要由于A．虫体代谢物和崩解产物引起的免疫反应B．幼虫在肺部发育C．幼虫移行对人体的损伤D．寄生于小肠E．有钻孔习性正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫13．幼虫期能引起肺部损害的寄生虫为A．毛首鞭形线虫B．猪巨吻棘头虫C．似蚓蛔线虫D．蠕形住肠线虫E．丝虫正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫14．毛首鞭形线虫的主要寄生部位是A．直肠B．升结肠C．盲肠D．十二指肠E．小肠正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫15．吃未煮熟甲虫，可能感染的蠕虫是A．美丽筒线虫和猪巨吻棘头虫B．美丽筒线虫和丝虫C．丝虫和旋毛虫D．猪巨吻棘头虫和旋毛虫E．美丽筒线虫和结膜吸吮线虫正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫16．猪巨吻棘头虫的中间宿主为A．鼠B．蚊C．虱D．羊E．天牛正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫17．旋毛形线虫的感染阶段为A．囊包B．包囊C．囊蚴D．丝状蚴E．囊尾蚴正确答案：A 涉及知识点：线虫和棘头虫18．鉴别班氏吴策线虫和马来布鲁线虫，下列哪项最重要A．丝状蚴B．腊肠期蚴C．微丝蚴D．成虫E．杆状蚴正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫19．实验诊断中哪期对鉴别班氏吴策线虫和马来布鲁线虫虫种具有重要意义A．虫卵B．杆状蚴C．丝状蚴D．微丝蚴E．腊肠期蚴正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫20．可通过肛门一手一口方式，造成自身重复感染的寄生虫是A．毛首鞭形线虫B．蠕形体肠线虫C．钩虫D．旋毛形线虫E．似蚓蛔线虫正确答案：B 涉及知识点：线虫和棘头虫21．钩虫病的最主要的临床症状是A．消化道症状B．肺部损害C．慢性缺铁性贫血D．钩蚴性皮炎E．异食症正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫22．结膜吸吮线虫的感染期为A．丝状蚴B．虫卵C．感染性幼虫D．腊肠期蚴E．微丝蚴正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫23．猪巨吻棘头虫的感染期A．感染性棘头体B．棘头体C．虫卵D．棘头蚴E．棘头体和感染性棘头体正确答案：A 涉及知识点：线虫和棘头虫24．似蚓蛔线虫对人的危害很多，主要危害为A．成虫的机械刺激作用B．成虫寄生导致并发症C．幼虫移行对肺部的损伤D．营养不良E．虫体代谢物和崩解产物引起的免疫反应正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫25．可引起精索炎、附睾炎和睾丸炎的寄生虫是A．猪巨吻棘头虫B．肝吸虫C．钩虫D．旋毛形线虫E．班氏吴策线虫正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫26．线虫的特点是A．雌性生殖器管为双管型B．雌雄异体C．虫卵有卵盖D．消化道不完整E．有循环系统正确答案：B 涉及知识点：线虫和棘头虫27．人患蛔虫病是由于误食A．新鲜蛔虫卵B．脱蛋白膜蛔虫卵C．受精蛔虫卵D．未受精蛔虫卵E．感染期蛔虫卵正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫28．下面哪项不是蛔虫病的防治原则A．治疗病人B．消灭苍蝇、蟑螂C．加强粪便管理，实现粪便无害化D．手、足涂抹防护剂E．加强卫生宣传教育饮食卫生正确答案：D 涉及知识点：线虫和棘头虫29．确诊钩虫病最常用，阳性率又高的实验诊断方法为A．肠黏膜活组织检查B．肛门拭子法C．直接涂片法D．自然沉淀法E．饱和盐水漂浮法正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫30．粪类圆线虫的感染期为A．杆状蚴B．感染性棘头体C．丝状蚴D．棘头体E．虫卵正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫31．粪类圆线虫成虫的寄生部位是A．肺B．盲肠C．小肠黏膜D．回盲部E．横纹肌正确答案：C 涉及知识点：线虫和棘头虫32．能引起人体贫血的寄生虫有A．丝虫B．钩虫C．蠕形住肠线虫D．旋毛形线虫E．卫氏并殖吸虫正确答案：B 涉及知识点：线虫和棘头虫33．生活史中幼虫需经肺部移行的寄生虫为A．丝虫B．钩虫C．毛首鞭形线虫D．蠕形住肠线虫E．猪巨吻棘头虫正确答案：B 涉及知识点：线虫和棘头虫34．蛔虫病常用的实验诊断方法为A．自然沉淀法B．肛门拭子法C．尼龙袋集卵法D．饱和盐水漂浮法E．生理盐水直接涂片法正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫35．钩虫引起异嗜症，可能与下列那种因素有关A．糖类缺乏B．维生素缺乏C．蛋白质缺乏D．蛋白质、维生素缺E．铁质缺乏正确答案：E 涉及知识点：线虫和棘头虫。
贵州省黔西南布依族苗族自治州2024生物七年级上册第一单元《生物和生物圈》人教版质量检测模拟卷
贵州省黔西南布依族苗族自治州2024生物七年级上册第一单元《生物和生物圈》人教版质量检测模拟卷学校：_______ 班级：__________姓名：_______ 考号：__________（满分：100分时间：60分钟）总分栏题号一二三四五六七总分得分评卷人得分一、选择题：本大题共30小题，每小题2分，共60分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1.能排出体内产生的废物是生物的基本特征之一。
下列生命现象中，能体现此特征的是（ ）A．乌贼在遇到敌害时喷出墨汁B．野火烧不尽，春风吹又生C．人在剧烈运动时会大量出汗D．桃花盛开，有粉色的，也有白色的2.在森林中，树、昆虫幼虫和啄木鸟之间形成了A．一个生态系统B．一个生物圈C．一条食物链D．一个食物网3.对图所示食物网的分析，错误的是（ ）A．在该生态系统中，青蛙和蜘蛛之间既有捕食关系也有竞争关系B．该食物网共有5条食物链C．该食物网中蛇获得能量最多的食物链是：农作物→昆虫→蜘蛛→青蛙→蛇D．在“农作物→鼠→蛇”这条食物链中，若大量捕捉蛇，鼠的数量会先增多后减少4.根据下图，下列关于食物链的描述，正确的是（）A．①→②→③B．⑤→②→③→④C．⑤→②→③D．④→③→②→⑤5.生态系统中的生产者主要是指（）A．太阳B．植物C．动物D．人类6.下列关于生物圈的说法正确的是A．生物圈仅由植物、动物及其中的微生物构成B．生物圈包括地球的全部，即地球内部所有生物C．生物圈指生物活动能达到的范围，包括月球D．生物圈是指地球上的生物及其生存空间的总称7.下列能构成生态系统的是A．一片森林B．地球上所有的人类C．考亭水美城中的所有生物D．庵山上的所有树木8.调查是科学探究常用的方法之一，下列有关调查叙述，正确的是（ ）A．调查必须有明确的目的和对象B．调查必须选取样本C．调查过程中觉得有必要的才记录下来D．对调查结果必须用数学方法统计9.小雯将调查到的鲫鱼、金鱼、荷花分为一类，松、玫瑰、麻雀分为一类，她的分类依据是生物的（ ）A．形态结构特点B．用途C．生活环境D．数量10.下列关于生物圈和生态系统的说法，错误的是（ ）A．湿地生态系统有“地球之肾”之称B．生物圈包括大气圈的底部、水圈的大部和岩石圈的表面C．农田生态系统的自动调节能力与森林生态系统一样D．生物圈是地球上最大的生态系统，是所有生物共同的家园11.同学们在赛跑时往往会出很多汗，这一现象体现的生物特征是（ ）A．生活需要营养B．能排出体内产生的废物C．有遗传变异的特性D．能对外界刺激作出反应12.西施舌是种经济贝类，以内质细嫩味道甘美著称。
线虫-董润
线虫遗传学实验报告生75 董润2007030039同组实验者: 周梦宇实验时间: 2009年10月28日—12月22日【实验目的】确定突变的类型（性染色体连锁、常染色体连锁或常染色体不连锁）对突变基因进行染色体定位确定突变基因与标记基因的遗传距离【实验原理】线虫的形态和生活史秀丽线虫（C.elegance）长约1mm, 直径70μm, 通体透明, 有雄体和雌雄同体两种性别个体。
图.秀丽线虫雌雄同体虫和雄虫的形态结.上为雌雄同体, 下为雄体。
雄体的尾部扇区是其重要特征（D.Pette.Snustad等, 2003）。
图2 秀丽线虫的生活史（Lelend H等, 2000）线虫的繁育线虫以微生物为食, 实验中用大肠杆菌（OP50品系）喂养。
雄性线虫的繁育是通过在同一平板饲养雄体和雌雄同体的线虫, 使得后代中有50%是雄性。
雌雄同体线虫的繁育是通过其自交而不断产生后代。
实际操作过程中, 可用灭菌后的小刀切下一小块琼脂, 将其转移到新的平板上。
保种的方法是使线虫在无食物, 较低温（10℃）的环境下生存。
进行雄性线虫和雌雄同体交配时, 一般将4-5条L4或成熟早期的雄虫, 与2-3条L4或成熟早期的雌雄同体虫置于同一平板。
为区别自交和雌雄交配的子代, 可根据子代性状的, 或只统计雄体。
后者就要求在引入亲代雄虫时不能混有卵或幼虫。
而且, 统计子代雄体时, 需将亲代雄体排除掉, 这些亲代雄虫一般有3-4条, 是雄虫中最衰老, 体型最大的。
如果需要用子代雄虫进行下一步交配, 要选择L4或成熟早期的雄虫, 而不能错取成亲代雄虫。
如果需要子代雌雄同体进行下一步交配, 要选择L4幼虫, 因为成虫可能已与雄虫交配过。
操作方法无菌操作必须在实验的全过程中进行。
不可以用受到污染的培养基, 若发现生长线虫的培养基被污染, 需将线虫转接到干净的培养基上。
挑线虫的工具是镶在玻璃管一端的铂金丝, 铂金丝尖端做成铲子状。
条每条线虫之前均需要将铂金丝灼烧。
松材线虫病防治实践
松树林松材线虫病防治卖践文、图/黄艳琴2()21年3月.本人参与南宁市烈士陵阮］松材线虫病防治全过程大学毕业以来.从事有害生物防治已有7年多.总结应乂寸松材线虫病的“实战”经验，我有些自己的心得体会2()14年起，全程参与第三次全国林业有害生物普查，直至2017年成果汇编,为我的职业生涯打下基础，也为我选择了主攻方向——松 树“癌症”——松材线虫病防治2018年，自治区林业局举办松材线虫病防控技术培训班,强化了我的专业知识,更坚定J'我対林业有害生物防控的信念同年4月春季，与同事前往大新县进行H常监测巡査时，期间发现不少松树发红发黄.经过现场仔细观察.发现是由于雷击造成的当时行业内有-•种共识，因雷击而死的松树不用取样因此.对其它任何原因致该现象发生 的松树.部坚持取样.唯独对宙击致死的忽略r 取样 那时.虽说我心存疑虑，却找不到明确的答案同年5丿］，广西南宁天鹰有害生物防治有28广两林业＞2022.6科学防疫鼻限公司安排我与同事到广西林科院森保所，学习松材线虫病检测/鉴定，镜检了解松材线虫的雌雄形态特征，学习如何通过线虫的阴门盖、雄虫尾部鸟爪状、雌虫尾部平缓或有点突来区分雌雄：6月，参加南宁市林业有害生物防控技术培训班暨兼职林业植物检疫员资格培训班，更多地了解松材线虫病的由来、症状，以及在普查过程中哪种情况下死亡的松树需要取样，哪种情况下死亡松树不需要取样，哪些情况需要记录等「次年4月，参加在南京林业大学举办的松材线虫病监测鉴定技术培训班，学习了松材线虫病管理对策和防治技术解读、松材线虫病流行现状与防控对策、松材线虫病野外监测技术、松材线虫取样与分离技术。
经过系列专业培训.让我在普查工作中能快速分辨松树死因，并对松材线虫病准确鉴定：在外业调查取样方面.如何应对关于线虫镜检的检测问题？普查过程中，主要从四个方面初步判断松树是否感染松材线虫病，一是外观正常.树脂分泌减少或停止，蒸腾作用下降；二是针叶开始变色.树脂分泌停止，通常能够观察到天牛或其它甲虫侵害和产卵的痕迹；三是大部分针叶变为黄褐色、萎蔦，通常可见到甲虫的蛀屑；四是针叶全部变为黄褐色.病树干枯死亡，但针叶不脱落。
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开设线虫有关实验的目的意义
线虫作为模式生物，与酵母、果蝇、斑马鱼、 小鼠和拟南芥等一起，为生命科学的发展做出 了极大的贡献。 目前，国内外众多的科研机构都在以线虫作为 研究材料，在RNAi、衰老、药物筛选、功能 基因组学等领域进行研究 北京生命科学研究所 、遗传与发育生物学研 究所、北京大学 、军事医学科学院、 东南大 学等单位
线虫的生物学
秀丽隐杆线虫有5对常染色体和1对性染色体；性别为 雌雄同体或雄性（自然群体中为千分之一）； 杂交时，后代雌雄比例为1：1 成虫一生可产300个受精卵； 有大量突变株； 可以用-80℃冰箱长期保存 线虫基因组测序1998年完成
Life cycle of C. elegans
LB液体培养基 【200ml】
1
2g蛋白胨, 1 g 酵母粉, 1 g NaCL, 加水至200ml
实验内容
1M MgSO4溶液 【100ml】
1MCaCl2溶液 【100ml】
2
灭菌
0ml】 4 （配方：108.3gKH2PO4， 35.6gK2HPO4，加水至1L ）
运动类型突变
实验目的
学会线虫的饲养技术； 观察线虫的形态特征；
实验安排
时间安排：
本周准备各种材料，观察并接种培养 下周“细胞凋亡诱导与观察” 再下周“环境因素对线虫基因表达的影响”
分组安排：
按4-8人为一小组
实验内容
准备线虫培养与实验所需要的培养基、 试剂等
大肠杆菌OP50的培养
实验操作
在解剖镜下挑取TJ375品系中的成年个 体； 35℃处理30min，设置未处理对照 荧光显微镜下蓝光观察，比较对照与处 理间的GFP表达差异
今天的工作
接种线虫，进行培养； 分组依次进行GFP表达观察；
继续微核实验； 继续果蝇杂交实验统计；
今天工作
4人一组进行 2只凹面载玻片，各滴1滴M9； 解剖镜下各挑取1条野生型tj375放入 一只载玻片进行高温处理，另一只做对 照 也可以尝试其他因素处理，时间以不导 致线虫死亡为宜。
实验操作
观察线虫生殖细胞：
凋亡细胞的核为亮绿色或黄色 正常细胞的核为淡绿色
今天工作
OP50接种LB，37℃培养过夜 OP50菌液涂NGM平板， 37℃培养过夜 观察线虫形态
作业
根据时间，设计方案，使恰好可以在下 周实验课的时间观察凋亡细胞
环境因素诱导线虫基因表达
目的
实验原理
线虫的生物学
线虫的生物学
通常所说的线虫特指秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种很小的蠕虫。 秀丽隐杆线虫成体长仅1mm，全身透明，以细菌为食， 居住在土壤中，全身共有959个细胞。 线虫整个的生命周期仅3天（25℃）。野生型线虫胚胎 发育中细胞分裂和细胞系的形成具有高度的程序性， 这样就便于对其发育进行遗传学分析。
?
1 cell at fertilization to 959/1031 cells in adult
4-dimensional processes of development
线虫的性别
雌雄同体
雄性
线虫的突变体（一）
a:wild type b:dummpy c:small d:long
线虫的突变体（二）
"for their discovery of RNA interference - gene silencing by doublestranded RNA"
Andrew Z. Fire Craig C. Mello
Fire A, et al. Potent and specific genetic interference by double-strand RNA in Caenorhabditis elegans. Nature, 1998,391:806-811
理解环境影响基因表达的作用 巩固荧光显微镜的使用 了解GFP作为活体标记基因在生物学研 究中的意义
原理
热休克蛋白 Heat Shock Proteins (HSPs),是在从细菌到哺乳动物中广泛 存在一类热应急蛋白质。当有机体暴露 于高温的时候，就会由热激发合成此种 蛋白，来保护有机体自身。
原理
temperature-dependent
15℃,5.5day; 20℃,3.5day; 25℃,2.5day
线虫的发育
线虫的发育
1-dimensional genetic information
100,281,416 bp ~20,000 genes
….GGTATCCATTAGGTAT……
6
1.5g KH2PO4, 3gNa2HPO4, 2.5gNaCl, 加水到500mL 灭菌后加0.5ml 1M MgSO4
实验内容
K medium 【200ml】
7
52mM NaCl，32mM KCl
灭菌并倒平板
8
实验内容
每组
培养皿包扎、灭菌 观察 接种野生型和转基因品系各1皿
实验内容
线虫培养基 【1000ml】
5
17g琼脂、3gNaCl、2.5g peptone，加入 蒸馏水（自来水亦可）987ml 灭菌后加入： 5mg/ml胆固醇1.0ml 25ml 1M磷酸盐缓冲液 1ml MgSO4 1ml CaCl2
实验内容
M9 缓冲液 【500ml】
除环境高温以外，其他应激原如缺氧、 寒冷、感染、饥饿、创伤、中毒等也能 诱导细胞生成HSP。 因此， HSP又称应激蛋白（stress protein, SP）
原理
线虫TJ375品系是转基因品系，表型与 野生型相同，所转基因为hsp16::GFP融 合基因 。
原理
环境中存在不利于生存的条件时，在较 短时间内，细胞内就会产生hsp蛋白。 TJ375品系则会合成hsp-gfp融合蛋白， 在荧光显微镜下，gfp受激发而呈现绿色。
Postdoctoral position, Vatamaniuk Lab, Cornell
A postdoctoral position is available in a young research group at Cornell University to study genetic and biochemical interactions of ATP-bindings cassette (ABC) transporters and the molecular mechanisms of their function in detoxification of heavy metals. We seek highly motivated, responsible, and talented individuals with extensive experience in molecular genetics and at least some basic experience in protein biochemistry. Experience with C. elegans work is desirable. Interested applicants should send a CV and the names and contact information of 3 persons who can provide a letters of reference. Please send information by email to okv2@.
2002诺贝尔奖
Brenner, Horvitz & Sulston “For their discoveries concerning genetic regulation of organ development and programmed cell death.”
2006诺贝尔奖
实验报告
通过查找资料，对你所观察到的GFP表 达差异进行分析，给出解释。
open-ended experiment 创新性实验
The two touch receptor neurons ALMR and PLMR are fluorescencelabelled at their cell bodies, leading to the strongly fluorescing two dots in the figure. Fluorescing processes can be seen projecting from both of these cell bodies. Halos produced from the out-of-focus of homologues of these cells on the other side of the animal are indicated by arrow heads. The thick arrow points to the nerve ring branch from the ALMR cell (out of focus); the thin arrows point to weakly fluorescing cell bodies.
实验操作
线虫的培养