植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术.pptx

（2.） 热空气处理
适用：对活跃生长的茎尖效果较好
方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般
在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异， 如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。 马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。
特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病 毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄 扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般 会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、 变色等。
由于病毒对植物造成如此严童的危害，所以世界各 国都积极开始重视这方面的研究。
小麦黄矮病毒病
②热处理是一种物理效应，可加速植物细 胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋 白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁 殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细 胞的分裂，能够获得无病毒植株。
依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利
用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进
行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降Βιβλιοθήκη Baidu，
传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存
第七章 植物脱毒快繁技术
一、病毒危害
多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如， 草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移， 侵染病毒的种类越来越多。
植物病毒病原体可通过维管束传导。因此， 对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后， 就会代代相传越趋严重。
受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大 幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。
草莓镶脉病毒
西瓜病毒病
烟草普通花叶病
目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒，种子繁殖可得无毒植株。 但对于无性繁殖植物，必须采取一些特殊方法脱 除病毒。
无病毒植株培育的意义
1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、 化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过 组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提 高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果 树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境 栽培去病毒植物可 减少药剂的使用。
二、脱毒方法
(一) 热处理脱毒
（一）发现： 1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证
明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保持30min，甘蔗就可 去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病 毒病。
热处理又称温治疗法。
• 1、热处理脱毒原理：
①病毒是DNA大分子，病毒进入植 物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒 的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或 增殖停止，而失去病毒的侵染能力。
3、茎尖的培养方法
需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。
即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只 须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽， 如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表 面消毒10min。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
兰花
马铃薯
切取茎尖越小脱毒效果越好，但太小不易成 活，过大又不能保证完全出去病毒，所以茎尖 大小要合适。
离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响
茎尖长 叶原基数 小植株数 脱毒植株
如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处 理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。
热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊 花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。
热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹 果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒 不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。
2、培养基
一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎 尖时，有些离子浓度过高应稀释。
在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中 合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必 须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长 素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用 NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些 植物茎尖培养有用。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
2、当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。 因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺 盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占 优势，使病毒无法进行复制。
3、茎尖中存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，在分生 组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。