第三章培养基的配制与灭菌
生产工艺第三章 培养基制备 第三节培养基的配制
第三节 培养基的配制
3．渗透压 配制培养基时，应注意营养物质要有合适的浓度。营 养物质的浓度太低，不仅不能满足微生物生长对营养物质 的需求，而且也不利于提高发酵产物的产量和提高设备的 利用率。但是，培养基中营养物质的浓度过高时，由于培 养基的渗透压太大，会抑制微生物的生长。此外培养基中 的各种离子的浓度比例也会影响到培养基的渗透压和微生 物的代谢活动，因此，培养基中各种离子的比例需求要平 衡。在发酵生产过程中，在不影响微生物的生理特性和代 谢转化率的情况下，通常趋向在较高浓度下进行发酵，以 提高产物产量，并尽可能选育高渗透压的生产菌珠。当然， 培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量降低。
第三节 培养基的配制
1．根据微生物的培养需要 不同的微生物所需要的培养基成分是不同的，要确 定一个合适的培养基，就需要了解生产用菌种的来源、 生理生化特性和一般的营养要求，根据不同生产菌种的 培养条件、生物合成的代谢途径、代谢产物的化学性质 等确定培养基。
第三节 培养基的配制
2．营养成分比例恰当 微生物所需的营养物质之间应有适当的比例，培养基 中的碳氮的比例（C/N）在发酵工业中尤其重要。如培养 基中氮肥源过多，会引起微生物生长过于旺盛，而不利于 产物的积累；氮源不足，则微生物菌体生长过于缓慢。当 培养基中的碳源供应不足时，容易引起微生物菌体的衰老 和自溶。培养基的碳氮比不仅会影响微生物菌体的生长， 同时也会影响到发酵的代谢途径。不同的微生物菌种、不 同的发酵产物所要求的碳氮比是不同的。即使是同一微生 物在不同的培养阶段，对培养基的碳氮比的要求也是不一 样的。
第三节 培养基的配制
为了减少实验次数，可考虑用“正交试验设计”等数 学方法来确定培养基给分和浓度，它可以通过比较少的实 验次数而得到较满意的结果，另处，还可通过方差分析， 确定哪些因素影响较大，以引起人们的注意。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。
2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。
3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。
二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。
培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。
在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。
（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。
在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。
高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。
一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。
2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。
四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。
例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。
2、称量用电子天平准确称量各种成分。
先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。
3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。
将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。
4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。
本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。
一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。
本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。
1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。
首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。
然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。
最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。
2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。
首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。
然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。
接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。
最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。
二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。
1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。
将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。
加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。
待培养基冷却后，即可进行细菌接种。
2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。
将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。
然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。
待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
第三章培养基及其配制
⑷2，4—D(2，4—二氯苯氧乙酸)起动能力比IAA高10倍， 特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽 的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量 常有毒效应。
5.2细胞分裂素类
细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而 在生根培养时使用较少或用量较低。这类激素是腺嘌吟的 衍生物，包括6－BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt (kinetin 激动 素)、Zt (zeatin 玉米素)等，细胞分裂素0.05－10mg／L。 其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6—BA。
（三）母液配制的药品与器材
1、药品：配制MS培养基所需的药品、生长调节 物质、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH，0.1mol/L的 HCL 2、器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、 母液瓶、标签、冰箱等。
（四）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液
有机物母液
激素母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算Fra bibliotekGA (赤霉素)： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不 同、培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长 生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作 用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时 有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外， 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌 发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：
①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ②促进细胞分裂与扩大。 ③抑制根的分化。
5.3激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降 低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比 例。 高：有利于根的形成和愈伤组织的形成； 适中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的形成
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。
实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。
将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。
灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
生化工艺 第三章 培养基的选择与灭菌
酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖异构酶等。 统计法（单因子试验法、正交试验设计和均匀试验设计 ） 生化工艺 第三章 培养基的选择与灭菌
微生物生长繁殖需要的生长因子如维生素等，在所使用
的碳源和有机氮源中含有的数量已能满足绝大多数微生物代
谢的需求，但某些微生物的培养基尚需加入某些微量生长因 子，以满足其代谢的需要。
问 题
1、无机N源包括哪些？有何特点？ 2、为什么说微生物吸收利用铵盐比硝酸盐的能力强 ？
3、无机N源是如何改变培养液的pH 的？
(NH4)2SO4→2NH3＋H2SO4 NaNO3＋4H2→NH3＋H2O＋NaOH
4、什么叫生理酸性物质和生理碱性物质 ？举例说明。
问 题
1、有机N源包括哪些？有何特点？ 1）成分比较复杂 2）被菌体利用的速度不同
如抗生素、毒素、激素和色素等几类
4） 胞外水解酶类 许多微生物可产生胞外水解酶类。这类水解酶包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪
酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖异构酶等。可用于食品、酿造、 纺织、制革、医药和生化试剂等各个领域。
问题
初级代谢产物和次级代谢产物包括哪些物质？
补充2：微生物的营养物质和营养类型
兼性微生物。这类微生物既生物既在空气或有氧的条件下生 长，又能在没有空气或无氧的条件下生长，包括了酵母菌及部分 细菌。
二、培养基的成分
生产青 霉素工 艺培养 基
重点内容
葡萄糖或乳糖 总量的10% 玉米浆
4%-5%
苯乙酸
0.5%-0.8% 猪油或植物油
（消泡剂） 0.5%
PH值、K、Fe、Mn、Zn、Cu等，其余水
微生物六大营养要素 碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。
此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。
灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。
物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。
消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。
配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。
(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。
微生物学实验三 培养基的配制及灭菌
实验三培养基的配制及灭菌培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。
主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。
培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。
一般细菌、放线菌适于生长在中性或微碱性的环境中，而酵母菌和霉菌则适于生长在偏酸性的环境中。
因此，在配制培养基时，须将培养基调节在一定pH的范围内。
迄今为止，培养基的种类极其繁多。
按培养基的成分，可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
天然培养基是指利用动物、植物、微生物或其它天然有机成分配制而成的培养基。
其优点是营养丰富、价格便易；缺点是成分不能准确确定且不稳定。
实验室常用的牛肉汁或麦芽汁培养基即为天然培养基。
合成培养基是指完全利用已知种类和成分的化学试剂配制而成的培养基。
优点是各成分均为已知且含量稳定，缺点是价格较贵。
实验室常用的高氏一号培养基即为合成培养基。
半合成培养基是指由天然有机成分和已知化学试剂混合组成的培养基。
实验室常用的马铃薯葡萄糖培养基即为半合成培养基。
按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂（常加1.5％～2％的琼脂）经融化冷凝而成；半固体培养基是指在液体培养基中加入0.2％～1％左右的琼脂，经融化冷凝而成；液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。
按培养基的用途，可将培养基分为加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。
加富培养基是指在培养基中加入某些特殊营养物质，促使某种持殊性能的微生物迅速生长，有利从混合菌群中分离出所需种类微生物。
例如为了分离能够利用石蜡的微生物，常在培养基中加入石蜡作为碳源。
选择培养基是指在培养基中加入某些微生物生长抑制剂，抑制那些不需要的微生物的生长，以达到从混杂微生物菌群的环境中分离到所需的微生物。
培养基的配制和灭菌-北师大版选修1生物技术实践教案
培养基的配制和灭菌-北师大版选修1 生物技术实践教案一、实验目的1.学会培养基的配制方法和操作技巧。
2.掌握灭菌技术的方法和注意事项。
3.确认所制备培养基的菌落计数和纯度。
二、实验设备和材料设备•输液器架•移液器和吸头•称量器和量筒•灭菌器•干燥器•培养皿•培养箱材料•营养琼脂•十进制稀释液•生理盐水•蒸馏水•双氧水三、实验步骤1. 营养琼脂的配制1.称取所需量的营养琼脂，加入适量的蒸馏水。
2.用称量器和量筒将混合物搅拌均匀，加热至溶解，约10-15分钟。
3.在灭菌器中灭菌，灭菌温度为121℃，时间约20分钟。
4.取出灭菌器中的营养琼脂，放置于输液器架上，待温度降至约50℃时加入适量的可生长菌液体。
2. 十进制稀释液的配制1.取出所需的十进制稀释液（通常为1ml），加入9ml生理盐水，充分混合后得到以1：10（体积比）稀释的液体。
2.逐步重复以上步骤，分别得到以1：100、1：1000、1：10000等稀释液。
3. 灭菌器的操作1.将培养基和十进制稀释液放入培养皿中。
2.放置于灭菌器中，灭菌温度为121℃，时间约15-20分钟。
3.灭菌后取出，待皿内培养基呈凝固状态时即可使用。
4. 培养基的陈放和保存1.待培养基凝固后，放置于干燥器中，以去除表面的水份。
2.将培养基放入冰箱中保存，避免因沾染杂菌而失去良好的生长环境。
3.不使用时，要记得将培养基与外界隔离，避免细菌的污染。
四、实验注意事项1.培养基配制和灭菌操作必须严格按照以上步骤实施。
2.用于配制培养基的水和其他材料必须是高纯度、无菌的。
3.灭菌器操作时，应注意排放蒸汽防止炸裂发生。
4.实验前需要对实验室进行清洁、消毒和准备操作所需的设备、材料和试剂。
5.操作过程中要注意安全，保护好眼睛、手部等关键部位。
6.实验过程中的仪器、器材和培养基需要严密地保存和处理，避免出现污染。
7.实验结束后要及时清理实验室、设备和材料，做好标记和密封保护。
五、实验结果及评价通过本次实验，可以掌握培养基的配制方法和操作技巧，熟练掌握灭菌技术的方法和注意事项，无需依赖外部资源即可制备出优质的培养基。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。
培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制1. 培养基的种类在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。
营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。
水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。
琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验1. 灭菌的重要性灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。
高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
（2）化学灭菌：使用化学消毒剂如酒精、过氧化氢等进行灭菌处理。
这种方法适用于一些耐热菌种，但需要注意化学消毒剂的浓度和作用时间，以避免对待测微生物产生不良影响。
3. 灭菌效果的验证为了验证灭菌效果，可以将灭菌后的培养基分别接种于无菌平板上，并进行培养观察。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的：掌握培养基制备的基本操作技巧，理解培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。
实验原理：培养基是一种提供营养物质和环境条件的物质，用于微生物的培养和繁殖。
通常包括碳源、氮源、无机盐和其他必需营养物质等。
培养基的配制主要包括以下步骤：1.称取所需的化学试剂和溶质，按照一定比例称取固体试剂和溶液试剂。
2.将固体试剂加入蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。
然后加入相应量的溶液试剂。
3.调节溶液的pH值，通常使用酸和碱进行调节，直至达到所需的pH 值。
4.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。
灭菌操作是为了杀灭或去除试验中的微生物，以保证实验的可靠性和安全性。
常见的灭菌方法有高温热处理、高压灭菌和化学灭菌等。
实验材料和设备：1.培养基配制所需化学试剂和溶液。
2.培养瓶和试管。
3.电子天平、酸碱仪和pH计。
4.高压灭菌锅。
实验步骤：1.根据实验要求选择合适的培养基配方。
2.按照所需比例称取固体试剂和溶液试剂。
3.将固体试剂加入适量蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。
4.加入相应量的溶液试剂。
5.使用酸和碱调节溶液的pH值，直至达到所需值。
6.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。
7.准备好待灭菌的培养基样品和高压灭菌锅。
8.将培养基样品放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌操作。
9.灭菌结束后取出培养基样品，观察样品的无菌性。
实验结果：制备完成的培养基溶液应该是透明且无悬浮物的。
经过高压灭菌处理后的培养基样品应该是无菌的，没有任何微生物的生长。
实验讨论：在实验中，我们使用了高压灭菌锅进行灭菌操作。
高压灭菌通常可以在较短时间内灭菌，且能够彻底杀灭微生物，保证培养基的无菌性。
然而，操作时需要注意灭菌锅的安全使用，并遵循相应的操作规程，确保操作人员的安全。
总结：通过本实验，我掌握了培养基制备的基本操作技巧，了解了培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。
制备无菌培养基是微生物实验中的基础工作，对于后续实验的结果和判断具有重要影响。
培养基的配制和灭菌实验报告（共8篇）
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌
1. 培养基的制备
制备培养基需要先准备好各种化学试剂，并按照配方将其称量、混合。
通常情况下，培养基的配方会包括以下成分：碳源、氮源、矿物质、维生素等。
其中，碳源可以是葡萄糖、蔗糖等简单的单糖或复糖；氮源可以是氨基酸、蛋白胨等；矿物质可以是磷酸盐、镁盐、钙盐等；维生素可以是叶酸、核黄素等。
将配制好的各种化学试剂按照配方溶解在蒸馏水中，制得液体培养基。
根据不同的需求，还可以将液体培养基加入琼脂糖等凝胶剂制成固体培养基。
2. 培养基的灭菌
培养基的灭菌是为了保证培养基中不含有任何杂菌或细菌，避免其对微生物学实验结果产生影响。
常用的灭菌方法有以下几种：
(1) 煮沸法：将液体培养基放入自减压锅或常压锅内进行煮沸，时间一般为20-30分钟，可杀死绝大多数的细菌和孢子。
(2) 高压灭菌法：将液体培养基放入压力灭菌锅内，压力升至1.5kg/cm2，温度达到121℃，时间一般为15-20分钟。
(3) 紫外线灭菌法：将液体培养基放入紫外线灯下，辐照时间一般为30-60分钟，可以杀灭一部分的细菌和孢子。
(4) 过滤灭菌法：利用过滤膜过滤液体培养基，可杀灭微小的细菌和病毒。
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(5) 微量元素：指小于0.5mmol/l的元素，Fe、B、Mn、 Cu、Mo、Co等。
(5) 天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、 酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化 有明显的促进作用。
①椰乳：它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用 ②香蕉：主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进
作用。 ③马铃薯：添加后可得到健壮的植株。 ④水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸。 ⑤其它：酵母提取液、麦芽提取液等。
大量元素10倍液，定容至1000ml； 微量元素100倍液，定容至1000ml； 铁盐100倍液，定容至1000ml； 维生素1mg/l，定容至100ml； 激素1mg/l，定容至50～100ml。
2、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ｃa 2＋和SO4 2 － ， Ｃa 2＋ 、Ｍg 2＋和PO4 3－一起溶解后，会产生沉淀，一定要 充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。 药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容 都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混 合。
3、有机化合物：培养基中若只含有大量元素与微量元 素，常称为基本培养基。为不同的培养目的往往要加 入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主 要有以下几类：
(1) 碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖
也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。
(2) 维生素(Vitamin)：维生素类化合物在植物细胞里主要是以 各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好 的促进作用。主要有： VB1 (盐酸硫胺素)：对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。 VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 VPP(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定关系。 VC(抗坏血酸)：有防止组织变褐的作用。
抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc，可用50～ 200mg/l的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤 灭菌后加入固体培养基的表层。其它抗氧化剂有二硫 苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、抗坏血酸及二乙基二硫 氨基甲酸酯等。
8、活性炭：活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构， 它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用， 它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力 越大。它可以吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中 所含的杂质，培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物 质以及蔗糖在高压消毒时产生的5－羟甲基糖醛。
培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使 15％～25％的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基pH 值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1％活性 碳时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1％活性碳， 蔗糖水解率可达5％。
为防止高压灭菌产生的上述一些变化可用下列方法：
(1) 经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，以便 及时采取有效措施。
茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产 生的致死性褐化物，其效力优于VC和半胱氨酸。
在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸 长。
活性炭在生根时有明显的促进作用，其机理一般认为
与活性炭减弱光照有关。
在使用活性炭时，要注意其吸附有害物质和吸附生长 调节物的二重性，尤其是当较高的活性炭足以能抵消 生长调节物的作用时，应注意调整好活性炭与生长调 节物等培养基成分的用量，使其皆能发挥作用。在使
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4、植物激素：在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关 键物质， 对植物组织培养起着决定性作用。
(1) 生长素类：在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组 织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。
IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，其 活力较低,是生长素中活力最弱的激素， 对器官形成的副作 用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解， 受光也易分解。
(2) 其它：有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排 出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。
６、抗生物质：抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等， 用量在5～20mg/l之间。添加抗生物质可防止菌类污染。
7、抗氧化物：植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质， 接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为 相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色，这就 是酚污染。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒，使 培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。
用时要有其量的意识，使活性炭发挥其积极作用。
二、母液的配制和保存
1、所谓母液是欲配制液的浓缩液，这可保证各物质成分 的准确性及配制时的快速移取，并便于低温保藏。 一般配成比所需浓度高10～100倍的母液。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、 有机物和激素类等。
配制培养基时，为便于保存，提高效率，通常先配制 母液。即配成：
2、常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类： 物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、
射线处理(超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等 措施。
化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来 苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当
赤霉素溶于酒精，配制时少量可用95％酒精助溶。 赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70～100％失效，应 当采用过滤灭菌法加入。
(3) 细胞分裂素类： 这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括 6-BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt(激动素)、ZT(玉米素)等。 其中ZT活性最强，但非常昂贵。常用的是6-BA。 在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：
NAA(萘乙酸) 在组织培养中的起动能力要比IAA 高出3～4倍，且由于可大批量人工合成， 耐高温高压， 不易被分解破坏，所以应用较普遍。
IBA(吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物 质。
2,4-D（2,4－二氯苯氧乙酸）起动能力比IAA高10 倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高， 但它强 烈抑制芽的形成，影响器官的发育。
3、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等 母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可 以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用 时再按比例稀释。
1、MS培养基母液的制备 2、 MS培养基的配制 上述内容见实验指导：实验二、实验三
三、 MS培养基的分装与灭菌
1、培养基分装到100ml的培养瓶中，用量一般为每瓶30～40ml， 过多造成浪费，过少则不利于植物的生长。
选用。
1、培养基用湿热灭菌：培养基在制备后的24h内完成灭菌 工序。 常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升 到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针 归零后，再关闭放气阀。关阀再通电后，压力表上升达 到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1～0.15MPa 20分
钟。
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、 接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基 要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养 基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
Fe是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组 成成分。在制做培养基时常用FeSO4·7H2O和Ｎa2EDTA结合成螯合物使用。
B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co等，也是植物组织培养中不 可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长，分裂异常。
这些整株植物生长所必需的营养元素，对于植物 组织培养来说也是必需的。当某些营养元素供应不足 时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮，会表 现出一种花色素苷的颜色，不能形成导管；缺铁，细 胞停止分裂；缺硫，表现出非常明显的褪绿；缺锰或 钼，则影响细胞的伸长。
第三章 培养基的配制及灭菌
一、培养基及其作用：是向植物细胞提供营养 的场所。其作用是向植物细胞提供所需的各种 营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。固体 培养基还起着支撑作用。
培养基多以命名人的名字命名。 目前，比较流行的培养基有：
MS培养基，其特点是无机盐和离子浓度较高； B5培养基，其特点是含有较低的铵； White培养基，其特点是无机盐低，适于生根； N6培养基，其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量较高，适于花
对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。 洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20～30min。
高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2～0.3 单位。 高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改
变培养基的渗透压。 在8％～20％蔗糖范围内，高压灭 菌后的培养基约升高0.43倍。
(2) 设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌 握剂量。如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代 替IAA，控制活性炭的用量(在0.1％以下)注意pH值对高压 灭菌下培养基中成分的影响等。
2、培养基的灭菌： （1）灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内
的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。 消毒是指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发
生危害作用，显然经过消毒，许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢 子等不会完全杀死，即消毒后的环境里、物品上还有活着的
微生物。
这里所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其 它微生物。菌的特点是：极小，肉眼看不见。无处不 在，无时不有，无孔不入。在自然条件下忍耐力强， 生活条件要求简单，繁殖力极强，条件适宜时便可大 量滋生。
(1) 氮：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物 碱等的组成成分。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾 等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。
(2) 磷：是生物膜、核苷酸（ 如ATP）、核酸的重要组成部分。 常用于培养基的磷化物有ＫH2PO4或ＮaH2PO4等。