第三章 病毒检验基本技术

第三章病毒检验基本技术
一、形态学检验
光学显微镜一般用于观察有些病毒在宿主细胞增殖后于细胞核内或细胞质内出现的包涵体。

胞质内包涵体：狂犬病毒（内基小体）、呼吸道合胞病毒（RSV）
胞核内包涵体：巨细胞病毒（CMV），单纯疱疹病毒（HSV）、水痘-带状疱疹病毒（VZV）、腺病毒。

胞质内和胞核内包涵体：麻疹病毒
电镜技术：电镜直接检查、免疫电镜
二、培养与鉴定技术（金标准）
进行病毒分离培养与鉴定的情况：
1、需对疾病进行病原学的鉴别诊断
2、发现新的病毒性疾病或再发性病毒性疾病
3、病程长且诊断困难的病人疑似病毒感染时，病毒的分离培养对诊治疾病有指导性意义
4、检测病毒减毒活疫苗效果（如及时发现回复独立的变异株等）
5、病毒性疾病的流行病学调查
6、病毒生物学特性的研究。

采集要求：早期采集，低温运送和保存（-20℃~-70℃），样本处理（高浓度抗生素—青链霉素处理过夜，或细菌滤膜过滤）
培养：
1、细胞培养：原代细胞培养、二倍体细胞培养、传代细胞培养
2、鸡胚培养（一般采用9~12日龄鸡胚）（流感病毒、疱疹病毒、痘病毒）：羊膜腔接种、绒毛尿囊膜接种、尿囊腔接种、卵黄囊接种。

3、动物接种
鉴定：
1、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
（1）细胞病变：细胞圆润、分散、溶解；细胞融合成多核巨细胞；细胞肿胀、颗粒增多、病变细胞聚集成葡萄串状；形成包涵体。

（2）红细胞吸附（流感病毒）
（3）干扰现象
（4）细胞代谢的改变
2、病毒感染性测定和病毒数量测定
（1）50%组织细胞感染量测定
（2）红细胞凝集试验
（3）空斑形成试验（最常用）
（4）中和试验
三、非培养检验技术
1、免疫学检验技术：抗原检测（意义更大、早期）、抗体检测
2、分子生物学检验技术:核酸杂交技术、聚合酶链反应技术、基因芯片技术、基因测序技术（对新基因进行测序）。