束缚应激对大鼠免疫功能的影响_王瑜

（ R1） 、束缚 2 周组（ R2） 和束缚 4 周组（ R4） 。取大鼠血清用 ELISA 方法检测糖皮质激素（ GC） 、白介素-6（ IL-6） 和
白介素-17（ IL-17） 水平，单向免疫扩散法检测免疫球蛋白 G（ IgG） 水平。分离外周血中单核细胞，用吞噬中性红法
检测大鼠单核巨噬细胞（ Mo / Mφ） 的吞噬能力。结果 束缚组大鼠 GC、IL-6 水平显著高于 Ctr 组，IL-17、IgG 含量和
R4 180． 31 ± 11． 24* 501． 35 ± 61． 72* 4． 11 ± 1． 45* 12． 45 ± 2． 53*
* P ＜ 0． 05，R 组与 Ctr 组相比
2． 2 束缚应激对大鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响 实验结果表明，束缚大鼠（ R1，R2，R4） Mo / Mφ
的吞噬功能显著低于对照组（ 图 1） ，束缚组分别与 对照组进行两两比较，P 值均为 0． 000，差异具有统 计学意义，提示长期的束缚应激可以降低大鼠的细 胞免疫功能。
图 1 束缚应激对大鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响 （ x珋± s，n = 10） * P ＜ 0． 05，R 组与 Ctr 组比较
3 讨论
应激是机体抵御外界环境不良因素的一种基本 的生理过程，机体对应激的反应是一种动态平衡，适 度的应激可以使免疫系统处于兴奋状态，机体可通 过自身调节而处于稳定状态，而长期的慢性应激使 机体失去对应激的调节能力，使免疫功能发生抑制， 机体对自 身 免 疫 病 的 易 感 性 增 加［10］，促 进 炎 症 反 应。研究表明，应激导致的神经内分泌网络的改变 是应激影响免疫系统的重要机制，其中应激条件下 GC 水平的持续升高可能是应激导致免疫系统抑制 的重要原因。应激反应的中枢效应主要发生在下丘 脑 － 垂体 － 肾 上 腺 （ HPA） 轴，而 下 丘 脑 的 室 旁 核 （ PVN） 是 HPA 轴活动的直接控制部位。应激可以 激活下丘脑，下丘脑释放促肾上腺皮质激素释放因 子（ CRF） ，CRF 作用于垂体使之产生促肾上腺皮质 激素（ ACTH） ，ACTH 可激活肾上腺皮质，诱导肾上 腺合成和释放 GC，引起免疫系统功能变化，淋巴细 胞被激活，释放各种细胞因子，而后者反过来又可反 作用于中枢神经系统，影响中枢神经系统的免疫调 节作用。现在研究认为，与神经系统关系最为密切 的细胞因 子 是 IL-6、IL-17 和 肿 瘤 坏 死 因 子-α 等。 本实验选取的大鼠束缚应激模型是一种成熟的慢性 应激模型，研究发现，束缚组大鼠 GC 水平显著升 高，这提示我们慢性应激可能通过 HPA 轴提高 GC 的水平来抑制机体的免疫功能［11］。
本实验建立了大鼠慢性束缚应激模型，通过检 测大鼠血清 的 IL-6、IL-17、IgG 水 平 和 观 察 外 周 血 Mo / Mφ 吞噬能力来探讨束缚应激对免疫系统的影 响，为进一步研究慢性应激对免疫损伤的作用提供 实验依据。
军事医学 2012 年 4 月 第 36 卷 第 4 期 Mil Med Sci，Vol 36，No 4，Apr，2012
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束缚应激对大鼠免疫功能的影响
王 瑜1，2 ，赵 云1 ，杲修杰1 ，万 帝3 ，石 卿3 ，张 岭3 ，潘 勤4 ，钱令嘉1
［摘要］ 目的 探讨束缚应激对大鼠免疫功能的影响。方法 大鼠随机分为 4 组： 正常对照组（ Ctr） 、束缚 1 周组
外周血单核巨噬细胞吞噬能力显著低于 Ctr 组。结论 束缚应激可以使大鼠免疫功能显著降低。
［关键词］ 束缚； 应激； 免疫
［中图分类号］ R392
［文献标志码］ A
［文章编号］ 1674-9960（ 2012） 04-0289-03
Effect of restraint stress on rats' immune system
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军事医学 2012 年 4 月 第 36 卷 第 4 期 Mil Med Sci，Vol 36，No 4，Apr，2012
1． 2． 2 取材与检测 造模成功后大鼠心脏取血，分 离血清 和 单 核 巨 噬 细 胞 （ Mo / Mφ ） 。取 待 测 血 清 ELISA 检测 GC、IL-6、IL-17 的含量，按试剂盒说明 操作； 采用单向免疫扩散法检测血清中 IgG 含量［6］； Ficoll 密 度 梯 度 离 心 法 分 离 外 周 血 单 核 细 胞 （ PBMC） ，贴壁法分离 PBMC 中的 Mo / Mφ［7］，采 用 吞噬中性红法检测 Mo / Mφ 的吞噬功能［8，9］。 1． 3 统计学分析
表 1 束缚应激对大鼠血清 GC、IL-6、IL-17、IgG 含量的影响 （ x珋± s，n = 10）
GC 组别
（ ρB / ng·ml-1）
Ctr 51． 93 ± 7． 81
IL-6 （ ρB / ng·ml-1） 38． 64 ± 18． 71
IL-17 （ ρB / pg·ml-1）
6． 15 ± 1． 23
数 据 采 用 均 数 ± 标 准 差 （ x珋± s ） 表 示，用 SPSS10． 0 软件进行单因素方差分析，P ＜ 0． 05 差异 有统计学意义。
2 结果
2． 1 血清中 GC、IL-6、IL-17、IgG 的含量变化 实验结果表明，与对照组相比，随着束缚时间的
延长，大鼠血清中 GC、IL-6 水平逐渐升高（ 表 1） ，束 缚组（ R1，R2，R4） 的 GC、IL-6 水平分别与对照组进 行两两比较，P 值均为 0． 000，差 异 具 有 统 计 学 意 义。大鼠 IgG 和 IL-17 的水平与束缚时间的延长呈 负相关（ 表 1） ，束缚组（ R1，R2，R4） 的 IgG 水平分别 与对照组两两比较，P 值均为 0． 000，差异具有统计 学意义。R2 组大鼠 IL-17 水平与对照组进行两两 比较，P = 0． 02，差异具有统计学意义； R4 组大鼠 IL17 水平与对照组进行两两比较，P = 0． 000，差异具 有统计学意义，但 R1 组大鼠 IL-17 水平与对照组比 较，P = 0． 125（ ﹥ 0． 05） ，差异没有统计学意义。实 验结果说明，束缚应激可以显著影响大鼠的体液免 疫功能。
［基金项目］ 国家 973 计划“肝藏血主疏泄现代科学内涵的实验研 究”（ 2011CB505106） ［作者简介］ 王 瑜，女，硕士，研究方向： 应激动物模型及精神类药 物药理学，E-mail： wangyu19891103@ 163． com ［作者单位］ 1． 军事医学科学院基础医学研究所，全军军事认知与 心理卫生研究中心，北京 100850； 2． 天津中医药大学研究生院，天 津 300193； 3． 河北联合大学，河北唐山 063009； 4． 天津中新药业 股份有限公司，天津 300193 ［通讯作者］ 钱令嘉，Tel： 010-66931392，E-mail： newjia@ vip． sina． com
WANG Yu1，2 ，ZHAO Yun1 ，GAO Xiu-jie1 ，WAN Di3 ，SHI Qing3 ，ZHANG Ling3 ，PAN Qin4 ，QIAN Ling-jia1*
（ 1． Institute of Basic Medical Sciences，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China； 2． Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China； 3． Hebei United University，Tangshan，Hebei 063009，China； 4． Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Corporation，Tianjin 300193，China）
* Corresponding author，Tel： 010-66931392，E-mail： newjia@ vip． sina． com
［Abstract］ Objective To explore the effect of restraint stress on the rat immune system． Methods Rats were randomly divided into four groups： normal control group （ Ctr） ，restraint for one week（ R1） ，restraint for two weeks（ R2） and restraint for four weeks（ R4） ． Glucocorticoid（ GC） ，interleukin-6 （ IL-6） and interleukin-17 （ IL-17） in serum were determined by ELISA and immunoglobulin G （ IgG） was determined by single radial immunodiffusion． The mononuclear cells were separated from the peripheral blood． The phagocytic activity of rat mononuclear macrophages （ Mo / Mφ） was detected by the neutral red． Results GC and IL-6 levels in restraint rats were significantly higher than in the Ctr group while the contents of IL-17，IgG，and the phagocytic capacity of peripheral blood mononuclear cells were significantly lower than those of the Ctr group． Conclusion Restraint stress can significantly reduce the immune function of rats． ［Key words］ restraint； stress； immune
IgG （ ρB / g·ml-1） 37． 52 ± 3． 51
R1wenku.baidu.com
96． 37 ± 8． 40* 158． 11 ± 28． 33* 5． 31 ± 0． 87
25． 79 ± 4． 74*
R2 133． 29 ± 8． 73* 232． 81 ± 44． 26* 4． 85 ± 1． 12* 20． 19 ± 5． 27*
应激是机体在对生存环境中多种不利因素的适 应过程中，实际或认知上的要求与适应和应对能力 之间不平 衡 导 致 的 身 心 紧 张 状 态 及 其 反 应［1］。 相 关 研 究 表 明，应 激 能 够 影 响 动 物 和 人 体 免 疫 功 能［2，3］，束缚应激是一种常见的非损伤性应激源，本 文就束缚应激对免疫细胞及免疫因子的影响进行初 步研究。
1 材料与方法
1． 1 材料 实验使用健康雄性 Wistar 大鼠 40 只，体质量
160 ～ 200 g，由军事医学科学院实验动物中心提供， 许可证 编 号： SCXK-（ 军） 2002-001。白 介 素-6 （ IL6） 、白介素-17（ IL-17） 和糖皮质激素（ GC） ELISA 试 剂盒，以及 IgG 免疫试剂盒均为 RB 公司产品； 中性 红为 Sigma 公司产品。 1． 2 方法 1． 2． 1 束缚模型的建立［4，5］ 大鼠适应性饲养 1 周后按体质量随机分为 4 组： 正常对照组（ Ctr） 、束 缚 1 周 组 （ R1 ） 、束 缚 2 周 组 （ R2 ） 和 束 缚 4 周 组 （ R4） ，每组 10 只。将束缚组大鼠每天置于束缚仓 内应激 6 h（ 9 ∶ 00 ～ 15 ∶ 00） ，分别束缚 1、2 和 4 周， Ctr 组正常饲养，动物自由饮食饮水。