汉坦病毒及其检测方法的研究进展
汉坦病毒的研究进展
１ ．济南 市疾病预防控制 中心 ， 山东 济南 ２ ５ ０ ０ ２ １ ； ２ ．济南市食 品药 品检 验检测中心 ， 山东 济南 ２ ５ ０ ０ ２ １ 关键词 ：汉坦病毒 ； 基 因组结构 ； 型别 ； 宿主 ； 分布特征 ； 致病机制
中 图分 类 号 ：Ｒ ３ ７ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ４—８ ６ ８ ５ （ ２ ０ １ ５ ） １ ７—３ ０ ２ １ — ０ ４
发 。
自然界有 １ ７ ０种哺乳 动物携带 Ｈ Ｖ， 大多数为 啮 齿类 动 物 。Ｈ Ｖ与 宿 主 间有 紧 密 的 对 应 关 系 ， １种 宿 主一般只携带 １ 种Ｈ Ｖ， 宿主动物的种群类别决 定了 其携带 的 Ｈ Ｖ 型别、 Ｈ Ｖ 感 染 的 临 床 表 现 和 严 重 程 度¨ ” 。例如 ， Ｈ Ｔ Ｎ Ｖ和 Ｄ Ｏ Ｂ Ｖ会伴 随着 较严重 的 ＨＦ Ｒ Ｓ病 例 ， Ｓ Ｅ Ｏ Ｖ则 只 引起 中度 的 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ 。 汉 坦病毒 属 、 啮齿 类 宿 主及 Ｈ Ｖ感 染 形 式 关 系密 切， 啮齿类 动物 的分 布决 定 了 ＨＦ Ｒ Ｓ和 ＨＰ Ｓ出现 的相 应区域 。例如小啸鼠分布于南美， 其携带的 Ａ Ｎ Ｄ Ｖ可 以引起 Ｈ Ｐ Ｓ ， 因此 Ｈ Ｐ Ｓ 在这些 区域分布。黑线姬 鼠和 姬 鼠分 布 于 东 亚 和 欧 洲 ， 是 引 起 ＨＦ Ｒ Ｓ的 ＨＴ Ｎ Ｖ 和 Ｄ Ｏ Ｂ Ｖ 的 宿 主 。Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ病 例 也 主要 在 这 些 区域 报 道 。 Ｓ Ｅ Ｏ Ｖ存 在 于褐 鼠分 布 的国家 ， 而宿 主褐 鼠分 布广 泛 。 尽管如此 ， Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ主要存在于亚洲 国家¨ 。然而 ， 不 同地方引起 Ｈ Ｆ Ｒ Ｓ和 Ｈ Ｐ Ｓ 暴发的储存宿 主并不是 同 种 啮齿类 动 物 。１ ９ ９ ３年 Ｓ Ｎ Ｖ导致 ＨＰ Ｓ在 北美 洲暴 发， 其主要宿主为鹿 鼠（ 白足 鼠） ； Ｐ Ｕ Ｕ Ｖ导致欧洲 出 血热暴发 ， 其主要宿主为滨海岸 田鼠（ 岸属 ） ； 具条纹 的 田鼠 （ 姬 鼠属 ） 是 中 国最 重要 的病 毒 携 带 者 。 １ ９ ９ １
汉坦病毒(Hantavirus)研究进展
汉坦病毒(Hantavirus)研究进展
姚智慧
【期刊名称】《中国人兽共患病杂志》
【年(卷),期】1999(15)5
【总页数】5页(P75-79)
【关键词】汉坦病毒;传播途径;抗原性;致病性
【作者】姚智慧
【作者单位】中国药品生物制品检定所
【正文语种】中文
【中图分类】R373.32
【相关文献】
1.肾综合征出血热(HFRS)、汉坦病毒肺综合征(HPS)和汉坦病毒(HV)研究进展——记第八届国际HFRS/HPS和HV学术会议 [J], 李金林;凌佳馨;杨占秋
2.汉坦病毒和汉坦病毒感染研究进展 [J], 白雪帆;潘蕾
3.汉坦病毒感染致机体凝血反应相关分子变化的研究进展 [J], 陈文静; 杜虹; 王晓艳; 李璟; 连建奇; 陈延平; 王平忠
4.汉坦病毒的致病性和免疫应答以及抗病毒和疫苗研究进展——第四届汉坦病毒国际会议部份内容介绍 [J], 董关木;宋干
5.汉坦病毒及其相关疾病研究进展——第四届国际HFRS和汉坦病毒会议资料综述 [J], 张永华;陈化新
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医学微生物-(鲁凤民)30汉坦病毒
实验室检测
PCR等实验室检测方法可对汉 坦病毒进行检测和鉴定。
汉坦病毒的防治措施
1 隔离患者
疫情暴发期间需要对患者进行隔离治疗，以防止病毒扩散。
2 加强消毒
及时清洗手部以及日常物品等，减少病毒的传播。
3 疫苗接种
当前唯一的有效预防措施是疫苗的接种。大众需要认识到疫苗的重要性。
结论和要点
认识汉坦病毒
医学微生物-(鲁凤民)30汉 坦病毒
在本次的演讲中，我们将会深入探讨汉坦病毒。汉坦病毒的传染性很高，对 人类健康造成了极大的挑战。然而，通过更深入的了解，我们可以更好地制 定应对措施。
专家介绍
鲁凤民
中国医学科学院局长 / 福 建医科大学校长 / 中国工 程院院士
学术贡献
研究方向包括微生物基础 与应用、临床感染灾害防 范控制等。先后主持和参 与了包括国家973计划在 内的多项国家级科研项目。
荣誉奖项
曾获国家科技进步特等奖、 国家自然科学奖等多项荣 誉奖项。
汉坦病毒
什么是汉坦病毒
汉坦病毒是一种RNA病毒，被 认为是引起流感样病毒的重要 病原体。
危害
汉坦病毒可引起肺炎和败血症 等疾病，传染性极强，会对公 共卫生和社会安全手段是 疫苗接种。公众应积极接种疫 苗，提高自身的免疫力。
科学防治
• 汉坦病毒是一种RNA病毒
• 传染性极强，对公共 卫生和社会安全造成
• 威当胁 前唯一的有效预防 措施是疫苗的接种， 公众需认识到疫苗的 重要性
• 对疫情暴发期间需要 对患者进行隔离治疗， 以防止病毒扩散
• 加强消毒，及时清洗 手部以及日常物品等， 减少病毒的传播
• 研究和发展疫苗及药 物，加强科学研究与 预测
汉坦病毒的传播途径
汉坦病毒核蛋白核心区域高效表达及产物鉴定
汉坦病毒核蛋白核心区域高效表达及产物鉴定汉坦病毒是引起肾综合征出血热（HFRS）的主要病毒,汉坦病毒的基因由L、M、S 三个片段构成,分别编码病毒RNA聚合酶, 囊膜核蛋白G1和G2及核衣壳蛋白(简称核蛋白,Nucleocapsid Protein, NP)。
血清学研究表明,汉坦病毒核蛋白具有很强的抗原性和免疫原性,同时NP抗原可以与汉坦病毒内的多种血清型病毒的免疫血清产生交叉反应,表明汉坦病毒的NP具有共同的抗原决定族。
有鉴于此,我们对核蛋白的核心区域进行表达和纯化, 并用SDS-PAGE和Western-Blotting 对重组核蛋白进行鉴定，为其应用于诊断抗原提供技术依据。
1材料与方法1.1质粒与菌种汉坦病毒76-118株由本室保存, 表达质粒pGEX-4T-1,菌株BL21从上海申友公司购买。
1.2单克隆抗体和血清单克隆抗体由北京病毒所杭长寿教授和安徽医科大学倪大石教授惠赠；病人血清由上海市南汇区传染病医院提供。
1.3引物的设计与合成上游：GAC CAG GAA TTC GCC CAT GAG GGT CAA TTA G ；下游：TCT GAA CTC GAG GAT GAT GCT CAG CCA GTC T。
其PCR产物长度为334 bp,产物上游酶切位点为EcoRI;下游酶切位点为XhoI。
1.4模板制备从HTNV 76-118株感染的Vero-E6细胞中提取总RNA作为模板。
用引物扩增出汉坦病毒S片段核心区域334 bp的片段,通过PCR反应获得目的片段,反应步骤如下：每10 D引物溶于200 μL水中,模板取1μL溶于10 μL水中, 加样：模板 1 μL, 10X Buffer 5 μL, Mg2Cl (25mM) 3 μL,4dNTP (10 mM)1 μL,Primer-UP 1 μL, Primer-Down1 μL, Taq (5 U/μL)0.5 μL, 加水至50 μL。
大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒技术研究
大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒技术研究大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒技术研究大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒实验原理大鼠汉坦病毒(HVELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠汉坦病毒(HV捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠汉坦病毒(HV呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为：详见说明书；2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
汉坦病毒DNA疫苗
小结
汉坦病毒 Gl、G2和N蛋白均能引发免疫 应答，但这些蛋白在免疫保护中的具体 作用仍有待研究。
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第二章
DNA疫苗的研究
2.1 DNA疫苗 2.2 多表位DNA疫苗
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为什么研发DNA疫苗？
02
传统的疫苗研制方法具有许多无法克服 的缺点：
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研制周期长
疫苗只对某一血清型或亚型 的病原体有效，而不能抵抗
(HTNV)、汉城病毒(SEOV)、普马拉 病毒(PUUV)、多不拉伐病毒
基因组
（DOBV)。
病毒核酸为单股负链RNA，分L、M、S三
个片段。L片段编码RNA依赖的RNA聚合酶；
M片段编码囊膜糖蛋白G1和G2；S片段编
码核心蛋白N。
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主要抗原性片段
一般认为能诱发保护性体液免 疫应答的主要抗原成分是包膜 糖蛋白 Gl和 G2，它们可诱导 中和抗体产生（M）。 S基因编码病毒的N蛋白是成熟 病毒组装不可缺少的结构蛋白， 普遍认为 N蛋白的保护作用是 介导细胞免疫。
多表位DNA嵌合疫苗的出现， 给研究者指明了一条极具潜 力研究方向。人类终将取得 预防HFRS战争的最终胜利。
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汉坦病毒DNA疫苗 研究进展
目录页
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1.汉坦病毒
2.DNA疫苗研究
3.总结和展望
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第一章
汉坦病毒
1.1汉坦病毒基因型 1.2汉坦病毒基因组及主要抗原性 片段
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基因型
汉坦病毒可两种：1.汉坦病毒肺综合
征(HPS)，2.汉坦病毒肾综合征出血
汉坦病毒结构蛋白及其表位生物学活性的研究进展
的 研 究 进 展
王建 文 ，赵玉军 ，宋 卓２ 林 颖。
（． 阳农业 大学畜牧兽 医学院，辽 宁 沈 阳 １ ０６ ； １沈 １１１ ２ 辽宁省 动物卫生监督 管理局 信 息中心，辽宁 沈 阳 １ ０ ０； ． １０３ ３ 辽宁省沈 阳市 出入境检验检 疫局 ，辽 宁 沈 阳 １ ０ １） ． １ ０６
ｆｅｕ ｉ ｓ， Ｓ Ｏ ） 普 马 拉 病 毒 （Ｐ ｕ ｌ Ｓｏｌｖ ｕ ｒ Ｅ Ｖ、 ｕ ｍａａ 测＿ ５ ＿ ，今后一定还可 以发现更 多种 类的 Ｈ ｖ。
ｖ ｕ ， Ｐ Ｕ 、 希 望 山 病 毒 ｆ ｒｓｅｔＨｌ ２ Ｈ ｉｓ Ｕ Ｖ １ ｒ ｏｐ ｃ ｉ Ｐ ｌ Ｖ基 因组 的结 构 特 征
类 以发烧 、出血 和肾功能损害 为特征 的急性传染 亚科 的啮齿类动物 体 内 。 鼠亚科和 田鼠亚科主
病 ， 病 死 率 介 于 ０１ ｌ％； ９ ３年 首 次报 道 要 分布 在亚欧 大陆 ，可 引起 Ｈ Ｒ 。仓 鼠亚科主 ． ％～ Ｏ １９ ＦＳ ＨＳ Ｐ ，主 要 引起 呼 吸 衰 竭 ，病 死 率 高 达 ４ ％ ～ 要 分布在美 洲 ，引起 Ｈ Ｓ Ｏ Ｐ 。由于 Ｈ Ｖ具有 宿主依
［ 收稿 日期］０ ７ ０ 一 １ ２ ０ — ２ Ｏ ［ 作者 简介］ 王建文 （９ ０ ） 男 ， 阳农业 大学预防 兽医专业研 究生 ， １８－ ， 沈 主 要从事 畜禽病毒分子生物学研究 ［ 通讯作者］ 玉军 ， 阳农业大学畜牧兽医学 院副 院长 、 赵 沈 教授
抗体 。文章 对 几种 结构蛋 白及其表 位 进行 了论 述 ，希望可 以为设 计 新型 疫苗 、寻 找 的临床治疗方法提供参考。 Ｃ
一 ．
汉坦病毒结构蛋白表位研究进展
收稿日期:2004203211;修回日期:2004206217 作者简介:罗保君(19692),女,博士,助理研究员,主要从事病毒分子生物学研究。
汉坦病毒结构蛋白表位研究进展罗保君综述;周育森审校(军事医学科学院微生物流行病研究所,北京 100071)摘 要:汉坦病毒主要引起人类的两种疾病:肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,汉坦病毒基因组由L 、M 、和S 三个片段组成,分别编码病毒的RNA 聚合酶、囊膜糖蛋白G1、G2和核衣壳蛋白NP 。
本文综述了核衣壳蛋白、囊膜蛋白G1和G2的B 细胞表位和CT L 表位的研究进展。
关键词:汉坦病毒;结构蛋白;表位研究中图分类号:R373.3+2 文献标识码:A 文章编号:100525673(2005)0120055203 汉坦病毒(Han tavirus ,HV )主要引起人类的两种疾病:肾综合征出血热(He m orrhag ic Fever w ithR ena l S ynd ro m e ,HFRS )和汉坦病毒肺综合征(Han tavirus Pu l m ona ry S ynd ro m ,HPS )。
HFRS 是一类以发烧、出血和肾功能损害为特征的急性传染病,病死率介于0.1%～10%;1993年首次报道的HPS,主要引起呼吸衰竭,病死率高达40%～60%。
依据血清学方法,将与人类疾病有关的汉坦病毒属病毒分为几个抗原性明显不同的血清型,即汉滩病毒(Han taan virus,HT NV )、汉城病毒(S eou l virus ,SE OV )、普马拉病毒(Pumm a la virus ,P UUV )、希望山病毒(P rospect H ill virus ,PHV )、多布拉伐病毒(D obrava virus ,DOBV )、泰国病毒(Tha iland V irus ,Thai )、新诺柏病毒(S in N o m bre virus ,S NV )和A ndes virus (ANDV )等几个血清型。
两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究
Ｖ ｒ一 Ｅ （ 洲 绿 猴 肾 ） 胞 ， 本 室 既 往 保 ｅ０ ６ 非 细 为 存， 实验 中所用 细胞代 数不 超过 ３ 。培养条 件 为 ６代
含不 同浓 度胎 牛血清 （ｅ ｌ ｏｉｅｓＦｍ， Ｂ ） ｆ ａ ｂ ｖ ｅｕ Ｆ Ｓ 的完 ｔ ｎቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
全 Ｒ Ｍ － １４ Ｐ Ｉ ６０培 养 基 。Ｆ Ｓ及 Ｒ Ｍ － １４ Ｂ Ｐ Ｉ ６０培 养
基 均购 自美 国 Ｇ ｂｏ公 司。 ｉｃ
１３ 抗体 ．
抗汉坦 病 毒 单 克 隆抗 体 （ Ａ ）１ ８为 本 室 制 ｍ ｂ Ａ 备并 保存 ， Ｒ 一 １ ８为 同批 次 制 备 的 １ ８抗 体 与 Ｈ Ｐ Ａ Ａ Ｈ Ｐ的结合 物 ， Ｒ 可识 别 汉 坦 病 毒 特 异 抗 原 位 点 ， 具
⑥
２ １ Ｓ ｉ ｅｈ Ｅ ｇ ． ０ ２ ｃ Ｔ ｃ． ｎｒ ． ｇ
医药 卫生
两 种 方法 检 测 汉 坦病 毒 滴 度 的 比较 研 究
白 露 叶 伟 于蒙蒙 张 亮 于 澜 刘梓谕 吴兴安
（ 四军 医 大 学 微 生 物 学教 研 室 ， 安 ７ ０ ３ 第 西 １０２）
因此本 文 以空 斑形 成 实 验 结果 为 对 照 组 ， 试 尝
２１ 年 １ １ 收到 ０ ２ 月 ２日 国家自 然科学基金（ ３ ０ ，９ １ ， ３７ ４ ００ ８ ３８１ ７ 、 ００ ３）陕西省社发攻关项 目 ２１￣ — ４２１ — ９ ， ０ （ ０ １ ７ ， ０ １ ）资助 ０ １ ０ ￣１ ６ 第 一作者简介 ： 白 露 ， 。第 四军医大 学微生物 学教研 室硕 士研 女
抗体标记 荧光 素或辣根过氧化物酶（ Ｒ ） 建立直接免疫荧光法和双抗体夹心 Ｅ ＩＡ法检测上述 细胞 中的病 毒抗 原 ， ＨＰ， ＬＳ 并比较 两者 的检测灵敏度。用空斑形成实验结果作为金标准， 以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果 ：用 两种 检
汉坦病毒结构蛋白抗原表位的研究进展
Ｈ ｒ ｇ等 ｌ 通过 中 和 实 验 和 抗 原 检 测 鉴 定 了 ２ ｏｉ ｎ ４ Ｊ
株 病 毒 逃逸 单 克 隆 抗 体 突 变 株 （ Ｒ ） 一 株 单 克 隆 ＭＡ ｓ ， 抗 体 针 对 Ｇ ， 一 株 鼠平 （ ａ ｋｖｌ） 克 隆抗 体 是 ２另 ｂ ｏ 单 ｎ ｅ 针对 Ｐ Ｕ Ｕ ｖ的 Ｓ ｔａ ｏ株 的 Ｃ 。Ｇｌ 突 变 是 由 Ａ ｏｋｍ ｌ 的 — Ｔ， 致 位 于 ２ ２氨 基 酸 的氨 基 酸 由天 门冬 氨 酸 变 为 导 ７ 缬 氨 酸 ， 强 了这 一 区域 的疏 水 性 。 Ｃ 增 ２的 突 变 是 由 Ｃ Ｔ， 致 位 于 ９４氨 基 酸 的 氨 基 酸 由 丝 氨 酸 变 为 — 导 ９ 疏水性 强 的苯丙 氨 酸 ， 致 Ｇ 以 ２的 二 级 结 构 发 生 改 变 。此 突 变 与 一 糖 基 化 位 点 相 邻 。用 合 成 此 肽 免 疫 的 鼠血 清 不 能 识 别 原 始 蛋 白 ， 明 此 表 位 为 非 线 性 表 的和 （ ） 疏 水 性 的 ， 者 Ｃｌ Ｃ 或 是 或 、 ２单 克 隆抗 体 与 糖
克 隆 抗 体 鉴 定 其 血 清 型 特 异 的 表 位 位 于 １５～４ ９ ５ ２ 氨基酸 ， 为构 象依 赖 性 表 位 。用 截 短 表 达 酸 ） 测 （Ｆ 病 人 的 恢 复 期 血 清 ， 区 ２ 检 ＩＡ） 可
和 ＳＯ Ｅ Ｖ感 染 。
（ Ｆ ２ 或 汉 坦 病 毒 肺 综 合 征 （ ） 病 原 。ＨＶ的 ＨＲ） ＨＩ 的 Ｓ
３种 结 构 蛋 白 ： 衣 壳 蛋 白 （ Ｐ 、 膜 糖 蛋 白 （ Ｐ或 核 Ｎ ）包 Ｇ Ｇ） 和 Ｇ ， 别 由基 因 组 中 的 Ｓ片 段 和 Ｍ 片 段 编 Ｇ１ ２分 码 。有 关 Ｉ － Ｉ 构 蛋 白的 抗 原 位 点 或 表 位 的 结 构 及 Ｖ结 其 基 因 定 位 ， 于 阐 明 Ｈ 结 构 蛋 白 的 结 构 与 功 能 对 Ｖ 及 Ｉ － Ｉ Ｖ基 因 工 程 疫 苗 研 制 至关 重 要 。 Ｉ 抗 原 表 位 － Ｉ Ｖ
汉坦病毒感染的实验诊断研究进展
汉坦病毒感染的实验诊断研究进展
陆祥彬;诸葛洪祥
【期刊名称】《中国热带医学》
【年(卷),期】2007(7)9
【摘要】汉坦病毒所引起的出血热肾综合征和汉坦病毒肺综合征是一类以发热、出血、肾损害或肺水肿为主要临床特征的急性传染病。
该病的疫源地遍及世界各地,我国是世界上受其危害最严重的国家,在我国流行的主要为HTN和SEO两型。
目前对该病毒所致疾病仍无特效疗法,因此及时发现和诊断汉坦病毒感染显得尤为重要。
本文对汉坦病毒感染的实验诊断研究进展作一简要综述。
【总页数】3页(P1685-1687)
【关键词】汉坦病毒感染;实验诊断
【作者】陆祥彬;诸葛洪祥
【作者单位】苏州大学独墅湖校区病原生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R373.9
【相关文献】
1.汉坦病毒感染的实验室诊断技术 [J], 刘京梅
2.血流感染的实验室分子诊断研究进展 [J], 陈明慧; 陈莎燕; 房杰; 孙兰菊; 常艳敏
3.艰难梭菌感染实验室诊断方法的研究进展 [J], 吴伶俐;李楣
4.尿路感染的实验诊断和定位诊断的研究进展 [J], 丁西满;王世然
5.沙眼衣原体泌尿生殖道感染的实验室诊断研究进展 [J], 盛柏祥
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河北省人感染汉坦病毒M片段基因特征研究的开题报告
河北省人感染汉坦病毒M片段基因特征研究的开题报告
1. 研究背景及意义
汉坦病毒是一种单股RNA病毒，属于科罗纳病毒家族。
自2002年起，汉坦病毒已经引起了多次全球性流行病事件，包括严重急性呼吸综合症（SARS）和中东呼吸综合症（MERS）。
2020年12月起，汉坦病毒再次在中国湖北省武汉市暴发，引起了全球警惕。
目前已知该病毒的感染症状包括发热、咳嗽、呼吸急促等，严重者可能导致
多器官衰竭和死亡。
本研究旨在探究河北省人汉坦病毒感染的M片段基因特征，对该病毒的传播、
防治等问题提供理论依据。
2. 研究内容与方法
本研究将采用PCR扩增和Sanger测序技术，对河北省感染汉坦病毒的患者样本中的M片段基因进行测序，并对测序结果进行比较分析。
具体步骤如下：
（1）收集河北省感染汉坦病毒的患者样本；
（2）提取患者样本中的病毒RNA；
（3）使用PCR扩增技术扩增M片段基因区域；
（4）对PCR产物进行凝胶电泳和纯化；
（5）对纯化后的PCR产物进行Sanger测序；
（6）对测序结果进行比较分析，包括提取序列、进行序列比对、构建进化树等。
3. 预期结果与结论
本研究预期可以得到河北省汉坦病毒感染的M片段基因序列，探究河北省汉坦
病毒的遗传特征，为研究汉坦病毒的传播途径、流行规律、防治措施等提供亚洲区域
特异性数据支持。
同时，本研究将为汉坦病毒等冠状病毒研究提供重要参考资料。
4. 预期创新点
本研究旨在分析河北省汉坦病毒感染的M片段基因特征，对该病毒的流行趋势、防治等问题提供理论依据，具有一定的创新性和前瞻性。
汉坦病毒
研究进展
0 1
研究方法及 成果
0 2
病毒基因分 析
0 3
宿主基因分 析
0 4
疫苗与抗病 毒研究
0 6
病理与免疫 反应
0 5
分子生物学 和细胞生物 学
F.Elgh等采用PUU病毒重组核蛋白作为抗原，与乳胶连接进行乳胶微粒凝集试验，用于汉坦病毒病的快速血 清学诊断，与采用PUU病毒重组核蛋白作为抗原的ELISA相比，特异性为90%，敏感性为94%。
A.Vaheri等的研究表明，西伯利亚旅鼠分离的TOP病毒与东方田鼠分离的KBR病毒S片段同源性核苷酸水平为 82%，氨基酸水平为96%；与欧洲棕背分离的PUU病毒S片段同源性核苷酸水平为77%，氨基酸水平为87%。系统发生 分析显示3种病毒具有共同的起源，与相应宿主动物细胞色素B基因系统发生分析结果相一致，表明3种病毒进化 过程中有在宿主动物之间进行的水平传播。其中TOP病毒M、S片段3’-NCR最长，可能在3种汉坦病毒中起源最早。
汉坦病毒实验诊断方面的研究，主要集中于重组抗原的应用和实验诊断方法的快速、敏感和特异。
多项报告对HFRS和HPS的后遗症进行了调查，研究表明两种疾病的恢复病人与健康人比较，分别存在肾脏或 肺功能的异常。M.Howard等对患有HPS的孕妇进行了调查，结果表明患有HPS的孕妇预后与其他HPS患者相同，患 有HPS孕妇的胎儿与其他患有成人呼吸窘迫综合征的孕妇的胎儿差异不大，研究中没有发现SN病毒在人类垂直传 播的现象。
汉坦病毒等从韩国绒鼠（Eothenomys regulus）分离了两株PUU相关病毒，命名为Muju（MUJ）病毒。两株 病毒G2基因241bp片段序列存在1.2%差异，G2基因241bp片段和S基因208bp片段与PUU病毒相应片段序列的同源性 分别为79.5%～83.4%和80.3%～81.2%。
汉坦病毒检测方法研究进展
·实验技术及其应用·汉坦病毒检测方法研究进展刘师文，龚甜，熊英江西省疾病预防控制中心，江西 南昌 330029摘要：汉坦病毒是引起肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征的病原体，发病率和死亡率高，严重危害人民健康和生命 安全。
检测方法的研究对汉坦病毒引起的疾病的诊断和防控具有重要意义。
目前汉坦病毒的检测方法主要有 E L I S A 和 P CR 方法，新的检测方法也不断有报道。
本文对汉坦病毒检测方法研究进展进行综述。
关键词：汉坦病毒；检测；酶联免疫吸附试验；聚合酶链式反应 中图分类号：R 181.3+6文献标志码：A文章编号：1003-8507（2014）13-2420-03Research progress on the detection methods of hantavirusL I U Sh i -we n , GONG T i an , XI ONG YingJiangxi Provincial Center for Disease Control and Prevention, Nanchang, Jiangxi, 330029, ChinaAbst r act : H an t avi r u ses cou l d cau se t w o h i gh l y f atal d i seases, h em or r h agi c f ever w it h r en al synd r om e and han t avi r u s pu l m on ar y s ynd r o m e , wh i ch po s e a s e ri ou s t h r ea t t o hu m an hea lt h and s a f e t y due t o t he h i gh e m e r gence and m o rt a lit y . T he de t ec ti on m e t hod s ar e ver y i m p or t an t f or d i agn osi s, con tr ol and p r even ti on of t he cor r espond i ng d i seases. A t p r esen t , E L I S A and P CR m et hod s ar e m a i n l y u s ed i n han t av ir u s de t ec ti on , wh il e ne w de t ec ti on m e t hod s a l s o have been r epo rt ed . T h i s r ev i e w i s t o s e r ve a s an up t o da t e accoun t o f t he r ecen t p r og r e ss i n t he de t ec ti on m e t hod s o f han t av ir u s . Ke ywords: H an t av ri u s ; De t ec ti on ; EL I SA; P CR汉坦病毒 （H an t av i r u s ，H V ） 属布尼亚病毒科（B unyav i r ida e ） 汉坦病毒属 （Hantavi r us ）， 是有包 膜、分节段的单股负链 RNA 病毒。
两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究
两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究白露;叶伟;于蒙蒙;张亮;于澜;刘梓谕;吴兴安;徐志凯;张芳琳【摘要】比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别.用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶( HRP),建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA 法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度.用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异.结果:用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高(P＜0.01).说明ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单、可重复性好、便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测.%To compare the sensitivity between double antibody sandwich ELISA and direct immunofluorescence assay ( DFA) for detection of hantavirus, Vero-E6 cells were infected by Hantaan virus strain 76-118. Cell climb ing slices or freeze-thaw cell culture supernatant was prepared and fluorescein labeled anti-hantavirus monoclonal antibody or horseradish peroxidase ( HRP) labeled monoclonal antibody was used to establish method of double-an tibody sandwich ELISA or direct IFA to detect viral antigen in these cells, and plaque reduction nuetralization test was used as control. And then the optimal detection times were identified and the sensitivity of the two methods was compared. It is resulted that virus titer detected by double-antibody sandwich ELISA was obviously higher than that of DFA (P <0. 01) , and the time point when the virusantigen was detected is more earlier in ELISA than in IFA. It is conclused the sensitivity of double-antibody sandwich ELISA was better than that of direct IFA in detecting hantavirus. And the former method was repeatable and easier to manipulate in large scale. The double-antibody sandwich ELISA is optimal methods for detecting hantavirus titer.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2012(012)009【总页数】5页(P2137-2141)【关键词】汉滩病毒;病毒滴度;双抗体夹心ELISA;直接免疫荧光【作者】白露;叶伟;于蒙蒙;张亮;于澜;刘梓谕;吴兴安;徐志凯;张芳琳【作者单位】第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032;第四军医大学微生物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R373.2汉坦病毒(hantavirus)属于布尼亚病毒科，是一种有包膜的单股负链RNA病毒［1］。
汉坦病毒感染的血清学分型研究进展
文章编号:1001-0580(2002)12-1524-03=综 述>汉坦病毒感染的血清学分型研究进展中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所(北京100052) 王世文 解燕乡 杭长寿中图分类号:R37319文献标识码:A汉坦病毒(HV)属布尼亚病毒科(Buny av iridae)汉坦病毒属(Hantavirus),为分节段的单股负链RN A 病毒,病毒基因组有3个片段组成,大(L )片段(615kb)编码病毒R NA 依赖的R NA 多聚酶,中(M )片段(316kb)编码病毒糖蛋白G 1和G 2的前体糖蛋白,小(S)(117~210kb)编码病毒的核衣壳蛋白(NP)112。
其中HV 的包膜糖蛋白具有血凝活性,可诱导pH依赖性的细胞融合,G1和G2还具有中和位点;而N P 在HV 感染中,尤其是在病毒的增殖中发挥着重要作用,其无论在抗原性还是在遗传上都更为保守,现主要用作诊断抗原。
人类感染HV 主要导致三种严重疾病的发生:肾综合征出血热(HFRS)、流行性肾病(N E)和汉坦病毒肺综合征(HPS)。
近年来,随着遗传学、分子生物学的不断发展,HV 的基因结构和功能研究取得了较快的发展,同时在此基础上血清学分型的研究工作也取得了一定的进展,下面就HV 血清学分型的研究进展作一综述。
HV 感染的血清学分型多采用空斑减少中和试验(PRN T )的方法,该试验结果稳定、可靠,目前仍然是HV 感染血清学分型的经典方法,但该试验操作繁琐、所需时间也较长,无法满足肾综合征出血热临床诊断及分型的需要;之后人们利用HV 包膜糖蛋白所具有的血凝活性,建立了血凝抑制试验(HI),由于不同型别的血凝素产生不同型别的血凝抑制抗体,因此可对病人血清进行分型,这在实际应用中取得了一定的分型效果,但是由于不同地区汉滩病毒(HT N V)变异较大(可有若干亚型),用这一地区一个HT N V 所制血凝素去检测其它地区别的HT NV 血凝抑制抗体不一定合适,所以有时不能很好地将HT NV 和汉城病毒(SEOV )感染区分开来。
2018年第一节汉坦病毒-文档资料
微生物特性
病毒呈球形，直径90～120nm，核酸为 单股正链RNA，核衣壳为20面体立体对 称，外有包膜表面有血凝素。能用鸡 胚分离传代。1-4日龄乳鼠对本病毒有 很高的感受性，可用于病毒分离及传 代。抵抗力与HFRSV相似。其抗原性与 HFRSV无交叉反应。
微生物检验Байду номын сангаас
主要是进行病毒分离和应用ELISA、 免疫荧光法检测中和抗体、补体结 合抗体及血凝抑制抗体，常用于流 行病学调查。
微生物检验
(一)病毒分离与抗原检查
采集病人血液及尸体标本，或采集疫区 鼠肺标本，经适当处理后，接种于人胚肺 二倍体细胞或人肺传代细胞中培养。连续 传3—5代，阳性细胞数增多，制备待检病 毒细胞抗原片。用已知恢复期病人血清， 采用免疫荧光法、免疫酶染色法检测抗 原。新分离到的病毒也可通过电镜观察 鉴定其形态特征。
第二节 新疆出血热病毒
在分类上属于布尼雅病毒科内罗病 毒属的克里米亚-刚果出血热病毒血 清组成员。在我国是从新疆塔里木 盆地出血热病人以及硬蜱中分离获 得，故名新疆出血热病毒。
是自然疫源性疾病。有严格的地区性 和明显的季节性。野生塔里木鼠以及 山羊、骆驼和马等是主要储存宿主， 硬自传播媒介。人被带病毒蜱叮咬后 发病，表现为发热,全肌肉疼痛、中 毒症状和出血。但无肾综合征。病死 率≤ 10％—30％。病后获得持久免 疫 力。
(二)核酸检查
近年来，许多学者根据汉坦病毒基 因组核苷酸序列设汁特异性引物， 应用RT-PCR技术测病毒核酸。此法 快速、敏感、准确。
(三)抗体检测 用感染该病毒的动物组织或培
养细胞制成已知抗原，以免疫荧光 法或免疫酶染色法检测患者血清中 特异性IgM或IgG抗体。单份血清lgM 抗体阳性或双份血清IgG抗体效价增 高4倍或 4倍以上者，有诊断意义。 应用敏感性与特异性均高的抗体捕 获ELISA法也可检测特异性IgM，适 用于早期诊断
青岛市流行性出血热的汉坦病毒检测和其基因型的研究
青岛市流行性出血热的汉坦病毒检测和其基因型的研究朱元祺;贾楠;田清武;吴国才;董丹丹;张会;李延年【摘要】目的探讨引起青岛市流行性出血热的汉坦病毒(Hantavirus,HV)的感染类型,以明确基因亚型和进化特点.方法免疫胶体金法检测126份临床怀疑急性期病人血清中汉坦病毒的抗体.RT-PCR 扩增病毒的S 基因段,并经测序获得基因序列.病毒的核苷酸序列分析和构建系统进化树应用DNASta软件,并以确定病毒的型别.结果 126份血清标本中,112份汉坦病毒IgM和(或)IgG抗体阳性.经RT-PCR 扩增获得7株汉坦病毒S基因序列,与汉滩型(Hantaan virus,HTN)和汉城型(Seoul virus,SEO)毒株比较,其中2株为HTN型,5株为SEO型,相互间序列达到68%-98.9%同源性.结论引起青岛市流行性出血热的汉坦病毒为汉滩型和汉城型的混合感染,以汉城型为主.%Objective To explore the genotype of hantavirus causing hemorrhagic fever with renal syndrome patients in Qingdao district,and to affirm genetic subtypes and its evolution features.Methods Hantavirus IgM ,IgG antibodies were detected by Diagnostic kit for antibody to Hantavirus (Colloidal Gold).The complete S segments were amplified by RT-PCR and sequenceing.The sequence percent identity and the phylogenetic tree were done by DNAStar Software so as to clarifying the characteristics of Hantavirus.Results Out of 126 blood samples collected from suspected acute hemorrhagic fever with renal syndrome patients ,112 samples were positive for IgM and/or IgGpared with standard strains of Hantavirus (HV),the sequences analysis and phylogenetic tree indicated that the seven S genes amplified in antibody positive samples were grouped into two Hantaanvirus (HTN) ,five Seoul virus(SEO),respectively. The sequence percent identity of all the 7 S genes were 68-98.9% homology.Conclusion Our results showed that there were two subtypes of HV(HTN and SEO) infections in Qingdao district and that SEO may be the dominant common hantanvirus.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2017(021)009【总页数】3页(P1504-1506)【关键词】汉坦病毒;S基因;感染;汉滩型;汉城型【作者】朱元祺;贾楠;田清武;吴国才;董丹丹;张会;李延年【作者单位】青岛大学附属医院检验科,山东青岛266003;青岛大学医学院;青岛大学附属医院检验科,山东青岛266003;青岛大学附属医院检验科,山东青岛266003;青岛大学医学院;青岛大学医学院;青岛大学附属医院检验科,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】R514.5汉坦病毒(Hantavirus，HV) 基因组由大(L)、中(M)、小(S)三个节段组成，可引起人类流行性出血，即肾综合征出血热( HFRS)。
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出” 现象 ， 出现 多种宿主携 带 同一病毒 或一种宿主携 带 多型
病 毒 的 情 况 。如 黑 线 姬 鼠 和 褐 家 鼠 都 能 携 带 汉 滩 病 毒 （ Ｔ ； 林姬 鼠 、 家鼠 都 能 携 带 Ｄ ｂｖ 毒 （ Ｏ ） Ｓｎ Ｈ Ｎ） 小 小 ｏａｅ病 Ｄ Ｂ ；ｉ
汉坦病毒肺综合征 （ Ｐ ） Ｈ Ｓ 的病原体 ， 于布尼 亚病毒科汉坦 属
制 尚不清楚 。如 Ｍ Ｒ ＩＥ Ａ ＴＮ Ｚ等… 在 西南 大西 洋地 区的
一
次汉坦病毒肺综合征爆 发 中发现病 源安 第斯山病毒 能在
７ ， ％ 疾病 发生 于汉坦河流 域． 故以汉坦命 名。１７ ９ ６年 韩 国 李镐汪教授 等首先从黑线姬鼠肺组织中分离到 了汉坦病毒 ，
随后 各 国科 学 家相 继 分 离 出 汉坦 病毒 。 汉 坦 病 毒 属 于 布
ＨＲ Ｆ Ｓ主要 表 现 为 肾病 综 合 征 和 出血 ， 高 热 、 血 压 、 以 低 出血 、 少尿 或 多尿 等 肾功 能 损 害为 特 征 。ＨＦ Ｓ主 要 发 生 在 Ｒ
亚 洲 和 欧 洲 。全 球 每 年 Ｈ Ｐ Ｆ Ｓ的 病 例 大 约是 １００ ０例 …。 ５ ０
常作 为分 型 的 比 较标 准 。 基 因组 片段 两末 端 序 列 保 守 ， 且 反 向 互补 ， 成 锅 柄 样 结 构 ， 图 １５。 汉 坦 病 毒 在 进 化 形 见 Ｌ Ｊ 过 程 中容 易发 生 变 异 ， 目前 已经 发 现 了 ３ ０多 种 血 清 型 或 基
・
２ ６・ ４
广 东 医学
２１ ０ １年 １ 第 ３ 月 ２卷 第 ２期
Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ａ ｇ ｏ ｇＭ ｅｉ ｌ ｏ ｒａ Ｊｎ ２ １ ，Ｖ １ ３ ，Ｎ ．２ ｄｃ ｕ ｎ ｌ ａ ． ０ １ ｏ． ２ ｏ ａＪ
综 述
・讲 座
汉 坦病 毒 及其 检 测方 法 的研 究 进展 木
测技 术 综述 如 下。
Ｎ ｍ ｒ 病毒 （ Ｎ） ｏ ｂｅ ｓ 不仅 能感 染鹿 鼠还能感 染沙漠林鼠 Ｊ 。
在 布 尼 亚 病 毒 科 中 ． 坦 病 毒 是 唯 一 的 由非 节肢 动 物 传 播 的 汉
病 原 体 。汉 坦 病毒 通过 ３类 传 播 途 径 传 播 ： 物 源性 传 播 、 动 螨 媒 传 播 和 垂 直 传 播 。 人 类 主 要 是 通 过 吸 入 受感 染 动 物 的 排 泄 物 、 液 形 成 的 气 溶 胶 或 受 到 鼠 类 的 抓 、 而 获 得 感 唾 咬
病毒属 。汉坦病毒在全球 范围内都有分布 ， 国是 受汉坦病 我
毒 危 害最 严 重 的 国 家 ， 界 上 ９ ％ 以上 的 Ｈ Ｒ 世 ０ Ｆ Ｓ病 例 发 生 在 我 国 。 汉坦 病 毒 的检 测 方 法 已经 发展 得 相 对 成 熟 ， 本 包 Ｊ 基 括 了布尼 亚病 毒 检 测 的 常 用 方 法 。 本 文 就 汉 坦 病 毒 及 其 检
１ 概 述 １５ — １５ ９ １ ９ ３年 朝 鲜 战 争 期 间 ， ０ 多名 士 兵 感 染 了一 ３００
种 急 性 发 热 伴 肾 功 能 衰 竭 以致 休 克 的 疾 病 ， 死 率 达 到 了 病
染 Ｊ 最近 也 有 报 道 称 汉 坦 病 毒 能在 人 与
２ 汉 坦 病 毒 所 致疾 病
不 同类 型 的 汉 坦 病 毒 能 引起 疾 病 的 类 型 和 严 重 程 度 不
尼亚病毒科 家族 ， 为有 包膜 的 、 分节段 的、 股 负链 Ｒ Ａ病 单 Ｎ
毒 。 病毒 粒 子 大 小 约 １０ ｎ 为 椭 圆 形 。 其 基 因 组 由 小 ２ ｍ， （ ） 中（ 和 大（ ） ｓ 、 Ｍ） Ｌ ３个 片段 组 成 ， 别 编 码 病 毒 的 核 衣 壳 分
中国疾控 中心有关部 门从 患者 身上 分 离出一种 新型布尼 亚
病毒 。布 尼 亚 病 毒 （ ｕ ｙｖ ｕ） ｂｎａｉ ｓ 自然 感 染 见 于许 多脊 椎 动物 ｒ （ 、 等） 节肢动物（ 、 、 鼠 兔 和 蚊 蜱 白蛉 等 ） 感 染 人 类 后 可 引起 ， 多种 急性 出血 热 ， 立 夫特 谷 热 和 克 里 米 亚 一 刚 果 出血 热 。 如 汉坦 病 毒 （ａ ｔ ｉ ｓＨ 是 引起 肾综 合 征 出血 热 （ Ｆ Ｓ 和 ｈｎａ ｒ ， Ｖ） ｖｕ ＨＲ）
蛋 白（ Ｐ 、 蛋 白（ Ｐ Ｇ Ｎ ）糖 Ｇ ） Ｉ和 Ｇ 、 Ｎ 聚 合 酶 。Ｓ段 与 Ｌ段 ２Ｒ Ａ 相 对保 守 ， Ｍ 段 特 别 是 Ｇ 段 在 不 同 的 型 别 间 变异 较 大 ， 而 １
同， 有些类型的汉坦病毒甚至不致病。汉坦病毒 可以引起 两
种 严 重 的 、 常对 人 类 致 死 性 的疾 病 ， Ｈ Ｒ 通 即 Ｆ Ｓ和 Ｈ Ｓ 两者 Ｐ， 均 为 自然 疫 源性 疾病 ， 伤 部位 和 临床 特 征 明 显 不 同。 损
高云 ，陈嘉 昌 ，彭焕 玉 ，朱振 宇
中 山大 学 中山 医学 院 （ 州 ５ ０８ ） 中 山大 学达 安基 因诊 断 中心 （ 州 ５ ０６ ） 广 １０ ９ ； 广 １６ ５ 今 年 ９月份 在 河 南 等地 发 生蜱 虫叮 咬 致 多人 死 亡事 件 ， 病 毒 的主 要 宿 主 。 汉 坦 病 毒 有 其 相 对 严 格 、 定 的 宿 主 ， 稳 一 种 类型 的汉 坦 病 毒 一 般 在 一 定 的 地 区 只 有 一 种 自 然 宿 主 。 因此 ， 主 的种 类 基 本 上 决 定 了其 所 携 带 的 汉 坦 病 毒 的 型 宿 别 ， 同时也存 在 着病 毒 与宿 主不 一致 而产 生 的宿 主 “ 但 溢
因型 的 汉 坦 病毒 。
引起 人 类 ＨＦ Ｓ的 汉 坦 病毒 基 因 型主 要 有 汉 滩 病 毒 （ Ｔ ， Ｒ Ｈ Ｎ）