黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的研究

黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的研究

发表时间：2013-05-21T10:55:05.153Z 来源：《中外健康文摘》2013年第14期供稿作者：严金玲严文华李斌曾洁钟声杨人泽

[导读] 实验表明：黄花倒水莲提取物既能影响内源性凝血途径，又能作用于外源性凝血途径。

严金玲严文华（通讯作者）李斌曾洁钟声杨人泽（赣南医学院第一附属医院江西赣州 341000）

【摘要】目的观察黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的影响。方法采用体外血浆法测定药物对凝血作用的影响。采用凝血因子分析仪测定血浆纤维蛋白原、优球蛋白溶解时间、活化部分凝血活酶时间。结果黄花倒水莲提取物能明显缩短血浆凝血酶时间；减小凝血酶原时间；升高血浆纤维蛋白原和延长优球蛋白溶解时间；缩短活化部分凝血活酶时间。结论黄花倒水莲提取物具有明显的促凝血作用，其促凝血作用机制可能与升高血浆纤维蛋白原和优球蛋白溶解时间；降低活化部分凝血活酶时间有关。

【关键词】黄花倒水莲凝血酶时间(TT) 凝血酶原时间(PT) 血浆纤维蛋白原(Fib) 优球蛋白溶解时间(ELT) 活化部分凝血活酶时间(APTT)黄花倒水莲（PFH）又称假黄花远志，主产于湖南、广西、江西、广东和云南等地，药用其全草[1-2]。其性平、微温、味甘、微苦；具补益气血、健脾祛湿、活血化瘀、调经等功效。研究表明：黄花倒水莲根含有皂苷、多糖、有机酸、氨基酸等，具有明显的抗衰老、改善心肌缺血、免疫调节、抗应激、抗衰老、抗病毒活性[3-5]等作用，主治虚弱虚肿、急慢性肝炎、腰腿酸痛、跌打损伤。有人报道黄花倒水莲提取物抗血脂作用[6]、对实验性胃黏膜损伤的保护作用、对实验性肝损伤的保护作用。现报道黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的研究。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1黄花倒水莲提取物的制备

取干燥黄花倒200g，加双蒸水过液面2cm，煮沸2次。30min/次，合并滤液，浓缩至400ml。加3倍量95%的乙醇，放冰箱静置过夜，次日减压过滤，并回收滤液中乙醇，继续浓缩滤液得无醇味的提取物。提取物加双蒸水至200ml使药液为相当于生药1g/ml。用0.5%NaOH 调整pH为7.0。置冰箱中备用。

1.1.2试验动物

健康成年SD大鼠（江西中医学院实验动物中心提供），体重300～400g，雌雄各半，随机分组。

1.1.3药品与试剂

10%的水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批号：20090407）；枸橼酸钠(1:9)真空采血管（江西富尔康实业集团有限公司，批号：20090903）；凝血酶原时间测定试剂盒和凝血酶时间测定试剂盒（上海太阳生物技术有限公司产品）。

统计分析：实验结果均以-x±s表示，数据进行单因素方差分析。

2 方式与结果

2.1 分组及给药

清洁级SD大鼠15只，随机分为三组：A.空白对照组；B.低剂量黄花倒水莲提取物组（1.5g/kg）；C.高剂量黄花倒水莲提取物组（3.0g/kg）。高、低剂量组每天以相应量的药物灌胃，空白对照组给予等量生理盐水灌胃，每天一次，持续5天。

2.2 黄花倒水莲提取物对体外凝血时间的测定

实验前动物禁食12h，末次给药后0.5h，以10%的水合氯醛麻醉(0.35ml/100g)，用毛细管从眼睛内眦部插入眼底，血液即进入毛细管内，直至血液从毛细管内流出，舍弃第一滴，然后取洁净玻片接一滴血(直径约5mm左右)，并按下秒表开始计时，每10-20s用清洁6号针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝为止即为凝血时间，记录凝血时间。

表1 黄花倒水莲提取物对大鼠玻片凝血时间的影响（-x±s；n=5）

与空白组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

2.3 黄花倒水莲提取物对凝血酶原时间（PT）的测定

取待测血浆0.1mL，37℃水浴孵育3min，加入37℃预温的凝血活酶0.2mL，混匀，立即启动秒表，记录凝固时间，即为凝血酶原时间值(s)。每个样品重复实验5次，取其平均值。

图1 黄花倒水莲提取物对凝血酶原时间的影响

与空白组比较，*P＜0.05。

2.4 黄花倒水莲提取物对凝血酶时间(TT)的测定

眼眦取血后，暴露大鼠腹腔，分离腹主静脉，用枸橼酸钠抗凝(1：9)真空采血管自腹主静脉采血2mL，轻轻摇匀，后3000r/min离心15min，取上清液，即待测血浆。

取待测血浆0.1mL，37℃水浴孵育3min，加入凝血酶0.1 mL，混匀，立即启动秒表，记录凝固时间，即为凝血酶时间值(s)。每个样品重复实验5次，取其平均值。

图2黄花倒水莲提取物对凝血酶时间的影响

与空白组比较，*P＜0.05。

2.5黄花倒水莲提取物对优球蛋白溶解时间（ELT）的测定

SD大鼠，体重200±20g，心脏采血1.8ml，0.1mol/L草酸铵1：9抗凝，3000r/min离心10min，分离贫血小板血浆。取0.5ml新鲜血浆，按文献方法制得纤维蛋白凝块，加不同浓度的黄花倒水莲提取物，对照组加生理盐水，37℃孵育，记录凝块完全溶解时间。

表2 黄花倒水莲提取物对优球蛋白溶解时间的影响（-x±s；n=5）

与空白组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

2.6黄花倒水莲提取物对活化部分凝血活酶时间（APTT）的测定

大鼠心脏取血4.5ml，置入含3.8%枸橼酸钠0.5ml的离心管中，动脉血与抗凝剂的比例严格控制为9：1，混匀后以3000r/min的速度离心10min，用微量进样器分别取得所需血浆量，参照LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析仪操作规程进行测定，记录APTT。

表3 黄花倒水莲提取物对活化部分凝血活酶时间的影响（ -x±s；n=5）

与空白组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

2.7黄花倒水莲提取物对血浆纤维蛋白原（Fib）的测定

大鼠采集血浆后，置离心管中，56℃加热10min，然后3000r/min离心10min，参照LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析仪操作规程进行测定，记录Fib。

表4 黄花倒水莲提取物对血浆纤维蛋白原的影响（-x±s；n=5）

与空白组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

3 讨论

实验表明：黄花倒水莲提取物既能影响内源性凝血途径，又能作用于外源性凝血途径。能明显的促进血液凝固，其促凝血作用机制可能与升高血浆纤维蛋白原和优球蛋白溶解时间；降低活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间国际标准比值有关。

本研究为黄花倒水莲促凝血作用的提供了有利的基础实验证据。但其对各凝血因了的影响程度还有待进一步的探讨。参考文献

[1]江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1996：2079.

[2]陈书坤.中国远志属植物的分类研究.植物分类学报，1991,29(3):193-229.

[3]秦华珍，夏新华，李钟文等.黄花倒水莲多糖的抗席激作用[J].广西中医药，1996，19(3)：52-54.

[4]李梨平，王伟华.黄花倒水莲对乙肝病毒E扰原体外抑制作用的观察[J].湖南中医药导报，1998，4(10)：32-33.

[5]李平，钟鸣，邱翠娥等.黄花参抗衰老作用的初步探讨[J].云南中医药杂志,1995，16(4)：13-15.

[6]李良东，李洪亮，范小娜等.黄花倒水莲提取物抗血脂作用的研究[J].时珍国医国药,2008，19(3)：232-235.