Nano中文操作及维护手册

LightCycler® Nano简单操作及维护
建立新的实验，打开已经做过的实验或者已经建立的实验模板，保存任何修改到目前文件中，保存为另外的文件，关闭当前的文件，查看仪器序列号及联机。

连接电源，仪器盖子的状态颜色首先呈蓝色，然后变为绿色，说明仪器自检通过，可以使用。

如果盖子打开颜色会由蓝变红，提示盖子应该关闭。

建立反应体系
将预混反应液加入LightCycler® 透明8联管，然后加入相应模板，反应体积10~100uL，定性分析时务必设置阴阳性反应体系。

务必确保管盖正确盖上，以免运行过程发生泄漏。

将八联管3000rpm，离心30秒。

程序设置
运行LightCycler® Nano软件，点击New，建立新的运行程序，在 Run Settings界面，确定光学设置Optics Settings，选择染料或者探针即可。

在Profile 界面确认使用的升
降温程序，通过点击Add，添加预设好的程序，在Hold方框中根据实际需要输入温度（Temp），孵育时间（Hold），升降温速度（Ramp）。

样品设置
设置完程序，然后可以在Samples界面输入样品信息。

在Samples窗口点击添加样品名称，在Targets窗口点击添加扩增基因名称并选择所标记探针基团，选中不同孔位，点击Set赋予不同的模板和引物组合，选中多个孔位，点击Number All，可以方便的按大小顺序自动给样品命名，选择Std可以输入标准品的浓度，也可以选择Unk设为待测样品，Neg表示阴性对照。

也可以选择在实验运行完成后设置样品信息，最后在 Experiment任务栏点击 Save保存即可。

运行实验
插上电源启动仪器，放置装有试剂和样品的8联管，当电脑与仪器连接成功，在状态栏点击Start Run ，用Data界面监控运行过程。

在Selected Channels窗口选择采用的探针通道
，可以查看每个样品的扩增曲线，也可查看实验剩余时间及进程。

如何用U盘驱动仪器
准备一个空的U盘，插入电脑，点击Start Run，选择Start Run From USB，根目录路径选择U盘，不
修改文件名，自动命名为LCNanoUSBRun.ppf，点击Save，安全移除U盘。

仪器启动自检完成后，盖子显示绿色时将样品管放入盖上盖子，将U盘插入仪器USB接口，仪器自动运行根目录下的程序，运行过程不能移除U盘。

运行完毕，仪器自动打开盖子，盖子颜色变成青绿色，结果被保存在USB驱动的根目录下，实验自动重命名为LCNanoUSBRunComplete_<timestamp>.ppf. 从仪器移除U盘即可。

实验完成
实验完成有如下提示：仪器自动打开盖子，盖子颜色变成青绿色；主窗口的状态栏显示Complete； Data 界面提供最后的原始数据。

点击 Save 即可保存原始数据。

数据分析
在Analysis 窗口, 点击添加所需的分析类型，设置合适的分析参数。

选择进行自动分析，通过二次求导算得扩增曲线的拐点，进行定量。

选择Settings，可以切换不同的目的基因，设置扣除的循环数。

点击Quantifiers，查看标准曲线及Cq值的计算公式，R2和扩增效率，在这个窗口可以导入import或者导出export标准曲线。

在Amplification窗口可以切换不同探针的荧光曲线图，或者点击show all dyes在同一个窗口呈现所有探针曲线。

必要时可以选中剔除部分样品。

选择进行手动分析。

同样在Settings窗口，可以切换不同的目的基因，而且在Cycles Settings可以根据不同试剂盒调整背景信号循环数，在Thresholds选中，也可以自动设置阈值线。

或者不选Automatic，点击，直接在扩增曲线图形中调整蓝色
线的位置。

原则：蓝色线盖过阴性对照的最高点，黑色线盖过所有样品的背景信号，与所有样品曲线指数期相交，尽可能压低。

点击，可以将图形放大。

选中可以通过点击曲线查看所对应的数据。

点击可以将图形单独保存。

注意事项
1.四个角的位置必须放置管，以便受力均衡。

2.切勿向仪器样品孔位置喷洒任何液体，以免流进仪器内部。

3.除了放置样品以及清洁时，仪器的盖子保持在盖上的状态。

4.放置样品管之前务必离心去除气泡。

仪器表面去污及打包流程
1. 穿上实验服，戴上手套及护目镜；从仪器移除所有样品管，拔掉仪器电源及网线。

2. 盖上仪器盖子，用蘸了漂白剂的软麻布擦仪器表面，10分钟后用蘸了水的布擦掉漂白剂，再用
70 % 乙醇擦即可。

打开仪器盖子，用70 % 乙醇擦基座表面。

空气流通：至少等10分钟。

3. 用原装航空运输盒打包仪器，并将电源线网线一并放入。