细胞培养常见污染
细胞培养中的几种污染
胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。
化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。
这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。
化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。
它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。
细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。
细菌内毒素是临床上的最主要的热原（即注射到动物体内会导致动物发热），所以通过细胞培养生产的疫苗、细胞因子等用在临床上的药品的生产过程中更是要避免细菌内毒素的污染。
生物污染生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染，和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。
细菌、霉菌和酵母到处存在，它们能在合适的环境中非常快速的生长。
这些污染比较容易观察到，它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化，或者通过显微镜观察就可以看见。
由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。
但是病毒污染难于发现，因为病毒颗粒特别微小，一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。
由于病毒一般潜伏在细胞内，对整个细胞培养不是致死的，所以它可能会使研究人员长期得到受病毒影响的细胞的实验结果。
1956 年 Robinson 及其同事首次发现细胞培养中的支原体污染。
90年代初美国的一个调查发现，在该国的细胞培养中，至少有15%被支原体污染。
由于支原体没有细胞壁，在细胞培养液中几乎是透明的，同时对常用于细胞培养中的抗生素不敏感，不引起 pH 变化，不使培养液浑浊，所以支原体污染不容易被发现，但是其存在会影响实验的结果。
细胞的交叉污染在细胞培养中发生的严重程度大大超过人们的想象：1981 年对ATCC细胞株的调查显示：超过 60 标记为其他细胞株的细胞居然是 HeLa 细胞。
细胞常见污染情况分析报告
细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。
24小时就满视野都是了。
污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。
长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。
培养液澄清。
低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
细胞培养过程中的污染及预防
细胞培养过程中的污染及预防由于环境条件没有控制好和操作不当等原因，细胞培养中常可发生细菌和霉菌的污染。
常见污染的细菌有：革兰氏阴性菌，如大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞菌等；革兰氏阳性菌有葡萄球菌等。
真菌污染在炎热潮湿的季节常可发生，如烟曲霉菌、黑曲霉、毛霉菌、孢子苗等。
霉菌和细菌生长迅速，能在短时间内抑制细胞生长或杀死细胞，镜下可见胞浆内出现大量颗粒，细胞变圆或崩溃从壁上脱落。
对于污染的观察，霉菌污染易于发现，肉眼可见白色或浅黄色菌团漂浮于培养液表面，有的散在生长，镜下可见丝状菌丝，纵横交错于细胞之间。
而细菌污染较重时可见培养基上清浑浊，较轻时镜下可见小的菌体在细胞间运动，同时可涂片染色镜检或进行培养及培养加以确定。
目前细胞培养过程中最主要的问题就是污染，污染可导致细胞的死亡，使其作为科研的原料不可再用，造成人力、财力和实践的损失，因此一定要尽量避免污染的发生。
一般可从以下三个途径来控制污染的发生：一、细胞培养的室内环境细胞培养室内应相对封闭，洁净无尘，设有缓冲间。
细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，定期消毒。
专用物品只在培养间内使用，不得带出培养间。
培养间和缓冲间每周彻底清洁消毒一次。
二、细胞培养的试剂和用品工作中要特别注意防止培养液和血清的污染。
培养细胞所用的血清必须储存于-20至-70℃，但也不能超过一个月，解冻时在4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，在溶解过程中要规则摇晃均匀，使温度与成分均一，这样可以减少沉淀。
最好不要直接在37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
三、无菌操作和对实验人员的要求有很多污染的发生都与操作不当有关，而细胞培养试验的操作应是严格的无菌操作。
首先试验进行前，无菌操作台面、废液缸及实验用品均应用紫外灯照射30-60分钟灭菌；以75%酒精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后方可开始实验操作。
细胞培养中常见的污染的处理
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。
如何预防细胞培养污染问题
如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。
细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。
本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。
1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。
预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。
•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。
•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。
2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。
真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。
真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。
预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。
•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。
•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。
•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。
3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。
Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。
Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。
预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。
•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。
•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。
•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。
4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法细胞培养技术在生物医学研究领域扮演着重要的角色。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些污染问题，严重影响实验结果的可靠性和重复性。
本文将探讨细胞培养技术中常见污染问题的解决方法。
一、细菌污染在细胞培养过程中，细胞培养器皿、培养基和实验室环境中都可能存在细菌污染的问题。
为了解决这个问题，可以采取一些预防措施。
首先，必须定期清洗和消毒培养器皿，以确保其表面的无菌。
其次，使用高品质和无菌的培养基是防止细菌污染的关键。
培养基应在严格无菌条件下配制，并在每次使用前进行相关的质检。
此外，实验室环境的洁净度也需要保持，经常进行清洁和消毒，减少细菌的滋生和传播。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养中常见的问题之一，尤其在湿度高的环境下更容易发生。
为了避免真菌污染，可以在实验室中合理控制湿度，并保持培养器皿和培养基的干燥。
此外，使用抗真菌剂可以有效地减少真菌感染的风险。
对于一些特定的细胞系，可以对细胞培养器皿进行预处理，如用乙醇或己硝酸等消毒剂进行表面处理，以提高培养器皿的抗真菌能力。
三、交叉污染细胞系的交叉污染是实验室中常见的问题。
它可能是由于不慎携带其他细胞系的污染物，或是在培养中不同细胞系之间的相互感染所致。
为了防止交叉污染，可以采取一些措施。
首先，实验人员在操作细胞系之前必须养成良好的个人卫生习惯，包括洗手、戴手套等。
其次，不同细胞系之间要严格分开培养，避免接触。
此外，可以对新获得的细胞系进行鉴定，使用PCR等方法进行验证，确保其纯度。
四、内源性污染内源性污染是指细胞系自身产生的污染物。
它可能是由细胞自身分泌的代谢产物、去胎氧核糖核酸或细胞死亡引起的。
为了解决这个问题，可以采取以下措施。
首先，要定期更换培养基和培养器皿，及时清除废液和死细胞。
其次，对细胞进行经常性的鉴定，确保其活性和稳定性。
同时，培养温度、培养时间等因素也需要加以调整，以减少内源性污染的发生。
综上所述，细胞培养技术中常见的污染问题是可以通过一系列的控制措施来解决的。
细胞培养中常见污染
最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
细胞污染的种类有哪些
细胞污染的种类有哪些1. 异物污染细胞培养的一个常见问题是异物污染。
异物污染是指在细胞培养过程中，由于一些外部因素导致培养器具或培养介质中出现的异物。
这些异物可能包括灰尘、纤维、酵母、细菌、真菌、病毒等。
这些异物不仅会干扰细胞的生长和功能，还可能引起未知的变化和不确定的结果。
因此，在进行细胞培养实验时，要特别注意避免异物污染。
2. 细胞污染细胞污染是指在细胞培养的过程中，细胞本身受到一些外部因素的污染，从而导致细胞的变异、功能受损甚至细胞死亡。
细胞污染可以由以下几种常见的污染源引起：a. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的污染之一。
常见的细菌污染源包括实验环境中的空气、实验器具、培养介质等。
细菌污染会导致细胞生长受阻、感染和细胞凋亡等，严重时甚至会使细胞无法继续培养和使用。
b. 真菌污染真菌污染是指一些真菌，如酵母菌等进入细胞培养环境中并污染细胞。
真菌污染会引起细胞外观的改变、生长受阻、功能受损等问题。
在细胞培养实验中，应特别注意真菌污染的防控。
c. 病毒污染病毒污染在细胞培养中较为罕见，但一旦发生，对细胞的影响极大。
病毒污染会导致细胞的变异、功能失调甚至细胞死亡。
因此，进行细胞培养实验时，必须定期进行病毒检测，并采取相应的防控措施以避免病毒污染的发生。
d. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，细胞株之间或批次之间发生的互相污染。
细胞培养实验室中经常同时进行多个细胞系的培养，因此，交叉污染的风险也相应增加。
交叉污染会导致细胞株的混杂和受污染细胞株的功能异常。
为了避免交叉污染，实验室应有严格的实验室操作流程，并定期检测细胞株的纯度。
3. 其他污染除了以上几种常见的细胞污染，还有一些其他类型的污染也可能影响到细胞培养实验的结果，例如：•化学物质污染：来自培养介质、溶液、培养基等中的化学物质可能对细胞产生毒性影响，导致细胞的变异或死亡。
•辐射污染：细胞培养过程中可能存在来自辐射源的污染，这可能会对细胞的遗传物质和生理功能产生不可逆的损害。
细胞培养常见细菌污染原因
细胞培养常见细菌污染原因细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于研究细胞的生理、生化和分子生物学特性。
然而，细胞培养过程中常常会受到细菌污染的影响。
细菌污染会对细胞培养的可靠性和准确性产生不良影响，因此控制细菌污染是细胞培养实验中至关重要的一步。
细胞培养常见的细菌污染原因主要有以下几个方面：1. 操作不当：细胞培养的整个过程都需要严格的无菌操作，而操作不当是导致细菌污染的主要原因之一。
无菌操作包括更换培养基、移液操作、接种细胞等，如果在操作过程中没有严格遵守消毒和无菌操作规范，就会导致细菌的进入和繁殖。
2. 试剂和培养物污染：试剂和培养物是细胞培养中常用的重要物质，如果试剂和培养物本身存在细菌污染，那么在培养过程中就会引入细菌。
试剂如培养基、酶、胎牛血清等的批次变化或不良质量，都可能导致细菌污染。
此外，非无菌的操作也会导致试剂和培养物的污染。
3. 实验室环境污染：实验室环境中存在微生物的存在，如桌面、空气、实验器皿等都可能存在细菌。
如果实验室的环境清洁度不够高，容易造成细菌污染。
此外，实验器皿如培养皿、离心管等的洗涤和保存也需要保证无菌操作。
4. 人员因素：人员的操作能力和操作习惯也会影响到细菌污染的发生。
操作人员应该保持良好的个人卫生习惯，定期对手套、实验服等进行更换和清洗。
如果操作人员不注意操作细节，如不合理的移液操作、使用不干净的仪器等，都可能导致细菌的污染。
5. 培养器具污染：培养器具如试管、离心管、细胞培养板等在使用之前需要经过高温和化学消毒处理，以杀灭其中潜在存在的细菌。
然而，如果器具处理不彻底或者保存环境不好，就容易导致细菌的残留或再次感染。
细胞培养中细菌污染的危害是非常严重的。
首先，细菌污染会干扰细胞培养体系的稳定，导致无法准确观察和研究细胞的生理和生化特性。
其次，细菌代谢产物和细胞培养物中含有的抗生素等成分会干扰细胞培养的正常生长和发育，降低实验结果的可靠性和准确性。
此外，由于细菌的存在，还容易导致细胞死亡和污染的蔓延，对细胞培养的连续性和稳定性造成不可逆的伤害。
细胞培养污染
常见细胞污染简介细胞培养物污染往往是细胞培养实验室中最常见的问题，有时会造成非常严重的后果。
细胞培养污染物可分为两大类，一类是化学污染物，如培养基、血清和水中的杂质，包括内毒素、增塑剂和洗涤剂，另一类是生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒和支原体，以及其他细胞系的交叉污染。
虽然污染无法完全消除，但可以通过全面了解其来源并遵循良好的无菌技术来降低污染的发生频率和严重性。
本次将概述主要的生物污染类型。
污染种类1.细菌细菌是一大类普遍存在的单细胞微生物。
细菌的直径通常只有几微米，其形状多样，如球状、杆状和螺旋状等。
由于分布广泛、生长迅速和体积大小等特点，细菌以及酵母和霉菌是细胞培养中最常见的生物污染物。
细菌污染在培养物感染后几天内就很容易被肉眼观察到；受感染的培养物通常会变得浑浊，有时表面会有一层薄膜。
经常还会出现培养基的pH值突然下降的情况。
在低倍显微镜下，细菌以细小颗粒的形式出现在细胞之间，在高倍显微镜下观察可以分辨出单个细菌的形状。
下面的模拟图像显示了贴壁培养的293细胞被大肠杆菌污染。
A B被大肠杆菌污染的贴壁293细胞的模拟相差图像。
在低倍显微镜下，贴壁细胞之间有一些发亮的微小颗粒，但单个细菌不易区分（图A）。
进一步放大黑色正方形框出的区域后，可以显现出单个大肠杆菌细胞，这些细胞通常呈杆状，长约2μm，直径约0.5μm。
图A中黑色正方形的边长为100μm。
2.酵母酵母是真菌界中的单细胞真核微生物，大小从几微米（常见）到40 μm（罕见）不等。
与细菌污染一样，被酵母污染的培养物会变得混浊，尤其是在污染的后期。
被酵母污染的培养物，其pH值几乎没有变化，通常直到污染严重时，pH 值才会升高。
在显微镜下，酵母呈单个卵球形或球形颗粒，可能还会出芽产生更小的颗粒。
下面的模拟图像显示了贴壁293细胞铺板24小时后被酵母感染的情况。
被酵母污染的贴壁293细胞培养物的模拟相差图像。
酵母细胞呈为卵球形颗粒，增殖时会出芽产生更小的颗粒。
细胞培养的污染
– 只有相关人员才可进入细胞培养区 – 细胞培养区必须和其他区域分开 – 每个细胞培养区应布局合理，保证所需物品就近放置，在处 理细胞时避免不必要的走动 – 细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染
三、污染的预防
预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在 前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。 一般预防： 1、添加抗生素
控 制 污 染
• 良好的无菌操作
– 所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌 – 避免溢出、溅出和气溶胶； – 吸入或吸出液体时避免倾倒； – 吸入或吸出液体时，不要触碰细胞培养瓶的瓶口； – 液体应分装并置4-8oC保存； – 每种细胞应使用单独的液体； – 清洁区和污染区的材料应单独处理；
控 制 污 染
细胞培养的外源 污染和 预防控制
一、概念
凡混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不 纯的异物都视为污染，细胞污染不能完全被消除，但 能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据 污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。 。
二、细胞污染的分类
• 物理污染 • 化学污染 • 生物污染（支原体污染）
化学性污染的来源、危害及预防
培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。化学物质并不总是抑 制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。不同细胞对化学
物质污染的反应是不一样的。未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因 子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。细胞培养的必需养分， 如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。玻璃制品清洗 过程中残留的变性剂或肥皂是最常见的化学性污染。水是唯一一种在凝固时 膨胀的化合物。因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。容器因水 的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。为了避免金属离子、有机分 子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含 杂质的超纯水。需要注意的是，超纯水放置过久其纯度会下降。在高压蒸气 灭菌及蒸馏水时水经常被污染，因为高压蒸气锅及纯水机的常规维护后可能 有少量的化学物质残留。为了保证水的纯度，我们应采取措不易被察觉和干扰实验结果的一种污染。是 细胞培养研究中重点预防对象。 （1）支原体生物学性状：一种介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小 微生物。可通过除菌滤器。 多形态性，光镜下难以看清其结构。 多吸附于细胞表面或散在细胞之间。 对青霉素普遍有抗药性。
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法细胞培养是生物学研究中经常使用的一种重要技术手段。
然而，随着研究的深入，细胞培养中常常会遇到细胞污染的问题，这给实验结果的可靠性和准确性带来了很大的影响。
细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母、病毒以及其他的微生物污染。
在细胞培养中，如何及时发现和处理细胞污染问题，是每个实验室都需要面对的重要课题。
细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
造成细菌污染的原因有很多，比如培养器具不洁净、操作不规范等。
当出现细菌污染时，可以通过观察培养物的外观变化来初步判断是否受到污染，比如培养物颜色的改变、气泡的形成等。
如果存在细菌污染的症状，可以通过将培养物进行细菌培养或细菌PCR检测以确认。
一旦确认细菌污染，需要立即更换培养器具，重做培养基，并对培养箱等设备进行彻底清洁和消毒。
真菌和酵母的污染在细胞培养中也是相对较常见的问题。
真菌和酵母污染一般表现为培养物的颜色变化、膜片上出现菌丝等。
当怀疑存在真菌和酵母的污染时，可以将培养物进行不同培养基上的转接和形态学观察，也可以通过真菌和酵母的特异性培养基进行检测确认。
处理真菌和酵母污染的方法包括体外灭菌、常规抗生素处理、加入抗真菌和酵母的药物等。
另外，病毒是一种较为严重的细胞污染问题。
病毒感染可以导致细胞凋亡、细胞功能紊乱甚至细胞死亡。
常见的病毒污染有常见冷感冒病毒、乙肝病毒等。
病毒污染的判断往往需要通过病毒培养、PCR或ELISA等技术进行鉴定。
处理病毒污染可以采用病毒灭活剂或直接更换细胞系等方法。
除了微生物污染外，还存在一些其他的细胞污染问题。
比如，细胞交叉污染是指来自其他细胞系的细胞误将自己的培养物中。
为了避免细胞交叉污染，可以采用细胞系的DNA指纹鉴定技术，或者使用经过认证的培养物，同时加强无菌操作的培养。
总结起来，细胞培养中的细胞污染问题多种多样，但我们可以通过细心观察培养物的变化、培养基的转接和不同培养基的形态学观察、特异性培养基的检测以及分子生物学方法的应用等，及时发现和处理细胞污染问题，确保实验的可靠性和准确性。
细胞培养中“黑胶虫”污染的检测及防治
6、建立有效的监控机制：对细胞培养过程进行实时监控，特别是在培养液 更换、细胞传代等关键环节上要格外留意。通过定期检查和记录细胞生长情况、 生化指标等数据，及时发现并处理潜在的黑胶虫污染问题。
7、采用新技术手段：随着科技的发展，一些新的技术手段如基因测序、生 物信息学分析等也可用于检测和防治黑胶虫污染。通过这些技术手段的应用，可 以更早地发现污染源、追踪污染途径并制定有效的防控措施。
4、建立应急预案：实验室应建立针对黑胶虫污染的应急预案，以便在发生 污染时能够迅速采取有效的措施进行处理，最大程度地减少损失。
5、加强学术交流与培训：通过参加学术会议、研讨会等活动，了解和学习 最新的研究成果和方法，提高对黑胶虫污染的认识和应对能力。同时，对实验室 工作人员进行定期的培训和教育，提高他们的专业素养和操作技能。
5、使用适当的消毒剂：在细胞培养过程中，可以使用适当的消毒剂对实验 器材和环境进行消毒处理。常用的消毒剂有75%酒精、紫外线、甲醛等。在使用 消毒剂时，要严格按照使用说明进行操作，避免对细胞造成不良影响。
参考内容三
引言
随着人类文明的不断发展，塑料制品的使用日益普遍，由此引发的白色污染 问题也越来越严重。本次演示将探讨白色污染的污染现状及防治对策，旨在引起 人们对白色污染问题的，共同呵护环境。
参考内容
一、常用的细胞培养方法
细胞培养是一种广泛应用于生物学、医学和生物技术领域的技术。细胞培养 是指将活细胞种植在适宜的基质中，通过提供适宜的营养和环境条件，使细胞在 体外繁殖和生长。常用的细胞培养方法包括悬浮培养和贴壁培养。
1、悬浮培养：悬浮培养是将细胞悬浮在培养液中，通过搅拌或振荡使细胞 均匀分布，并保持悬浮状态。这种方法适用于大多数类型的细胞，包括一些难以 贴壁的细胞。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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整理总结：细胞培养中的第一大害——————————污染★★★lwf991229(金币+3,VIP+0):不错,很详细,不过有的图片打不开~~污染是细胞培养第一大害！预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
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细胞污染的类型一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变而呈现黄色。
也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
所以，每天应仔细观察。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
一般细菌污染进程很快，大约污染一两天后肉眼就能显著观察到。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。
最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（发生卵圆形物体污染的几率很大）。
个体细小，有增多趋势。
镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。
多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。
电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。
培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。
但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。
四、病毒污染采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在病毒的组织培养物，会产生病毒污染。
目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。
尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。
若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞和会发生变异、转化，形成异倍体的细胞系。
因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
五、非同种细胞污染由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。
如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，而现在却认为是HeLa细胞。
目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa 细胞所污染，致使许多实验宣告无效。
非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。
污染来源及鉴别一、污染来源细胞培养过程中污染的来源主要有以下几条途径：1、不洁的动物组织标本很多动物组织本该是无菌的(直接与外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系统除外)，但由于取材时不小心也会有污染的机会。
组织本身含有细菌，如取材时不用浓的抗生素洗液洗涤浸泡，也会带菌，造成细胞污染。
2、空气空气中含有大量的微生物，如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分下，很容易造成污染。
另外，净化工作台使用过久，滤板未定期更换或长久不更换，滤气受尘埃堵塞，工作时不带口罩或外界气流过强，污染空气进入操作区，也会导致污染。
春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。
3、清洗消毒培养用物品、材料洗刷不净，培养用液和器材灭菌不彻底也会引入微生物和有毒物质。
4、操作来自操作者的污染主要有以下几方面：1、器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过，或者是否已经消毒灭菌处理过，或者虽经处理，时隔已久又末重新处理。
2、操作者未戴口罩、帽子，呼出气中排出细菌和支原体。
3、培养瓶口未用75%酒精擦和烧灼。
4、操作者不当心，动作不正确而将吸管或无菌器具碰到了污染的物品，如手上皮肤和瓶子外壁等。
5、细胞倾液时倒出培养瓶或者滴落在超净台上，未及时擦净或者灼烧。
6、灼烧的火不够旺。
7、移液管吸取液体时将空气中的气流吸入培养瓶中。
8、长时间的将离心管放在离心机中，可能由于口没有完全封闭而造成污染。
9、同一根吸管或者放置吸管的离心管长时间使用造成的一管污染多瓶细胞交叉污染。
10、操作者操作时大声说话，来回走动扬起灰尘等。
5、血清，市售血清灭菌不彻底，潜在病毒和支原体污染。
二、污染的鉴别1、细菌、真菌污染的检测（1）肉眼观察细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到。
如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。
（2）镜下观察在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。
若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
（3）接种观察采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。
2、支原体污染的检测（1）相差显微镜观察将细胞接种于事先放置于培养瓶内的支持物(一般用长形盖玻片)，24小时后用清洁尘镊子从培养瓶中取出支持物，细胞面向上放置于载物片上，再盖上较大盖玻片，用相差油镜观察；若不用支持物培养法，直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察亦可。
支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。
应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。
（2）荧光染色法观察用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，然后用荧光显微镜观察。
染色方法为：用支持物盖片培养法将细胞接种在盖片上，在细胞汇合前（即未长满前）取出玻片，于碟皿中，用不含酚红的Hanks液漂洗，1:3醋酸钾固定10分钟，再用生理盐水漂洗后置于50μg/mL的Hoechst33258(生理盐水配制)中染色10分钟，置于蒸馏水漂洗1～2分钟，向细胞面滴加数滴pH5.5磷酸缓冲液，然后置荧光显微镜下观察。
若用细胞培养液，先离心去除上清液，再加入Hanks液漂洗，离心弃上清后加入1:3醋酸甲醇固定10分钟，再用生理盐水漂洗后去上清液，再用Hoechst33258，DAPI或者PI等核染色试剂，染色10分钟，加入蒸馏水漂洗，离心去上清蒸馏水，加3～5滴pH5.5磷酸缓冲液，稍吹打使沉淀细胞重悬浮，用吸管吸出，滴于载物片上，盖上盖片后观察。
荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。
（4）电镜检测可用扫描电镜或透射电镜观察。
一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行。
需经过固定、包埋、切片后才能进行观察。
详细方法同细胞形态观察法。
（5）培养检测将2.5×109/L细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基（Sigma或北京生物制品所生产的均可），培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
培养加荧光核染色是检测支原体污染的黄金搭档。
污染的预防预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。
只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。
在超净台中进行细胞培养时，特别注意在进行移液，倾倒液体的操作过程会产生飞沫并沉积在超净工作台内物体的表面。
超净工作台的气流并不能阻止飞沫的产生，飞沫会随着气流的方向飘浮。
超净工作台不合理的放置、不恰当的维护以及不规范的使用会破坏超净工作台气流的方向导致飞沫更广泛的沉积。
酒精灯的火焰、操作者的活动、谈话、咳嗽及打喷嚏都有可能影响气流。
飞沫的沉积是导致超净工作台内物品污染的主要因素造成潜在污染的进一步传播。
因此为减少交叉污染的发生，应尽可能减少超净工作台内的物品。
不同细胞系以及同一个实验室不同操作者所使用的培养试剂一定要分开使用，如胰酶、培养液等。
否则，一个操作者的失误可能引起所有细胞发生污染。
一般预防可从以下几方面着手：无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以5% 新洁尔灭擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以5% 新洁尔灭擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以5% 新洁尔灭擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
7.无菌室的彻底消毒1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室；2）甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。