放线菌选择性分离方法综述_钱恒

放线菌选择性分离方法综述

钱恒段淑蓉*

（南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，江苏南京211171）

摘要：综述了近年来选择性分离放线菌的几种方法，包括样品来源的多样化，物理机械与化学分散剂结合法，稀有碳源的选择，CaCl2富集培养等。

关键词：放线菌；分离方法；综述

中图分类号Q939.13文献标识码A文章编号1007－7731（2011）15－60－02

Summarization of Selective Isolation Methods for Actionmycetes

Qian Heng et al．

（Nanjing Xiaozhuang College，School of Biochemical and Environmental Engineering，Nanjing211171，China）Abstract：This article introduces several selective isolation methods for actionmycetes in recent years，including sample source diversification，combining physical mechanical approach and chemical dispersant，rare carbon sources，CaCl

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en-richment cultivation，etc．

Key words：Actinomycetes；Isolation methods；Summarization

放线菌是一类重要的微生物，能产生有用的酶［1－2］和二次代谢产物如抗生素、生物活性分子和抗肿瘤化合物等［3－5］，具有重要的经济价值。发现新的生物活性代谢产物的有效方法是通过分离新的微生物尤其是产生70%的已知生物活性代谢产物的放线菌［6］。

近年来，分子生物学方法已经证明，自然界实际存在的绝大部分放线菌仍然难以培养。如何获得这些难培养的未知放线菌是微生物资源利用的重大研究课题，而探索新的分离方法则是解决这一问题的根本途径。本文主要从样品来源的选择、预处理、培养基选择、富集培养等方面介绍几种选择性分离放线菌的方法。

1样品来源的选择

绝大多数的放线菌来源于土壤［7］。但近年来，人们将目光投向各种生境放线菌的分离，包括海洋放线菌［8］、极端环境放线菌［9］、内生放线菌［10］、沙漠土壤［11］等。分离放线菌新生态系统调查对于发现新的放线菌以及最终发现自然产物的药物是至关重要的。近期，多项研究报道了作为生物活性化合物丰富来源的新的放线菌不同生境的调查［12］。新的生态环境样品将大大提高新的放线菌的分离几率。

2土样预处理

预处理的主要目的在于减少真菌、细菌等非目的菌的数量，增加目的放线菌的数量［3］，活化放线菌的休眠孢子以及杀灭非目的菌。

江翠翠［13］等研究了不同物理机械与化学分散剂结合及加热与化学物质预处理土样对放线菌分离效果的影响，以期提高放线菌检出率。采用涂布平板稀释法进行放线菌的分离，为达到更好的分散效果，物理机械（玻璃珠振荡机）分散常与化学分散相结合，促进微生物与土粒的分离。结果表明，使用一种分散剂处理土壤悬液后，土壤分散效果均优于纯蒸馏水。胆酸钠的分散效果最好，焦磷酸钠次之。胆酸钠处理的土样，分离得到的放线菌菌落数约是生理盐水和纯水的1.4倍和1.8倍多。这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具有较强的结合能力，有利于破坏土壤团聚结构所致。

使用分散剂时，同时加入洗涤剂Na+离子交换树脂和螯合剂PEG处理土壤悬液后，土壤分散效果均较未加入任何洗涤剂和螯合剂的好。胆酸钠、Na+离子交换树脂和PEG的分散效果最好，分别比仅加入胆酸钠处理的放线菌菌落数高11.2%和8.9%［13］。

范丽霞［14］等对最有利于土壤放线菌分离的自然风干时间展开了研究。研究结果表明：土样放置7d和21d均适合放线菌的分离，放置7d的放线菌菌落较多，种类也较齐全，而细菌和真菌数量下降较快。而放置21d的土样培养皿内的细菌和真菌都非常少，几乎全是放线菌单菌落，且放线菌种类下降不明显，非常适合放线菌分离。放置7d的放线菌的种类更多更全，而放置21d的放线菌单菌落更突出。

3培养基的选择

06安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2011，17（15）DOI:10.16377/ki.issn1007-7731.2011.15.003

作者简介：钱恒（1989－），男，专业方向：微生物学。*通讯作者收稿日期：2011－07－07

碳源是培养基的基本成分。甘油、淀粉、葡萄糖、腐殖酸等已广泛应用于放线菌分离培养基，再使用这些碳源，常见放线菌的出菌率会很大。因此探索“稀有”碳源，用于稀有放线菌分离，是一条可试途径。吗啉丙磺酸（MOPS）是一种中性缓冲剂（pH6.5 7.9）。使用海藻糖－脯氨酸培养基，用0.1%的MOPS作碳源，共分离到放线菌336株，其中稀有放线菌169株，占50.3%；用0.2 %的丙烯酰胺作碳源，分离到放线菌229株，其中稀有放线菌135株，占59.0%；用0.5%的海藻糖作碳源，分离到放线菌285株，其中稀有放线菌155株，占54.4%；ED-TA也是一种中性缓冲剂（pH7.0 8.0）、螯合剂的代表性物质，能和碱金属、稀土元素和金属等形成极稳定的水溶性络合物，能使分离培养基维持中性环境，用0.2%的EDTA作碳源，分离到211株放线菌，稀有放线菌111株，占52.6%。因此，MOPS、丙烯酰胺、海藻糖和EDTA是分离稀有放线菌比较理想的碳源，稀有放线菌的出菌率都能超过50%，建议采用［15］。

4富集培养

富集培养是利用目标菌的某些特性，在土壤等样品中加入一些特殊物质，诱导目标菌大量富集，提高选择性分离效果。

钙离子是生物体内生理活动不可缺少的离子，具有调节酶活性、传递细胞信号及维持渗透压等多种作用。研究表明，向酸性土壤中加入碳酸钙，土壤放线菌数量显著增加，即钙盐能增加土壤放线菌数量，钙离子对放线菌生长可能有重要影响。

薛清等采用稀释平板法研究了向高氏Ⅰ号培养基中加钙对北方干旱半干旱地区钙质土壤放线菌分离效果的影响。结果表明：加入CaCl2对干旱区钙质土壤放线菌的出菌量有一定影响，大部分土壤的放线菌总数较对照增长23.9% 47.0%；向高氏Ⅰ号培养基中加钙有利于广谱高效拮抗性放线菌的分离。在高氏Ⅰ号培养基中加入CaCl2对大部分可培养放线菌数量增加有一定促进作用［16］。

放眼未来，放线菌将仍是医药和农业行业二次代谢物的重要来源。这些代谢物也将成为药物设计和化学修饰的起始物。放线菌将继续在工农业等领域，为建立更丰富的药物库做出贡献，并随着分子机制的拓展将更有效的发挥作用。然而，考虑到地球目前的状况，放线菌最重要的作用将是改善环境。放线菌的开发和研究将带来更大的经济和社会效益，其发展前景亦将十分广阔。

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（责编：施婷婷）

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17卷15期钱恒等放线菌选择性分离方法综述