高效液相色谱电化学检测法测定阿奇霉素及相关组分
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Electrochemical Detection
Y U JiΒιβλιοθήκη Baidun2ying1 , RAO Jun2ming1 , CHEN Ben2mei2 , L IU Shao2gang2 , D ENG Fu2l iang2 3
(1. X i an g y a Hos pi t al , Cent ral S out h U ni versit y , Chan gs ha 410008 , Chi na; 2. A nal y tical an d Testi n g Center , X i an g y a Me dical Col lege , Cent ral S out h U ni versit y , Chan gs ha 410078 , Chi na)
Key words : H PL C ; Elect rochemical detectio n ; Azit hromycin ; Related component s
收稿日期 : 2009202205 作者简介 : 余剑英 (1965 - ) ,女 ,湖南长沙人 ,主管技师 ,主要研 究方向为临床生化及免疫学 。 3 联系人 ·636 ·
Abstract : Azit hromycin ( A ZMC) and related co mpo nent s [ i. e. , deso saminylazit hromycin (DSMA ZMC) , azaeryt hromycin A (A ZEMC2A) and N2demet hylazit hromycin (N2DMA ZMC) ] in A ZMC granules were determined simultaneously by H PL C wit h elect rochemical detection ( EC detection) . The Thermo C18 column ( 150 mm × 4. 6 mm , 5μm) was used as t he statio nary p hase for separatio n of t he component s wit h column temperat ure at 35 ℃. A mixt ure of 20 mmol ·L - 1 KH2 PO4 solution (p re2adjusted to p H 7. 37 wit h 1 mmol ·L - 1 KO H solutio n) and met hanol (mixed in t he ratio of 47 to 53 by volume) was used as t he mo bile p hase wit h flow2rate of 1. 0 mL ·
阿奇霉素为氮杂内酯类新型抗生素 ,其作用机 理是通过与敏感微生物的 50S 核糖体的亚单位结 合 ,从而抑制依赖于蛋白质的合成 ,具有广谱抗菌作 用 ,且副作用小等优点 ,现已广泛应用于临床 。《中
理化检验 - 化学分册
余剑英等 :高效液相色谱电化学检测法测定阿奇霉素及相关组分
国药典》2005 年版中采用微生物检定法测定阿奇霉 素 ,其操作繁琐费时 ,影响因素多 ,误差较大 。有报 道采用液质联用技术对阿奇霉素及有关物质进行定 性分析[1] ,也有采用反相液相色谱紫外检测法测定 阿奇霉素含量[224] ,但阿奇霉素的化学结构上无共轭 双键 ,在紫外光区无特征吸收 ,只有在 190～200 nm 波长附近有末端吸收 ,但在低紫外光区 ,影响因素较 多 ,信号噪音大 ,基线难以平衡 ,对低浓度的物质进 行定量会造成比较大的误差 。《美国药典》2007 年 版中采用反相氧化铝柱分离 ,双玻碳电极的电化学 检测器进行检测 ,分离测定了阿奇霉素及相关组分 (脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲基阿奇霉 素) ;也有采用氧化铝柱分离 , 电化学检测法测定了 阿奇霉素片的有关物质[5] 。本工作采用单一玻碳电 极的电化学检测器的反相高效液相色谱法同时测定 阿奇霉素及相关组分 (脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲基阿奇霉素) 的含量 。本方法简单 、快速 、 灵敏度高 、重复性好 。
理化检验 - 化学分册
P TCA ( PA R T B :C H EM. ANAL . )
2009 年 第 45 卷 6
工作简报
高效液相色谱电化学检测法测定 阿奇霉素及相关组分
余剑英1 , 饶均明1 , 陈本美2 , 刘劭刚2 , 邓富良2 3
(1. 中南大学 湘雅医院 , 长沙 410008 ; 2. 中南大学 湘雅医学院 分析测试中心 , 长沙 410078)
间及响应灵敏度的影响较大 ,p H 值低于 7. 0 时 ,N2 去甲基阿奇霉素 、阿奇霉素不能有效分离 ;p H 值在 7. 5～8. 0 之间时 ,脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 几乎重叠 。所测化合物的响应灵敏度随 p H 值的降 低而降低 ,p H 值低于 4. 0 时 ,所测化合物几乎无 响应 。
称取阿奇霉素原料药 0. 447 4 g ,置于 10 mL 容 量瓶中 ,加适量甲醇 ,超声 10 min ,取出 ,冷却至室 温 ,用甲醇定容至刻度 ,测定前用甲醇稀释至相应浓 度 ,取溶液经 0. 45μm 的膜过滤后使用 。按色谱条
件对阿奇霉素进行测定
2 结果与讨论
2. 1 流动相缓冲溶液 p H值及甲醇浓度的选择 流动相缓冲溶液的 p H 值对各化合物的保留时
min - 1 . The EC detection was made at t he potential of 1. 05 V. Linear relationship s between values of peak area and co ncent rations of t he 4 co mpo nent s were o btained in t he ranges of 37. 06 - 593. 0 mg ·L - 1 (for A ZMC) , 2. 63 84. 00 mg ·L - 1 (for DSMA ZMC) , 9. 20 - 294. 5 mg ·L - 1 (for A ZEMC2A) and 6. 69 - 107. 0 mg ·L - 1 (for N2 DMA ZMC) . Detection limit s ( 3 S/ N ) fo und for t he 4 component s were 9. 28 , 1. 32 , 4. 60 , 3. 35 mg ·L - 1 , respectively. Test s for recovery were made by standard addition met hod , and values of average recovery obtained were 99. 9 % , 100. 6 % , 99. 9 % and 99. 8 % respectively.
试验考察了检测电位对响应灵敏度的影响 ,随 着电位 的 增 加 , 响 应 灵 敏 度 增 加 , 但 当 电 位 超 过 1. 05 V时 ,背景电流过大 。试验选用 1. 05 V 作为 检测电位 。 2. 3 柱温的选择
柱温对分离效果的影响较小 ,随着柱温的增加 , 保留时间有所缩短 ,峰的扩散有所改善 。柱温对阿 奇霉素保留时间影响最大 ,当柱温由室温 (28 ℃) 增 加至 35 ℃时 ,其保留时间由 11 min 降至 9 min 。试 验选择柱温为 35 ℃。 2. 4 工作曲线及检出限
流动相中甲醇浓度对保留时间的影响也很大 , 随着甲醇浓度的降低 ,分离有所改善 ,所测化合物的 保留时间相应延长 ,对阿奇霉素 A 影响尤为明显 , 但当甲醇量低于 52 %时 ,阿奇霉素 A 与样品中的杂 峰不能 达 到 基 线 分 离 。试 验 结 果 发 现 : p H 值 为 7. 37 ,甲醇量为 53 %时 ,所测化合物与杂质都能达 到基线分离 ,且保留时间适中 。 2. 2 工作电位的选择
关键词 : 高效液相色谱 ; 电化学检测 ; 阿奇霉素 ; 相关组分
中图分类号 : O657. 7 文献标志码 : A 文章编号 : 100124020 (2009) 0620636203
HPLC Determination of Azithromycin and Related Components with
1 试验部分
1. 1 仪器与试剂 L C26A 高效液相色谱仪 ,包括 L2ECD26A 电化
学检测器 , Hw22000 数据站 。 对照品溶液 :称取脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素
A 、N2去 甲 基 阿 奇 霉 素 、阿 奇 霉 素 对 照 品 1. 68 , 11. 78 ,2. 14 ,11. 86 mg 分别置于 10 mL 容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,配制成质量浓度分 别为 168 ,1 178 ,214 ,1 186 mg ·L - 1 标准储备溶液 , 使用前用甲醇稀释至相应的浓度 。
摘 要 : 提出了用高效液相色谱电化学检测法同时测定阿奇霉素颗粒中阿奇霉素 (A ZMC) 及相 关组分 (即脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 及 N2去甲基阿奇霉素) 含量的方法 。采用 Thermo C18 柱 (150 mm ×4. 6 mm ,5μm) 作固定相分离上述 4 组分 。以 20 mmol ·L - 1 磷酸二氢钾 (用 1 mol · L - 1 氢氧化钾溶液调 p H 为 7. 37) 2甲醇 (47 + 53) 为流动相 ,流量为 1. 0 mL ·min - 1 ,电化学检测电 位为 1. 05 V ,柱温为 35 ℃。阿奇霉素及相关组分的峰面积值与相应浓度之间的线性范围依次为 37. 06～593. 00 ,2. 63 ～ 84. 00 , 9. 20 ～ 294. 50 , 6. 69 ～ 107. 00 mg ·L - 1 , 检出限 ( 3 S/ N ) 分别为 9. 28 ,1. 32 ,4. 60 ,3. 35 mg ·L - 1 。用标准加入法作回收试验 ,测得平均回收率分别为 99. 9 % , 100. 6 % ,99. 9 % ,99. 8 %。
甲醇为色谱纯 ,磷酸二氢钾 、氢氧化钾为分析 纯 ,试验用水为二次蒸馏水 。 1. 2 色谱条件
Thermo C18 色谱柱 (150 mm ×4. 6 mm ,5μm) , 流动相为 20 mmol ·L - 1 磷酸二氢钾 (用 1 mol · L - 1 氢氧化钾溶液调 p H 为 7. 37) 2甲醇 (47 + 53) 混 合溶液 ,使用前经 0. 45 μm 的膜过滤 ,超声脱气 ,流 量为 1. 0 mL ·min - 1 ,进样量为 20μL ,柱温 35 ℃, 电化学检测电位为 1. 05 V 。 1. 3 试验方法
移取脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲 基阿奇霉素 、阿奇霉素储备液 ,用甲醇依次稀释配制 成脱糖氧胺阿奇霉素质量浓度分别为 2. 63 ,5. 25 , 10. 50 , 21. 00 , 42. 00 , 84. 00mg ·L - 1 ; 阿奇霉素 A 质 量 浓 度 分 别 为 9. 20 , 18. 41 , 36. 81 , 73. 63 , 147. 25 ,294. 50 mg ·L - 1 ; N2去甲基阿奇霉素质量 浓度 分 别 为 6. 69 , 13. 38 , 21. 40 , 26. 75 , 35. 67 , 53. 50 ,107. 00 mg ·L - 1 ;阿奇霉素质量浓度分别为 37. 06 ,74. 13 ,148. 25 ,296. 50 ,593. 00 mg ·L - 1 ,进 样量 20μL ,以峰面积 A 对其质量浓度进行线性回 归 ,得阿奇霉素及相关组分脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇 霉素 A 、N2去甲基阿奇霉素的线性范围 、线性回归 方程和相关系数分别为 :37. 06～593. 00 mg ·L - 1 ,
Y U JiΒιβλιοθήκη Baidun2ying1 , RAO Jun2ming1 , CHEN Ben2mei2 , L IU Shao2gang2 , D ENG Fu2l iang2 3
(1. X i an g y a Hos pi t al , Cent ral S out h U ni versit y , Chan gs ha 410008 , Chi na; 2. A nal y tical an d Testi n g Center , X i an g y a Me dical Col lege , Cent ral S out h U ni versit y , Chan gs ha 410078 , Chi na)
Key words : H PL C ; Elect rochemical detectio n ; Azit hromycin ; Related component s
收稿日期 : 2009202205 作者简介 : 余剑英 (1965 - ) ,女 ,湖南长沙人 ,主管技师 ,主要研 究方向为临床生化及免疫学 。 3 联系人 ·636 ·
Abstract : Azit hromycin ( A ZMC) and related co mpo nent s [ i. e. , deso saminylazit hromycin (DSMA ZMC) , azaeryt hromycin A (A ZEMC2A) and N2demet hylazit hromycin (N2DMA ZMC) ] in A ZMC granules were determined simultaneously by H PL C wit h elect rochemical detection ( EC detection) . The Thermo C18 column ( 150 mm × 4. 6 mm , 5μm) was used as t he statio nary p hase for separatio n of t he component s wit h column temperat ure at 35 ℃. A mixt ure of 20 mmol ·L - 1 KH2 PO4 solution (p re2adjusted to p H 7. 37 wit h 1 mmol ·L - 1 KO H solutio n) and met hanol (mixed in t he ratio of 47 to 53 by volume) was used as t he mo bile p hase wit h flow2rate of 1. 0 mL ·
阿奇霉素为氮杂内酯类新型抗生素 ,其作用机 理是通过与敏感微生物的 50S 核糖体的亚单位结 合 ,从而抑制依赖于蛋白质的合成 ,具有广谱抗菌作 用 ,且副作用小等优点 ,现已广泛应用于临床 。《中
理化检验 - 化学分册
余剑英等 :高效液相色谱电化学检测法测定阿奇霉素及相关组分
国药典》2005 年版中采用微生物检定法测定阿奇霉 素 ,其操作繁琐费时 ,影响因素多 ,误差较大 。有报 道采用液质联用技术对阿奇霉素及有关物质进行定 性分析[1] ,也有采用反相液相色谱紫外检测法测定 阿奇霉素含量[224] ,但阿奇霉素的化学结构上无共轭 双键 ,在紫外光区无特征吸收 ,只有在 190～200 nm 波长附近有末端吸收 ,但在低紫外光区 ,影响因素较 多 ,信号噪音大 ,基线难以平衡 ,对低浓度的物质进 行定量会造成比较大的误差 。《美国药典》2007 年 版中采用反相氧化铝柱分离 ,双玻碳电极的电化学 检测器进行检测 ,分离测定了阿奇霉素及相关组分 (脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲基阿奇霉 素) ;也有采用氧化铝柱分离 , 电化学检测法测定了 阿奇霉素片的有关物质[5] 。本工作采用单一玻碳电 极的电化学检测器的反相高效液相色谱法同时测定 阿奇霉素及相关组分 (脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲基阿奇霉素) 的含量 。本方法简单 、快速 、 灵敏度高 、重复性好 。
理化检验 - 化学分册
P TCA ( PA R T B :C H EM. ANAL . )
2009 年 第 45 卷 6
工作简报
高效液相色谱电化学检测法测定 阿奇霉素及相关组分
余剑英1 , 饶均明1 , 陈本美2 , 刘劭刚2 , 邓富良2 3
(1. 中南大学 湘雅医院 , 长沙 410008 ; 2. 中南大学 湘雅医学院 分析测试中心 , 长沙 410078)
间及响应灵敏度的影响较大 ,p H 值低于 7. 0 时 ,N2 去甲基阿奇霉素 、阿奇霉素不能有效分离 ;p H 值在 7. 5～8. 0 之间时 ,脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 几乎重叠 。所测化合物的响应灵敏度随 p H 值的降 低而降低 ,p H 值低于 4. 0 时 ,所测化合物几乎无 响应 。
称取阿奇霉素原料药 0. 447 4 g ,置于 10 mL 容 量瓶中 ,加适量甲醇 ,超声 10 min ,取出 ,冷却至室 温 ,用甲醇定容至刻度 ,测定前用甲醇稀释至相应浓 度 ,取溶液经 0. 45μm 的膜过滤后使用 。按色谱条
件对阿奇霉素进行测定
2 结果与讨论
2. 1 流动相缓冲溶液 p H值及甲醇浓度的选择 流动相缓冲溶液的 p H 值对各化合物的保留时
min - 1 . The EC detection was made at t he potential of 1. 05 V. Linear relationship s between values of peak area and co ncent rations of t he 4 co mpo nent s were o btained in t he ranges of 37. 06 - 593. 0 mg ·L - 1 (for A ZMC) , 2. 63 84. 00 mg ·L - 1 (for DSMA ZMC) , 9. 20 - 294. 5 mg ·L - 1 (for A ZEMC2A) and 6. 69 - 107. 0 mg ·L - 1 (for N2 DMA ZMC) . Detection limit s ( 3 S/ N ) fo und for t he 4 component s were 9. 28 , 1. 32 , 4. 60 , 3. 35 mg ·L - 1 , respectively. Test s for recovery were made by standard addition met hod , and values of average recovery obtained were 99. 9 % , 100. 6 % , 99. 9 % and 99. 8 % respectively.
试验考察了检测电位对响应灵敏度的影响 ,随 着电位 的 增 加 , 响 应 灵 敏 度 增 加 , 但 当 电 位 超 过 1. 05 V时 ,背景电流过大 。试验选用 1. 05 V 作为 检测电位 。 2. 3 柱温的选择
柱温对分离效果的影响较小 ,随着柱温的增加 , 保留时间有所缩短 ,峰的扩散有所改善 。柱温对阿 奇霉素保留时间影响最大 ,当柱温由室温 (28 ℃) 增 加至 35 ℃时 ,其保留时间由 11 min 降至 9 min 。试 验选择柱温为 35 ℃。 2. 4 工作曲线及检出限
流动相中甲醇浓度对保留时间的影响也很大 , 随着甲醇浓度的降低 ,分离有所改善 ,所测化合物的 保留时间相应延长 ,对阿奇霉素 A 影响尤为明显 , 但当甲醇量低于 52 %时 ,阿奇霉素 A 与样品中的杂 峰不能 达 到 基 线 分 离 。试 验 结 果 发 现 : p H 值 为 7. 37 ,甲醇量为 53 %时 ,所测化合物与杂质都能达 到基线分离 ,且保留时间适中 。 2. 2 工作电位的选择
关键词 : 高效液相色谱 ; 电化学检测 ; 阿奇霉素 ; 相关组分
中图分类号 : O657. 7 文献标志码 : A 文章编号 : 100124020 (2009) 0620636203
HPLC Determination of Azithromycin and Related Components with
1 试验部分
1. 1 仪器与试剂 L C26A 高效液相色谱仪 ,包括 L2ECD26A 电化
学检测器 , Hw22000 数据站 。 对照品溶液 :称取脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素
A 、N2去 甲 基 阿 奇 霉 素 、阿 奇 霉 素 对 照 品 1. 68 , 11. 78 ,2. 14 ,11. 86 mg 分别置于 10 mL 容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,配制成质量浓度分 别为 168 ,1 178 ,214 ,1 186 mg ·L - 1 标准储备溶液 , 使用前用甲醇稀释至相应的浓度 。
摘 要 : 提出了用高效液相色谱电化学检测法同时测定阿奇霉素颗粒中阿奇霉素 (A ZMC) 及相 关组分 (即脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 及 N2去甲基阿奇霉素) 含量的方法 。采用 Thermo C18 柱 (150 mm ×4. 6 mm ,5μm) 作固定相分离上述 4 组分 。以 20 mmol ·L - 1 磷酸二氢钾 (用 1 mol · L - 1 氢氧化钾溶液调 p H 为 7. 37) 2甲醇 (47 + 53) 为流动相 ,流量为 1. 0 mL ·min - 1 ,电化学检测电 位为 1. 05 V ,柱温为 35 ℃。阿奇霉素及相关组分的峰面积值与相应浓度之间的线性范围依次为 37. 06～593. 00 ,2. 63 ～ 84. 00 , 9. 20 ～ 294. 50 , 6. 69 ～ 107. 00 mg ·L - 1 , 检出限 ( 3 S/ N ) 分别为 9. 28 ,1. 32 ,4. 60 ,3. 35 mg ·L - 1 。用标准加入法作回收试验 ,测得平均回收率分别为 99. 9 % , 100. 6 % ,99. 9 % ,99. 8 %。
甲醇为色谱纯 ,磷酸二氢钾 、氢氧化钾为分析 纯 ,试验用水为二次蒸馏水 。 1. 2 色谱条件
Thermo C18 色谱柱 (150 mm ×4. 6 mm ,5μm) , 流动相为 20 mmol ·L - 1 磷酸二氢钾 (用 1 mol · L - 1 氢氧化钾溶液调 p H 为 7. 37) 2甲醇 (47 + 53) 混 合溶液 ,使用前经 0. 45 μm 的膜过滤 ,超声脱气 ,流 量为 1. 0 mL ·min - 1 ,进样量为 20μL ,柱温 35 ℃, 电化学检测电位为 1. 05 V 。 1. 3 试验方法
移取脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇霉素 A 、N2去甲 基阿奇霉素 、阿奇霉素储备液 ,用甲醇依次稀释配制 成脱糖氧胺阿奇霉素质量浓度分别为 2. 63 ,5. 25 , 10. 50 , 21. 00 , 42. 00 , 84. 00mg ·L - 1 ; 阿奇霉素 A 质 量 浓 度 分 别 为 9. 20 , 18. 41 , 36. 81 , 73. 63 , 147. 25 ,294. 50 mg ·L - 1 ; N2去甲基阿奇霉素质量 浓度 分 别 为 6. 69 , 13. 38 , 21. 40 , 26. 75 , 35. 67 , 53. 50 ,107. 00 mg ·L - 1 ;阿奇霉素质量浓度分别为 37. 06 ,74. 13 ,148. 25 ,296. 50 ,593. 00 mg ·L - 1 ,进 样量 20μL ,以峰面积 A 对其质量浓度进行线性回 归 ,得阿奇霉素及相关组分脱糖氧胺阿奇霉素 、阿奇 霉素 A 、N2去甲基阿奇霉素的线性范围 、线性回归 方程和相关系数分别为 :37. 06～593. 00 mg ·L - 1 ,