蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
331蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
水解性
因有机磷农药属酯 类，故在一定条件 下能水解,在碱性介 质、高温、水分含 量高等环境中，更 易水解。 如敌百虫在碱性溶 液中易水解为毒性 较大的敌敌畏。
四、性质
溶解性
氧化性
由于各种有机磷农 药的极性强弱不同 ，故对水及各种有 机溶剂的溶解性能 也不一样， 但多数有机磷农难 溶于水，可溶于脂 肪及各种有机溶剂 。
剂。摇匀后于35 ℃放置10 min以上。 于“检测”状态下选择“农药残留”项目，按“确认”键，选择样品
种类中的“蔬菜”项，按“确认”键。 将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀 马上放入仪器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min，
过程中请勿打开盖子。 样品测试结束后仪器显示值为样品的农药残留抑制率。
速测卡法（ 纸片法） 原理
胆碱酯酶可催化靛酚乙 酸酯（ 红色）水解为乙酸 与靛酚（ 蓝色），有机磷 或氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶有抑制作用， 使催化 、水解、变色的过程发生改 变， 由此可判断出样品中 是否有高剂量有机磷或氨基 甲酸酯类农药的存在。
酶抑制率法（ 分光光度法） 原理
在一定条件下， 有机磷和氨基甲酸酯 类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，
上海农林职业技术学院
实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法
1、样品处理
选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，去掉不可食
部分后称取蔬菜试样，剪成1 cm左右碎片。取样品2g，放入
烧杯或提取瓶中，加入10mL缓冲液，超声波振荡3 min，静
置3~5 min，待用。
样品不可用水冲洗，取不同植株叶片的叶尖部样品。
有机磷农药中，硫 代磷酸酯农药在溴 作用下或在紫外线 照射下， 分子中S易被O取代 ，生成毒性较大的 磷酸酯。
蔬菜农药残留快速检测技术
蔬菜农药残留快速检测基础知识一、蔬菜农药残留酶抑制法检测原理农残速测仪检测原理是酶抑制法，在必然条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
在正常情况下，酶催化代谢产物水解，其水解产物与显色剂反映，产生黄色物质，用分光光度计在410纳米处测定吸光度随时间的转变值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断样品中是不是有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
二、农药残留速测法检测对象一、有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。
二、氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威（呋喃丹）、异丙威、灭多威等。
三、农药残留速测法依据的标准中华人民共和国国家标准GB/—2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布四、检测方式一、准备阶段试剂或条件发生转变及时间距离比较长时，应重做。
①开机预热15分钟。
②仪器调0。
③仪器调100。
④制作对照。
第①、②、③步在天天利用前必需做，在改换新一瓶试剂时也必需做。
二、对照①在干净的试管顶用移液管加入提取液。
②用移液器提取的酶，加入到试管中。
③用移液器提取的显色剂，加入到试管中。
④适度晃动试管，使液体混合均匀，25℃左右的温度放置15分钟。
⑤15分钟后，用移液器提取的底物，加入到试管中，晃动试管，使液体混合均匀，马上倒入比色皿中，放入仪器1通道，按启动键开始检测。
⑥时间到后显示对照结果，一般对照值应在30以上，按Y保留，对照结束。
3、样品检测液①用天平称取表面干净蔬菜或水果1g剪成1cm左右的方块，放入小烧杯中。
②用移液器提取5ml的提取液用振荡器震荡2分钟。
③将烧杯中的液体用移液器提取的上清液到试管中，为检测液。
酶抑制率法快速检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量
·50·试 验 研 究农业开发与装备 2013年第4期于人类健康。
因此，该“液肥”系列产品对环境、土壤和人类健康的影响，是无法用增产增收效果来衡量的。
3.3 操作简单、容易掌握该“液肥”系列产品应用操作简单，使用方便、针对性强，见效快，通过四年来的推广应用，深受广大农民群众欢迎，成为在发展绿色生态农业中起着不可忽视的作用。
3.4 增强植株抗性，达到健身栽培效果明显该“液肥”系列产品应用后，作物生长健壮，减轻了自然灾害，减少农药和化肥用量，保证农产品的无公害、绿色、安全生产，促进了干旱地区的农业生产向着高产、高效、优质、绿色农产品方向发展的转变，促进了社会健康和文明发展，实现了农业的可持续发展。
摘要：介绍了采用酶抑制率法快速测定有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的技术，酶抑制率法即分光光度法，是根据在一定条件下，有机磷及氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关，进而通过抑制率来判断蔬菜中是否含有有机磷及氨基甲酸酯类农药的存在。
因其快速、简便、经济等特点，应用范围涵盖较广，保证有问题的蔬菜及时的排除。
关键词：酶抑制率法；快速检测；蔬菜；有机磷及氨基甲酸酯类；农药残留量；乙酰胆碱酯酶；分光光度法食品安全是民生工程，关系国计民生的头等大事。
农产品安全是食品安全工作中的重中之重，也是未来社会的发展趋势。
农产品质量安全是人民群众生存的基本要求，因此，农产品质量安全有保障，人民群众的身体健康和生命安全才有保障。
目前，各级政府和各级农业行政主管部门对蔬菜生产与流通环节中的监管措施和频次在不断强化。
这就需要我们开发出用时少、成本低，易操作的快速检测方法应用于蔬菜生产基地、蔬菜批发市场等地。
而传统的检测技术使用大型仪器设备，由于其检测时间长、成本高、对检测人员专业性要求高等不利因素而无法马上对有问题的农产品进行应急处理。
1 实验原理酶抑制率法是在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的快速检测中。
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
随着工业的发展和农业的现代化，化学农药的广泛应用成为农业生产中的常见现象。
因此，农产品中农药残留已成为一个普遍的问题。
为了确保消费者的健康和安全，需要对
农产品中的农药残留进行检测。
其中，有机磷类及氨基甲酸酯类农药是最常见的农药残留
物之一。
本文将介绍如何快速检测蔬菜中的有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留量。
有机磷类农药是一类广泛使用的农药，它的主要成分是磷酸酯化合物。
这种农药可以
杀死害虫、杂草和真菌，从而保护作物的生长。
但是，它往往会对环境和人体产生有害影响，因此需要对其进行检测。
在蔬菜中，有机磷类农药的常见成分包括马拉硫磷、甲胺磷、乐果等。
针对这些残留物的检测方法主要有色谱法、荧光法和电化学法等。
其中，色谱法
是最常见的检测方法之一。
该方法可以快速和准确地检测出有机磷类农药在蔬菜中的残留量。
除了现有的检测方法之外，近年来还出现了一种新型的检测技术——基于光纤传感器
的检测技术。
这种技术利用光纤的传导性能和敏感度来检测蔬菜中的农药残留。
与传统的
检测方法相比，基于光纤传感器的检测技术具有响应快、准确、灵敏度高等特点，可以快
速地检测出蔬菜中的农药残留，同时可节省检测成本和时间。
总之，在蔬菜中确定有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测对保障农产品质
量和消费者的健康至关重要。
通过创新技术和不断的研究，我们可以期望未来的检测方法
会更加成熟、高效和安全。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准1. 范围本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检验方法。
本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。
测试方法酶抑制率法2. 原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在410nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
3.试剂3.1 pH8.0缓冲溶液：分别取43.5g无水磷酸氢二钾与2.2g磷酸二氢钾，用510mL蒸馏水溶解。
3.2 显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg 碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4°C冰箱中保存。
3.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.1mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。
保存期不超过十天。
3.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3 min 的吸光度变化D A0值应控制在0. 3以上。
摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超十天。
3.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。
乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。
4 仪器4.1 分光光度计或相应测定仪。
4.2常量天平。
4.3 恒温水浴或恒温箱5 分析步骤5.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL 缓冲溶液，静制十五分钟，之间需振荡几次，待用。
5.2 对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，依次加入0.lmL酶液、0.1mL显色剂、0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值ΔA0。
关于农残快速检测中假阳性问题及对所谓对比数据库
关于农残快速检测中假阳性问题及对所谓“对比数据库”的说明一、酶抑制率法检测原理我们生产的LDSJ-RM10型10通道农药残留速测仪,是采用国家标准GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》规定的分析方法。
该方法采用酶抑制率法(分光光度法),分析原理是基于一种生物化学反应,即:在正常情况下乙酰胆碱(底物)在乙酰胆碱酯酶的作用下发生水解反应,生成胆碱和乙酸,生成的胆碱与二硫双对硝基苯甲酸(显色剂)产生显色反应,使反应液呈黄色。
如果样品中带有有机磷和氨基甲酸酯类农药,由于农药的存在能抑制酶的活性,使上述生物化学反应速度减慢,从而使水解反应生成的胆碱减少,使显色反应产生的黄色变浅。
通过测量一段反应时间内(国家标准规定为3min)溶液颜色的变化率(吸光度随时间的变化值),即表示为农药抑制酶活性的抑制率。
通过测量抑制率的大小,可以判断出样品中是否有高剂量农药的存在。
二、酶抑制率法产生假阳性问题的原因酶抑制率法测定某些蔬菜中农药残留量存在假阳性,这一点在国家标准GB/T 5009.199-2003的说明中就明确指出:“15.1葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有对酶有影响的植物次生物质,容易产生假阳性”。
综合文献资料和我们的研究,产生假阳性的原因如下:1.某些蔬菜样品中含有对酶有抑制作用的植物次生物质,它同样也能起到农药抑制酶活性的作用,故会使测定结果偏高,即产生假阳性,严重时使酶完全失去活性,导致无法测量(如蒜)。
2.另一类蔬菜色素含量高(如韭菜含叶绿素高),汁液多(如番茄等),经样品处理后会使测试溶液带色或发浑,而这些带色或发浑的溶液在测试时容易发生变化,从而影响光度法的测定。
三、关于“农药残留果蔬对比数据库”是否科学有效的问题所谓的“对比数据库”实际上是2004年上海某研究所和上海某公司共同研究出来的一个对付假阳性的数据库参照对比软件。
KJ 食药总局农残快检方法公文
蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测（KJ201710）1范围本方法规定了蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测方法。
本方法适用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速测定。
酶抑制（率）法（分光光度法）2原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1丙酮（CH3COCH3）。
3.1.2磷酸氢二钾（K2HPO4）。
3.1.3磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.45,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（C14H8N2O8S2）。
3.1.5碳酸氢钠（NaHCO3）。
3.1.6碘化乙酰硫代胆碱（ C7H16INOS）。
3.1.7pH8.0缓冲溶液：分别称取11.9 g无水磷酸氢二钾及3.2 g磷酸二氢钾，溶解于1000 mL水中，混匀。
3.1.8显色剂：分别取160 mg 5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）和15.6 mg碳酸氢钠，用20 mL缓冲溶液溶解，4 ℃冰箱中保存。
3.1.9底物：取125 mg碘化乙酰硫代胆碱，加15 mL蒸馏水溶解，摇匀后置于4 ℃冰箱中保存备用。
保存期不超过两周。
3.1.10乙酰胆碱酯酶：4 ℃冰箱中保存备用。
3.2 参考物质—1—3种有机磷和2种氨基甲酸酯类农药参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥98%。
表1 有机磷和氨基甲酸酯类参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量3.3 标准溶液的配制3.3.1克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准储备液（1000 μg/mL）：冷藏、避光、干燥条件下保存。
关于农残快速检测中假阳性问题及对所谓对比数据库
关于农残快速检测中假阳性问题及对所谓“对比数据库”的说明一、酶抑制率法检测原理我们生产的LDSJ-RM10型10通道农药残留速测仪，是采用国家标准GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》规定的分析方法。
该方法采用酶抑制率法（分光光度法），分析原理是基于一种生物化学反应，即：在正常情况下乙酰胆碱（底物）在乙酰胆碱酯酶的作用下发生水解反应，生成胆碱和乙酸，生成的胆碱与二硫双对硝基苯甲酸（显色剂）产生显色反应，使反应液呈黄色。
如果样品中带有有机磷和氨基甲酸酯类农药，由于农药的存在能抑制酶的活性，使上述生物化学反应速度减慢，从而使水解反应生成的胆碱减少，使显色反应产生的黄色变浅。
通过测量一段反应时间内（国家标准规定为3min）溶液颜色的变化率（吸光度随时间的变化值），即表示为农药抑制酶活性的抑制率。
通过测量抑制率的大小，可以判断出样品中是否有高剂量农药的存在。
二、酶抑制率法产生假阳性问题的原因酶抑制率法测定某些蔬菜中农药残留量存在假阳性，这一点在国家标准GB/T 5009.199-2003的说明中就明确指出：“15.1葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性”。
综合文献资料和我们的研究，产生假阳性的原因如下：1．某些蔬菜样品中含有对酶有抑制作用的植物次生物质，它同样也能起到农药抑制酶活性的作用，故会使测定结果偏高，即产生假阳性，严重时使酶完全失去活性，导致无法测量（如蒜）。
2．另一类蔬菜色素含量高（如韭菜含叶绿素高），汁液多（如番茄等），经样品处理后会使测试溶液带色或发浑，而这些带色或发浑的溶液在测试时容易发生变化，从而影响光度法的测定。
三、关于“农药残留果蔬对比数据库”是否科学有效的问题所谓的“对比数据库”实际上是2004年上海某研究所和上海某公司共同研究出来的一个对付假阳性的数据库参照对比软件。
19.(2)绿色食品—果蔬农残检测操作规范
主题：绿色食品—果蔬农残检测操作规范受控：受控主编：杨翠欣编号：XYWJ/Q-C008（2）审核：熊颖版本： 1归口：质量页次：抄送： 园区运营 园区管理 市场修订次数：第1次修改人力资源 IT 项目 财务旅游 种植 养殖生效日期：2018.08.011/5绿色食品—果蔬农残检测操作规范1.酶抑制率法（分光光度法）1.1测前取样1.1.1绿色食品果蔬采收前都需进行农药残留检测。
1.1.2采样方法及取样量见《绿色食品—果蔬农残检测取样操作规范》。
1.2.溶液的配置1.2.1缓冲液：将缓冲液试剂倒入烧杯中，加蒸馏水500ml,溶解，混匀后倒入瓶中即可。
1.2.2显色剂：在标有显色剂的瓶中添加5ml缓冲液，摇匀。
在冰箱中冷藏（1~4°c）切勿冷冻结冰。
1.2.3底物：在标有底物的瓶中添加5ml蒸馏水，摇匀。
在冰箱中冷藏（1~4°c）切勿冷冻结冰。
1.2.4酶：将酶液倒入酶试剂专用瓶中。
在冰箱中冷藏（1~4°c）切勿冷冻结冰。
1.3仪器使用1.3.1将仪器打开，仪器要求开机后预热3分钟以上，才能稳定使用，为了保证测试效果的准确性，从开机到检测间隔时间要大于3分钟。
1.3.2通道开关初次使用默认为全部通道是打开的状态，由符号√表修订次数：第1次修改页次：2/5示。
通过上下移动光标，并按“确定”键，实现通道打开和关闭两种状态的切换。
通道关闭由“×”表示。
1.4 操作方法1.4 .1对照液测定在离心管中，用移液枪依次加入50uL酶，3ml缓冲液、20uL显色剂摇匀，放到37度的水中静置10分钟。
用移液枪加入20uL底物。
摇匀后移到比色皿中，放入仪器检测。
点击“对照”三分钟后检测完成。
当酶活性不足时，仪器将给出提示。
1.4.2样品检测擦去绿色食品果蔬样品表面泥土，称取2克果皮（叶菜剪成1cm左右的菜样，块根菜取横截面）放入烧杯中，加入8ml缓冲液，摇匀，静置2分钟，获取样品液。
蔬菜农药残留的快速检测技术
蔬菜农药残留的快速检测技术
第22页
PR-3 便携式农药残毒快速检测仪
4.再次按“START”键，单片电脑开始“TEMP1”倒 计时；
5.当听到连续“哗、哗、哗”声，屏幕显示 “CLOS”，提醒合上前盖，进入“TEMP2”倒计时；
6.当听到六声“哗、哗、哗”音，此次操作结束，打 开上盖观察试纸颜色改变；
第6页
速测仪法主要缺点:
1. 酶试剂易失活，造成反应不稳定，检测结果 误差较大，重复性不好， 实际应用中确实认 率大约为 60%~70%左右；
2. 存在检测盲区，只能检测有机磷和氨基甲酸 酯两类农药，不能检测有机氯类、菊酯和其它 类别剧毒农药；
3. 不适合检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡 萝卜、茭白、蘑菇、花椒等 14 种轻易出现假 阳性农产品；
蔬菜农药残留的快速检测技1.5 可选取由以上试剂制备试剂盒。乙酰胆碱 酯酶△Ao值应控制在0.3以上。
2.仪器 2.1 分光光度计或对应测定仪及常量天平。
蔬菜农药残留的快速检测技术
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酶抑制率法（分光光度法）
3.分析步骤 3.1 样品处理：选取有代表性蔬菜样品，冲洗
蔬菜农药残留的快速检测技术
第7页
速测仪检测方法有两种: (GB/T5009.199-)
⒈速测卡法（纸片法） ⒉酶抑制率法（分光光度法）
蔬菜农药残留的快速检测技术
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两种快速检测方法技术原理
依据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中 枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶活性造成神 经传导介质乙酰胆碱积累，影响正常传导，造 成昆虫中毒致死原理而设计。
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农药残留主要检测方法有两种：
⒈色谱检测法 色谱检测法用作农残定量分析，可为农药残留执法提 供依据。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称 敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷 乐果
检出限 mg/kg
0.1 1 0.3 2 4 3
农药名称 氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5 0.1 0.05 0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。 当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)
结果计算
抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 式中： ΔA0对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔAt样品溶液反应3min吸光度的变化值；
结果判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表 示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
原理
试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与３. ２g磷酸二氢钾，用1000mL 蒸馏水溶解。
显色剂 分别取160mg二 硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 和15.6mg碳酸氢钠，用20mL 缓冲溶液溶解，4℃冰箱中 保存。
试剂 底物：取25.0mg硫代乙酰 胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解， 摇匀后置4℃冰箱中保存备 用。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法
蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜；1范围：本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。
本标准适用于叶菜类叶菜类（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜类（除胡萝卜茭白）中甲胺磷氧化乐果对硫磷甲拌磷久效磷倍硫磷杀扑磷敌敌畏克百威涕灭威灭多威抗蚜威丁硫克百威甲萘威丙硫克百威速灭威残杀威异丙威等的农药残毒的快速检测。
2原理：有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒死亡，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。
加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。
即：乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药→酶活性被抑制→活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药乙酰胆碱酯酶+样本提取液︱→→活性正常→样本中不含有有机磷或氨基甲酸酯类农如以乙酰硫代胆碱（AChE）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410纳处有最大吸收峰，用分光光度计可测的酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。
3试剂：3.1磷酸缓冲液。
3.2丁酰胆碱酯酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，⊿A值控制在0.4～0.8之间。
3.3底物典化硫代丁酰胆碱，用缓冲液溶解。
3.4显色济：二硫代二硝基甲酸，用缓冲液溶解。
4仪器:4.1波长为410纳米±3纳米专用测速仪,或用可见光分光度计.4.2电子天平（准确度0.1克）.4.3微型样品混合器.4.4台式培养箱4.5可调移液枪: （10～100微升,1～5毫升）.4.6不锈钢取样器（内径2厘米）.4.7 配套玻璃仪器及其他配件等.5 检测5.1 取样用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少八～十片叶子)的样本;果皮从表皮到果肉1-1.5厘米处取样.5.2检测过程取两克切碎的样本(非叶菜类取4克),放入提取瓶内,加入20毫升缓冲液震荡一到两分钟,倒出提取液,静止3-5分钟;于小试管内分别加入五十微升酶,3毫升样本提取液,50微升显色剂,于37～38℃下放置30分钟后再分别加入50微升底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定.5.3 检测结果计算检测结果按式(1)计算抑制率(%)=﹝△ΑC-△Αs﹞/△Α c ×100 (1)式中△ΑC——对照组三分钟后与三分钟前吸光值之差;△Αs——样本三分钟后与三分钟前吸光值之差.抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有2次以上重复检测,几次重复检测的重现性应在80%以上.6最低检出浓度本方法的最低检出浓度见表1。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测探讨
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测探讨陈翠珊【摘要】现阶段对蔬菜中农药残留量最主要的检测方法包括速测卡法和酶抑制率法。
这两种方法的检验检出限主要是根据农药种类的不同而不同。
对于速测卡法来讲，其检出限一般为0.3～3.5 mg/kg，检出时间约在15 min左右；酶抑制剂的检出限一般在0.05～5.0 mg/kg，检出时间需要30 min。
两种检测方法可用于现场检测，并且具有操作简单、测试成本较快的特点。
这两种检测方法对超过国家相关安全标准的残留限量和未按规定使用的有机磷等农药残留的检出率能够达到80%。
或者更高，对于我国蔬菜农药残留检测来讲，这两种方法相比较而言是比较适合的。
【期刊名称】《农业科技与信息》【年(卷),期】2016(000)018【总页数】2页(P29-29,31)【关键词】有机磷;氨基甲酸酯;农药残留;快速检测【作者】陈翠珊【作者单位】广东省普宁市农产品质量安全监督检测站，广东普宁 515300【正文语种】中文【中图分类】R155.5食品安全管理中一个重要的方面就是蔬菜中的农药残留，对于蔬菜中农药残留量的检验主要是指对有机磷与氨基甲酸乙酯类农药残留量的检测。
对于这两类农药的检测行业标准方法为气相色谱法。
尽管该方法具有比较高的灵敏度，但是由于该操作耗费时间比较长，在实际检验工作中的应用价值不高［1］。
为了有效地解决此类问题，相关研究人员对蔬菜中有机磷、甲酸酯类农药的快速检测方法展开研究，找出了两种具有规范意义的快速检测方法，这两种检测方法不仅检测速度比较快，同时所受外部环境影响比较小，可以同时完成多个样品的检测。
1.1 速测卡法纸片法。
1.1.1 材料本实验所需要的材料：固化有靛酚乙酸酯以及胆碱酯酶试剂的试纸、缓冲溶液、并且将其用500 mL蒸馏水溶解），天平，如果条件允许则配备（37±2）℃恒温装置。
1.1.2 整体测定法选取具有一定代表性的蔬菜5 g，将其放入带盖瓶中，并且加入一定量的缓冲溶液。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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1.0
T
100
A
50
A
0.5
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C
T%
分光光度法（紫外 -可见分光光度法） 光电比色法 UV-VIS
Ultraviolet Visual Spectroscopy
0.575
光源 参比 I0
单色器
吸收池
检测器
显示
It A lg lg T bC I0
入射光 I0 透射光 It
样品
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
结果计算
抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 式中： ΔA0对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔAt样品溶液反应3min吸光度的变化值；
结Байду номын сангаас判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表 示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
有机磷和氨基甲酸酯类
农药残留量快速检测 —酶抑制率法(分光光度法)
分光光度法的原理简介 酶抑制率法(分光光度法)
吸光光度法: 基于物质对光的选择 性吸收而建立的分析方法, 包括目 测比色法和分光光度法。 不同物质由于结构不同,所吸收光 的波长及吸收程度不同,这就是物质 对光的选择性吸收
当一束强度为I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时， 由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收， 一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则透光率T 定义为 T=It /I0，而－lgT称为吸光度A，即 Ａ＝－lgT=lgI0/It
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称 敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷 乐果
检出限 mg/kg
0.1 1 0.3 2 4 3
农药名称 氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5 0.1 0.05 0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。 当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
原理
试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与３. ２g磷酸二氢钾，用1000mL 蒸馏水溶解。
显色剂 分别取160mg二 硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 和15.6mg碳酸氢钠，用20mL 缓冲溶液溶解，4℃冰箱中 保存。
试剂 底物：取25.0mg硫代乙酰 胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解， 摇匀后置4℃冰箱中保存备 用。
入射光 I0
透射光 It
测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横 坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得 一曲线，此曲线即为吸收光谱。 不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光 度随浓度增大而增大。 在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。
有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度c及吸 光溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或朗伯－比尔 定律，其数学表达式为 A=εbc 式中： b为液层厚度，单位为cm； c为浓度，单位为mol.L-1； ε为摩尔吸光系数，单位为 L.mol-1.cm-1。