蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)

结果计算
抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 式中： ΔA0对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔAt样品溶液反应3min吸光度的变化值；
结果判定


结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表 示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
有机磷和氨基甲酸酯类
农药残留量快速检测 —酶抑制率法(分光光度法)
分光光度法的原理简介 酶抑制率法(分光光度法)
吸光光度法: 基于物质对光的选择 性吸收而建立的分析方法, 包括目 测比色法和分光光度法。 不同物质由于结构不同,所吸收光 的波长及吸收程度不同,这就是物质 对光的选择性吸收
当一束强度为I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时， 由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收， 一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则透光率T 定义为 T=It /I0，而－lgT称为吸光度A，即 Ａ＝－lgT=lgI0/It
入射光 I0
透射光 It
测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横 坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得 一曲线，此曲线即为吸收光谱。 不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光 度随浓度增大而增大。 在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。
有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度c及吸 光溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或朗伯－比尔 定律，其数学表达式为 A=εbc 式中： b为液层厚度，单位为cm； c为浓度，单位为mol.L-1； ε为摩尔吸光系数，单位为 L.mol-1.cm-1。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称 敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷 乐果
检出限 mg/kg
0.1 1 0.3 2 4 3
农药名称 氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5 0.1 0.05 0.2 0.05
说明


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葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。 当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
原理
试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与３. ２g磷酸二氢钾，用1000mL 蒸馏水溶解。
显色剂 分别取160mg二 硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 和15.6mg碳酸氢钠，用20mL 缓冲溶液溶解，4℃冰箱中 保存。
试剂 底物：取25.0mg硫代乙酰 胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解， 摇匀后置4℃冰箱中保存备 用。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤



样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
1.0
T
100
A
50
A
0.5
0
0
C
T%
分光光度法（紫外 -可见分光光度法） 光电比色法 UV-VIS
Ultraviolet Visual Spectroscopy
0.575
光源 参比 I0
单色器
吸收池
检测器
显示
It A lg lg T bC I0
入射光 I0 透射光 It
样品