miRNA操作手册(2013版)

上海艾博思生物技术有限公司
IBS—全面生物技术解决方案
Shanghai Integrated Biotech Solutions Co., Ltd.
B. MiRNA 全面解决方案
miRNA
GO
分离纯化
miRNA 转染
MiRNA 检测
MiRNA 功能
In vivo 研究
细胞 miRNA 分离纯化 脂质体
4. miRNA 阴性对照
上海艾博思 miRNA 模拟物和抑制物阴性对照，与哺乳动物基因无同源性，通过严格的 BLAST 比对，并且多篇文献引物有很强的阴性结果的说服力。
上海浦东张江高科技园紫薇路 750 弄 10 号 202 室，邮编：201203,电话：021-38770863 传真：021-38770863 E-mail:order@ibsbio.com,service@ibsbio.com,support@ibsbio.com
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Ⅰ. MiRNA 简介
A. MiRNA 实验原理
microRNA(miRNA)是一类长度很短的非编码调控单链小分子 RNA，约 20~24 nt(少数小于 20 nt 的)，由一段具有发夹环结构的长度为 70~80 nt 的单链 RNA 前体(pre-miRNA)剪切后生成。它通过与其目标 mRNA 分子的 3'端非编码区 域(3'-untranslated region, 3' UTR)互补匹配导致该 mRNA 分子的翻译受到抑制。 miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大 部分定位于基因间隔区。
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D. 上海艾博思 MiRNA 供应的产品
A. miRNA oligos
1. 常规的 miRNA mimics(模拟物) 2.修饰的 miRNA mimics(模拟物)
1.SiMi Transfection Reagents
z 低浓度条件下的 miRNA 转染，最大程度避免脱靶效应 z 难转染细胞适用 z miRNA 模拟物和抑制剂的高效转染 z miRNA 高效转染 z 在含血清培养基中也能表现高转染效率 z 适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便
z 艾博思生物专业的设计团队进行设计与合成 z miRNA 模拟物是双链设计 z miRNA 抑制物是单链的甲氧基修饰设计
B. miRNA oligo 技术数据
与 miRNA 相关的一些技术数据及注意事项 miRNAmimics 模拟物
1. miRNA 模拟物的一般的平均分子量 13,300。 2. miRNA oligo 的 OD、nmol 和质量间有相应的公式可以计算；一般情况下，对
简洁 z 可在室温下运输，在 4℃下可长期保存 参考目录册 Z-01
2. DVEx Transfection Reagents
z DNA 高效转染 z DNA 和 miRNA/miRNA 共转染的高效转染 z 易于操作的转染流程 z 无动物源成分 z 在含血清培养基中也能表现高转染效率 z 适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便
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miRNA 抑制物阴性对照
miRNA 荧光标记的转染对照
基因表达的检测方法 miRNA 水平检测用 qRT-PCR
蛋白表达水平检测用 western blot
荧光素酶试验检测目的 miRNA 与目的基因的
3’UTR 的结合试验
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C. 上海艾博思 miRNA 产品特点
上海艾博思拥 miRNA oligo 合成是在 ISO9001 质量标准及严格控制的流程和条件下完 成的，确保了产品质量的高度稳定。化学合成 miRNA 有操作简便、转染效率高、对细胞的 或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下，进行 miRNA 有效片段的筛选。化学修饰的 miRNA Oligo 不仅增强了 miRNA 在血清、体内及细 胞培养中的稳定性，同时也延长了 miRNA 的作用时间。
蛋白分析
Western blot
报告系统分析
荧光素酶报告系统
大规模 miRNA 质粒
慢病毒
C. MiRNA 实验所需试剂
试剂种类
试剂用途
miRNA oligo
miRNA 模拟物上调 miRNA 丰度
miRNA 抑制剂下调 miRNA 的丰度
转染试剂
如脂质体法，电穿孔法等
实验对照
miRNA 模拟物阴性对照
上海浦东张江高科技园紫薇路 750 弄 10 号 202 室，邮编：201203,电话：021-38770863 传真：021-38770863 E-mail:order@ibsbio.com,service@ibsbio.com,support@ibsbio.com
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于一个 21 bp 的 miRNA oligo，有如下简单关系：1 OD duplex＝3.0 nmols＝40 ug 3. 1 OD 的 miRNA 欲溶解为 20 uM 的样品，可用 150 uL DEPC H2O 去重悬 1 OD 的 miRNA，溶解后为 20 uM 的样品。 4. 由于 Oligo RNA 呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管 子前先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量 DEPC 水后盖上管盖， 振荡溶解 5. 荧光标记的 RNA，如 FAM、HEX、TAMRA 等标记的 Oligo 因为对光敏感， 必须避光保存。 miRNA inhibitors 抑制物 1. miRNA inhibitors(抑制物)的一般的平均分子量 6,660。 2. miRNA oligo 的 OD、nmol 和质量间有相应的公式可以计算；一般情况下，对 于一个 21 bp 的 miRNA oligo，有如下简单关系：1 OD duplex＝5.0 nmols＝33 ug 3. 1 OD 的 miRNA 抑制物欲溶解为 20 uM 的样品，可用 250 uL DEPC H2O 去重 悬 1 OD 的 miRNA，溶解后为 20 uM 的样品。 4. 由于 Oligo RNA 呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管 子前先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量 DEPC 水后盖上管盖， 振荡溶解 5. 荧光标记的 RNA，如 FAM、HEX、TAMRA 等标记的 Oligo 因为对光敏感， 必须避光保存。
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B. miRNA 转染
1. SiMi Transfection Reagents
2. DVEx Transfection Reagents
2. 化学修饰 miRNA Oligo
上海艾博思化学修饰 miRNA Oligo 不仅增强了 miRNA 在血清、体内及细胞培养中的 稳定性，同时与标准 miRNA 作用时间相比，化学修饰 miRNA Oligo 的作用时间可延长一 倍左右。
3. 荧光标记 miRNA Oligo
荧光标记 miRNA oligo 可用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等观察到，可 直观地观察 miRNA 转染效率，优化转染条件；荧光标记的 miRNA 还可用于 miRNA 细胞定 位及双标实验（配合标记抗体）来追踪转染过程中导入了 miRNA 的细胞，将转染与靶蛋白 表达结合起来。
3. 荧光标记 miRNA Oligos
4. miRNA mimics(模拟物)对照
5. miRNA inhibitors(抑制物)
6．miRNA inhibitors(抑制物)对照
1. 常规的 miRNA Oligo
上海艾博思 miRNA Oligo 是在 ISO9000 质量标准下生产并经过了反复优化和严格测 试；产品质量高度稳定，以退火双链 RNA 冻干粉的产品形式提交给用户。
组织 miRNA 分离纯化 pSi-Transfection
血液 miRNA 分离纯化
Reagent
Lipo2000
MiRNA qRT-PCR Microarray
SYBR 染料法
基因芯片
Probe 探针法
miRNA 芯片
动物实验级别
大规模 miRNA 模拟物
miRNA 抑制物
PEI
病毒
慢病毒（lentivirus ） 腺病毒（adenovirus）
MiRNA 转染试剂
MiRNA 转染试剂是一种基于脂质的转染试剂，专门用于转染，确保没有 RNAse 活性， 细胞毒性低。适用细胞广泛；可在含有抗生素的完全培养基中转染；即用型试剂，不必更换 培养基，操作简便易行，重复性好，可在半小时内完成操作；介导 miRNA 高转染细胞和体内
高效导入，即使在含血清培养基中也能表现高转染效率； 4℃下可长期保存。
使用说明
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Ⅱ. 艾博思 miRNA oligos 产品特性
A. 哺乳动物 miRNA mimics(模拟物)和 inhibitors 抑制物设计
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上海艾博思 miRNA 产品特性
质量控制
纯化 标记和修饰
长度 储存和稳定性
使用说明
IBS-miRNA oligos
zmiRNA mimics(模拟物) zmiRNA inhibitors(抑制物)
操作手册
上海艾博思生物技术有限公司
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IBS-miRNA oligos
z miRNA mimics(模拟物) z miRNA inhibitors(抑制物)
简洁 z 可在室温下运输，在 4℃下可长期保存 z 功能基因组研究、高通量 DNA 转染、shRNA 载体转染 参考目录册 Z-02
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