沙门氏菌的检测PPT课件
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2021
制法
• 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水(制作基础液), • 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中,柠檬
酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中, • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷
至80 ℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液 中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混 匀。调节pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50 ℃~55 ℃。 加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。
2021
TTB培养基使用方法和注意事项
•
• 1.使用方法:称取本品93.55g,溶解于1050ml蒸馏水中, 加热溶解,临用前加入20%碘液20ml,0.5g煌绿2ml。
• 2.注意事项:TTB培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。
一、实验目的
• 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 • 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理
2021
二、实验器材
• 1.菌种:沙门氏菌、大肠杆菌 • 2.检样:鲜鸡蛋 • 3.培养基:四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液;氯化镁孔雀
绿增菌液(MM);亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸 铋(BS)琼脂;HE 琼脂;SS琼脂;三塘铁琼脂(TSI) • 4.设备:冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌Байду номын сангаас形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛 细管
• 使溶解,再加无菌蒸馏水至100mL 即成,如为DL-胱氨酸 ,用量应加倍)。摇匀,调202节1 pH。
SC增菌液各成分的作用 蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求, 乳糖是可发酵的糖类; 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数 革兰氏阴性菌的生长, 磷酸盐是缓冲剂, L-胱氨酸为还原剂。
2021
基础液
• 蛋白胨 10.0 g
蒸馏水 1 000 mL
• pH 7.0±0.2
牛肉膏 5.0 g
• 氯化钠 3.0 g
• 碳酸钙 45.0 g(碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程 中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选 产酸菌的作用)
• 除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入 碳酸钙,调节pH,高压灭菌121 ℃,20 min
2021
硫代硫酸钠溶液 • 硫代硫酸钠(含5 个结晶水) 50.0 g • 蒸馏水 加至100 mL • 高压灭菌121 ℃,20 min。(硫代硫酸钠作为中和剂
,可以灭菌121,15min,没有影响的,检验含有次氯酸 钠的消毒水微生物,需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液;培 养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸,能抑制大部分 大肠埃希氏菌的生长,而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长, 因为沙门氏菌具有四硫磺酶,能分解四硫磺酶。)
2021
5.HE 琼脂
• 基础成分: • 蛋白胨 12.0g 牛肉膏 3.0g 乳糖 12.0g 蔗糖 12.0g • 水杨素 2 .0g 胆盐 20.0g 氯化钠 5.0g • 琼脂 18.0g~20.0g • 蒸馏水 1000mL 0.4%溴麝香草酚蓝溶液16.0mL • Andrade 指示剂 20.0 mL • 甲液 20.0mL 乙液 20.0mL pH 7.5±0.2
• 2.乙液:氯化镁40g;蒸馏水100ml • 3.丙液:0.4%孔雀绿水溶液 • 4.制法 :上述成分配好后,121度高压灭菌15min,临用时
取甲液90ml;乙液9ml 丙液0.9ml
2021
MM增菌液各成分的作用
• 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求; • 氯化钠可维持均衡的渗透压; • 磷酸二氢钾是缓冲剂; • 氯化镁可以增加培养基的渗透压; • 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长, • 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择
4.亚硫酸铋(BS)琼脂
• 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g • 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g • 煌 绿 0.025g 或5.0g/L 水溶液5.0mL • 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g • 琼 脂 18.0g~20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2
2021
• ②甲液的配制 • 硫代硫酸钠34.0g 柠檬酸铁铵4.0g 蒸馏水100mL
2021
BS培养基的原理
• 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源; • 2.葡萄糖提供能源 • 3.亚硫酸铋抑制剂,抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群,但不
影响沙门氏菌的生长; • 4.磷酸氢二钠 缓冲剂 • 5.硫酸亚铁用于产生硫化氢,并与铁反应生成黑色沉淀,
使阳性培养物在平板上具有金属光泽的棕色或黑色菌落 • 6.琼脂是凝固剂
2021
1.四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每
加入一种成分,均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
2021
性。
2021
3.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液 • 成分
• 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g • 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL • pH 7.0±0.2
• 制法
• 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮 沸溶解,冷至55℃以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1g/L L-胱氨酸溶液10 mL(称取0.1 g L-胱氨酸,加1mol/L 氢 氧化钠溶液15mL,
2021
• 3.原理:四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来, 它对大肠菌群有抑制作用,对沙门氏菌无影响。因沙门氏 菌具有四硫磺酸酶,能分解四硫磺酸钠,而大肠菌群没有 这种酶,故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂,可使沙门氏菌 不致因酸碱度改变而死亡。
2021
2.氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
• 甲液:胰蛋白胨5g; 磷酸二氢钾1.6g ;氯化钠8g蒸馏水 1000ml;
制法
• 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水(制作基础液), • 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中,柠檬
酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中, • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷
至80 ℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液 中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混 匀。调节pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50 ℃~55 ℃。 加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。
2021
TTB培养基使用方法和注意事项
•
• 1.使用方法:称取本品93.55g,溶解于1050ml蒸馏水中, 加热溶解,临用前加入20%碘液20ml,0.5g煌绿2ml。
• 2.注意事项:TTB培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。
一、实验目的
• 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 • 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理
2021
二、实验器材
• 1.菌种:沙门氏菌、大肠杆菌 • 2.检样:鲜鸡蛋 • 3.培养基:四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液;氯化镁孔雀
绿增菌液(MM);亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸 铋(BS)琼脂;HE 琼脂;SS琼脂;三塘铁琼脂(TSI) • 4.设备:冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌Байду номын сангаас形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛 细管
• 使溶解,再加无菌蒸馏水至100mL 即成,如为DL-胱氨酸 ,用量应加倍)。摇匀,调202节1 pH。
SC增菌液各成分的作用 蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求, 乳糖是可发酵的糖类; 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数 革兰氏阴性菌的生长, 磷酸盐是缓冲剂, L-胱氨酸为还原剂。
2021
基础液
• 蛋白胨 10.0 g
蒸馏水 1 000 mL
• pH 7.0±0.2
牛肉膏 5.0 g
• 氯化钠 3.0 g
• 碳酸钙 45.0 g(碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程 中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选 产酸菌的作用)
• 除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入 碳酸钙,调节pH,高压灭菌121 ℃,20 min
2021
硫代硫酸钠溶液 • 硫代硫酸钠(含5 个结晶水) 50.0 g • 蒸馏水 加至100 mL • 高压灭菌121 ℃,20 min。(硫代硫酸钠作为中和剂
,可以灭菌121,15min,没有影响的,检验含有次氯酸 钠的消毒水微生物,需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液;培 养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸,能抑制大部分 大肠埃希氏菌的生长,而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长, 因为沙门氏菌具有四硫磺酶,能分解四硫磺酶。)
2021
5.HE 琼脂
• 基础成分: • 蛋白胨 12.0g 牛肉膏 3.0g 乳糖 12.0g 蔗糖 12.0g • 水杨素 2 .0g 胆盐 20.0g 氯化钠 5.0g • 琼脂 18.0g~20.0g • 蒸馏水 1000mL 0.4%溴麝香草酚蓝溶液16.0mL • Andrade 指示剂 20.0 mL • 甲液 20.0mL 乙液 20.0mL pH 7.5±0.2
• 2.乙液:氯化镁40g;蒸馏水100ml • 3.丙液:0.4%孔雀绿水溶液 • 4.制法 :上述成分配好后,121度高压灭菌15min,临用时
取甲液90ml;乙液9ml 丙液0.9ml
2021
MM增菌液各成分的作用
• 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求; • 氯化钠可维持均衡的渗透压; • 磷酸二氢钾是缓冲剂; • 氯化镁可以增加培养基的渗透压; • 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长, • 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择
4.亚硫酸铋(BS)琼脂
• 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g • 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g • 煌 绿 0.025g 或5.0g/L 水溶液5.0mL • 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g • 琼 脂 18.0g~20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2
2021
• ②甲液的配制 • 硫代硫酸钠34.0g 柠檬酸铁铵4.0g 蒸馏水100mL
2021
BS培养基的原理
• 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源; • 2.葡萄糖提供能源 • 3.亚硫酸铋抑制剂,抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群,但不
影响沙门氏菌的生长; • 4.磷酸氢二钠 缓冲剂 • 5.硫酸亚铁用于产生硫化氢,并与铁反应生成黑色沉淀,
使阳性培养物在平板上具有金属光泽的棕色或黑色菌落 • 6.琼脂是凝固剂
2021
1.四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每
加入一种成分,均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
2021
性。
2021
3.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液 • 成分
• 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g • 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL • pH 7.0±0.2
• 制法
• 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮 沸溶解,冷至55℃以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1g/L L-胱氨酸溶液10 mL(称取0.1 g L-胱氨酸,加1mol/L 氢 氧化钠溶液15mL,
2021
• 3.原理:四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来, 它对大肠菌群有抑制作用,对沙门氏菌无影响。因沙门氏 菌具有四硫磺酸酶,能分解四硫磺酸钠,而大肠菌群没有 这种酶,故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂,可使沙门氏菌 不致因酸碱度改变而死亡。
2021
2.氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
• 甲液:胰蛋白胨5g; 磷酸二氢钾1.6g ;氯化钠8g蒸馏水 1000ml;