小鼠早期胚胎移植技术的研究
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微管 ， 过细容易刺伤子宫 内膜Biblioteka Baidu穿透子宫角， 过
管缓慢地推进， 当微管插人大约 １ 毫米时， ５ 旋 转微量推进器，将微管内的 ５ ０ －１ 个胚胎注入 子宫角 （ ３ａ 图 ）
结
果
粗则损伤子宫颈口。（）当微管穿过子宫颈口 ２ 后， 受刺激的子宫颈口会肿胀， 并使子宫收缩产 生排液现象。此时移植的胚胎有可能被排出体 外而造成移植失败， 在麻醉持续的时间内， 胚胎 在子宫内可沉积下来，冲卵液将被子宫逐渐吸 收； ３ 移植结束拔出微管时， （） 微管中需保留一
表 １ 小鼠胚 胎外科、 非外科手 术移植 结果
翻９ ｝１ ５ ｝ ２ ２２． ３圈 ４９ １３ ０
讨 论
１ＬｔＥ ９５ ． １ ３年用外科手术方法首先取得 ｉｅ３ ｔ １ ｌ 小鼠胚胎移植成功， 以后Ｆｋ。 ｉｅ１４） ｅ ｔ和Ｌｔ ９２ ｅ ｔ（ ｌ ，
Ｍｃ ｒ 和 Ｍｉ ｉ ＇ 等 １ ５ ｌｅ ａｎ ｃ ｅ２ ｈ ＂ｌ ９ ６年和 １５ ９９年相继
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ４－ ４ １８ Ｅ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ２５ ： ２ ３ ０ Ｂｊ ｎ ９
小鼠 早期胚胎移植技术的 研究
王 生 杨 琴 荣 章 培 秀 瑞
（ 中国科 学院遗传研 究所，北京）
哺乳动物胚胎移植技术是实验胚胎学、遗 传学、 发育生物学研究中的一项重要技术。 在 卵母细胞的体外培养、卵的体外受精及对早期
３７ ３ ３ ３ ８ ： － ９ ． ９ ４ ３
考
文
献
［ ］ Ｍｃ ｒｎ Ａ ａｄ Ｍｉ ｉ １５ ． Ｅ ｐ Ｂｏ． １ ｌ ｅ， ｎ Ｄ ａ ． ． ｃ ｅ ９６ Ｊ ｘ ． ｌ ｈ ： ． ｉ ， ［］ — ２
２７ ６．
（ 桑堪胚或胚泡）经非外科手术移人 ２ 只昆白 ３ 品系雌鼠子宫内， ２ １ 只受体产幼鼠 ３ 只， ６ 受体 产仔率为 ５多， ２ 胚胎成活率为 ２ 外。以上幼鼠 ５
均 为有色的杂种鼠。
：． ９ ｉｉ． ３ ： １５． ｄ， ４． ９ ｈ ６ ０
［ ］ Ｔ ｒ ｗｋ， Ｋ： ． ａ ｒ ｌ ｉ ， ５一 ３ ａｋ ｓ Ａ ． ９９Ａ ｔＴ ｅ ｏ ｙ ａ２ ２ ｏ ｉ ． １５ ｃ ｈ ｉ ｏ ｃ ： １
［ ］ Ｂ ａｙ Ｒ Ａ ： １ Ｎ ｔｒ， ８ ９５ ４ ｅｔ ， ． １５． ｒ－ １ ： ． ｔ ． ９ ａｅ ６ ９ ［ ］ Ｍａｓ， ａｄ ． ａ ｓｎ１７． ｅｒｄ Ｆｒ ， ５ ｒ Ｌ ｎ Ｋ Ｓ Ｌ ｒ ｏ ：９４ Ｊ Ｒ ｐｏ ． ｔ ｋ ． ． ｓ ． ｅ．
向阴道底部细心地寻找到子宫颈 口，然后将微
２ Ｂａ ， ． 甲４ ｅ 最先采用非外科手术方法， ｔ 将”
个桑棋胚或胚泡移入３只受体， ０ 获得 ５只幼鼠， 胚胎成活率为１多。 以后 Ｍａｋ和 Ｌｒｏ［ ０ ｒ ｓ ａｓ ５ ｓｎ１ 采用机械控制的方法，将 ５ １ Ａ Ｊ 品系小 ２ 个 ／３ 二 鼠的胚泡移人 ７ 只 Ｃ Ａ 品系雌鼠中， ９ Ｂ 在移植 的第 １ 天剖检， ４ 收集到活胚胎 ２２ ６ 个，受胎率 为 ， ０。 我们在采用上述方法移植操作中认 ０ ％ ｏ 为须注意以下几点：（）必须选择直径适宜的 １
集桑堪胚和胚泡。将收集到表面皿内的胚胎放 在解剖镜下检查，选择形态正常的胚胎给受体 移植， 由受体产仔情况衡量移植效果。 选择的受体是假孕 ２ 天的雌鼠。移植前腹 胚胎进行显微手术等研究中，往往是通过观察 多 ． ． 毫升， 分钟 ２ ２ ５ 卵在体外培养中的卵裂情况来鉴定实验 效果。 腔注射 １ 戊巴比妥钠 ０ －０ ５ 但是更理想的方法就是将有发育能力的胚胎移 之后受体便处于完全昏迷状态，麻醉可持续 １ 入受体子宫或输卵管内，以观察胚胎能否继续 小 时以上。 发育直至胎儿出生。 为此， 我们对小鼠早期胚 胎进行了外科、 非外科手术移植的研究。
图 ２ 小鼠胚胎外科手 术移植示意图 １外 径 ２ 米医用聚乙烯管 ； ２微 管： ３ 子宫角； ． 毫 ． 。 ４斜视 勾； ５微管放大示意 图。 ． ．
我们采用 Ｍａｋ和 Ｌｒｏ［ ｒ ｓ ａｓ ｓ ｓｎ」研制的移植 器移植。移植器中的注射器及聚乙烯管内充满 液体石蜡，聚乙烯管的前端连接吸胚胎用的聚 乙烯微管。 微管外径 ０ 毫米，管内由 ２ ． ９ 个小 气泡将液体分为三部分，前端液体防止胚胎丢 失， 末端液体保证胚胎进入子宫。 手术移植时 为了使微管容易穿透子宫壁，微管顶部需成斜 面 （ ２。 图 ）非手术移植时为了不损伤子宫颈口、
进行了这方面的试验。在这一时期， ａｓ Ｇｔ［取 ｅ１ ３
得较好的结果： １０ ６ 个胚泡被移入 ４ 只受体 ０ 中， 受体受胎率为 ５ 多， ０ 胚胎成活率为 ３． 多。 ８５ ７ 在上述的研究中，由于移植胚胎一直采用手或 注射器进行操作， 因此失误机会较多。 我们采
用移植器移植就较为可靠 ， 不致丢失胚胎。
材料 和方法 移植的胚胎是用黑色Ｃ ７Ｂ ， ５／Ｌ 棕色Ｌ １， ６５
野灰色 Ｃ Ｅ及 Ｃ ７Ｂ ／ Ｃ ＨＢ ５／ＬＬ Ｒ雄鼠分别与昆 白品系雌鼠杂交所得的杂种胚胎。外科手术移 植 ９ 个胚胎， １ 非外科手术移植 １４ ４ 个胚胎。受 体均为昆白品系的处女 鼠， 外科 手术受 体 １ ５ 只， 非外科手术受体 ２ 只。 ３ 在供体母鼠接受交配后的第 ３ 天，用 ２ 毫 升 Ｔ Ｍ－９ Ｃ １９液分别冲洗两侧子宫角（ １， 图 ）采
图 ３ 小 鼠胚胎 非外科手术移植示 意图 １外径 ２ ． 毫米医用聚乙烯管 ； ２微 管； ３开膛器； ， ４子宫颈 口； ，子宫角 ； ６微 管放大示意图。 ． ． ．
微管顶部需成平面 （ ３０ 图 ） 外科手术移植时，在鼠后腹部作一个 １ 厘 米的切口， 用斜视勾牵引出两侧子宫角， ４ 用 号 针头在子宫角壁上刺一小孔，将微管经小孔插 人， 然后旋转微量推进器， ５ ０ 把 一１ 个胚胎分别 注入两侧子宫角 （ ） 图２， 非外科手术移植时，用镊子夹住阴蒂的前 部将鼠提起， 用直径４毫米长 １ 毫米的医用聚 ０ 乙烯管做开朦器。 将吸有胚胎的微管插人阴道，
部分液体 ， 避免多量气体进入子宫。 参
３ ： － ４ ６ ３ ３ ９４ １．
如表 １ 所示， １ ９ 个杂种胚胎 （ 桑堪胚或胚 抱）经外科手术移人 １ 只昆白品系雌 鼠子宫 ５ 内，１ 只受体 产幼 鼠 ５ 只，受体 产仔 率为 １ ４
７ 多，胚胎成活率为 ５ ．多。 １４个杂种胚胎 ３ ９３ ４
图 １ 子宫冲胚 胎示意图
ｌ吸有冲卵 ． 液注射器； ２卵奥； ３子宫角： ． ．
４冲 卵管： 弓表面皿。 ． ．
。 ４ ２
Ｗａ ｇ ｉ ｅｇ ａ． Ｉｖｓｇｔ ｎ Ｔ ｃｎｑ ｅ ｎ Ｐ ｓ ｎ ｅ ｌ ｎ ｅ ｉａｏ ｏ ｅｈ ｉ ｏ ｅｈ ｔ ： ｔ ｉ ｎ ｕ ｆ Ｅ ｒｏ ｒｎｆｒ Ｅ ｒ Ｓａｅ Ｍｏｓ ｍｂｙ Ｔ ａｓ ｉ ａｉ ｔｇ ｉ ｅ ｎ ｙ ｎ ｕｅ
管缓慢地推进， 当微管插人大约 １ 毫米时， ５ 旋 转微量推进器，将微管内的 ５ ０ －１ 个胚胎注入 子宫角 （ ３ａ 图 ）
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表 １ 小鼠胚 胎外科、 非外科手 术移植 结果
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小鼠 早期胚胎移植技术的 研究
王 生 杨 琴 荣 章 培 秀 瑞
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哺乳动物胚胎移植技术是实验胚胎学、遗 传学、 发育生物学研究中的一项重要技术。 在 卵母细胞的体外培养、卵的体外受精及对早期
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文
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（ 桑堪胚或胚泡）经非外科手术移人 ２ 只昆白 ３ 品系雌鼠子宫内， ２ １ 只受体产幼鼠 ３ 只， ６ 受体 产仔率为 ５多， ２ 胚胎成活率为 ２ 外。以上幼鼠 ５
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集桑堪胚和胚泡。将收集到表面皿内的胚胎放 在解剖镜下检查，选择形态正常的胚胎给受体 移植， 由受体产仔情况衡量移植效果。 选择的受体是假孕 ２ 天的雌鼠。移植前腹 胚胎进行显微手术等研究中，往往是通过观察 多 ． ． 毫升， 分钟 ２ ２ ５ 卵在体外培养中的卵裂情况来鉴定实验 效果。 腔注射 １ 戊巴比妥钠 ０ －０ ５ 但是更理想的方法就是将有发育能力的胚胎移 之后受体便处于完全昏迷状态，麻醉可持续 １ 入受体子宫或输卵管内，以观察胚胎能否继续 小 时以上。 发育直至胎儿出生。 为此， 我们对小鼠早期胚 胎进行了外科、 非外科手术移植的研究。
图 ２ 小鼠胚胎外科手 术移植示意图 １外 径 ２ 米医用聚乙烯管 ； ２微 管： ３ 子宫角； ． 毫 ． 。 ４斜视 勾； ５微管放大示意 图。 ． ．
我们采用 Ｍａｋ和 Ｌｒｏ［ ｒ ｓ ａｓ ｓ ｓｎ」研制的移植 器移植。移植器中的注射器及聚乙烯管内充满 液体石蜡，聚乙烯管的前端连接吸胚胎用的聚 乙烯微管。 微管外径 ０ 毫米，管内由 ２ ． ９ 个小 气泡将液体分为三部分，前端液体防止胚胎丢 失， 末端液体保证胚胎进入子宫。 手术移植时 为了使微管容易穿透子宫壁，微管顶部需成斜 面 （ ２。 图 ）非手术移植时为了不损伤子宫颈口、
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用移植器移植就较为可靠 ， 不致丢失胚胎。
材料 和方法 移植的胚胎是用黑色Ｃ ７Ｂ ， ５／Ｌ 棕色Ｌ １， ６５
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图 ３ 小 鼠胚胎 非外科手术移植示 意图 １外径 ２ ． 毫米医用聚乙烯管 ； ２微 管； ３开膛器； ， ４子宫颈 口； ，子宫角 ； ６微 管放大示意图。 ． ． ．
微管顶部需成平面 （ ３０ 图 ） 外科手术移植时，在鼠后腹部作一个 １ 厘 米的切口， 用斜视勾牵引出两侧子宫角， ４ 用 号 针头在子宫角壁上刺一小孔，将微管经小孔插 人， 然后旋转微量推进器， ５ ０ 把 一１ 个胚胎分别 注入两侧子宫角 （ ） 图２， 非外科手术移植时，用镊子夹住阴蒂的前 部将鼠提起， 用直径４毫米长 １ 毫米的医用聚 ０ 乙烯管做开朦器。 将吸有胚胎的微管插人阴道，
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３ ： － ４ ６ ３ ３ ９４ １．
如表 １ 所示， １ ９ 个杂种胚胎 （ 桑堪胚或胚 抱）经外科手术移人 １ 只昆白品系雌 鼠子宫 ５ 内，１ 只受体 产幼 鼠 ５ 只，受体 产仔 率为 １ ４
７ 多，胚胎成活率为 ５ ．多。 １４个杂种胚胎 ３ ９３ ４
图 １ 子宫冲胚 胎示意图
ｌ吸有冲卵 ． 液注射器； ２卵奥； ３子宫角： ． ．
４冲 卵管： 弓表面皿。 ． ．
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