毕赤酵母菌
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酵母菌
——毕赤酵母
（Pichia.pastoris）
by：文慧霖、裴颖
· 毕赤酵母的介绍 · 毕赤酵母的形态特征 · 毕赤酵母的生产过程 · 毕赤酵母的优缺点 · 毕赤酵母的开发利用
毕赤酵母菌
——全称巴斯德毕赤酵母，是甲醇营养 型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一 碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样， 在无性生长期主要以单倍体形式存在， 当环境营养限制时，常诱导2个生理类 型不同的接合型单倍体 细胞交配，融 合成双倍体。
毕赤酵母结构图
毕赤酵母显微图
优缺点
Pichia.pastoris酵母菌体内无 天然质粒，所以表达载体需与宿 主染色体发生同源重组，将外源 基因表达框架整合于染色体中以 实现外源基因的表达。包括启动 子、外源基因克隆位点、终止序 列、筛选标记等。表达载体都是 穿梭质粒，先在大肠杆菌复制扩 增，然后被导入宿主酵母细胞。 为使产物分泌胞外，表达载体还 需带有信号肽序列。
生产过程
（1）细胞增殖繁衍；
（2）分批流加的过渡阶段（甘油或葡萄糖）； （3）诱导表达阶段（甲醇）；
各阶段碳源都为限制 性基质,其补加速率的 动力学模型是高效表 达的基础。
甲型优点
(1)具有醇氧化酶AOX1基因启动子，这是目前最强，调
控机理最严格的启动子之一；
(2)表达效率高,其表达的外源蛋白可占总表达蛋白的 90%以上,有利于目的蛋白的分离纯化； (3)在简单合成培养基中可实现高密度培养； (4)表达质粒能在基因组的特定位点以单拷贝或多拷贝 的形式稳定整合； (5)由于该酵母可以以甲醇为唯一碳源和能源,而绝大多 数微生物并不能以甲醇为碳源,可以减少污染。Fra bibliotek甲型不足
(1)发酵周期长；
(2)甲醇易燃易爆有毒，存在一 定的危险性； (3)筛选高产菌株需用的药物价 格比较昂贵； (4)培养基和培养条件不成熟。
开发利用
Koichi Ogata等人于1969年首次发现了某些酵母可以利用甲 醇为唯一碳源和能源生长，此后，用甲醇利用型酵母生产单细胞 蛋白作为动物饲料的潜力就引起了广泛关注。1987年，Cregg等 人首次报道了用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原，随后 Philip Petroleum公司与Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates(SIBIA)就开始了毕赤酵 母表达系统的合作开发。SIBIA.的研究人员分离了AOX基因的启 动子和宿主菌株，构建了载体，并开发出了相应的毕赤酵母基因 操作技术，结合Philip Petroleum公司生产单细胞蛋白的发酵工 艺，实现了外源蛋白的高效表达。1993年，Philip Petroleum公 司将毕赤酵母表达系统的专利卖给Research Corporation Technologies公司，并委托Invitrogea公司进行有关产品销售。
——毕赤酵母
（Pichia.pastoris）
by：文慧霖、裴颖
· 毕赤酵母的介绍 · 毕赤酵母的形态特征 · 毕赤酵母的生产过程 · 毕赤酵母的优缺点 · 毕赤酵母的开发利用
毕赤酵母菌
——全称巴斯德毕赤酵母，是甲醇营养 型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一 碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样， 在无性生长期主要以单倍体形式存在， 当环境营养限制时，常诱导2个生理类 型不同的接合型单倍体 细胞交配，融 合成双倍体。
毕赤酵母结构图
毕赤酵母显微图
优缺点
Pichia.pastoris酵母菌体内无 天然质粒，所以表达载体需与宿 主染色体发生同源重组，将外源 基因表达框架整合于染色体中以 实现外源基因的表达。包括启动 子、外源基因克隆位点、终止序 列、筛选标记等。表达载体都是 穿梭质粒，先在大肠杆菌复制扩 增，然后被导入宿主酵母细胞。 为使产物分泌胞外，表达载体还 需带有信号肽序列。
生产过程
（1）细胞增殖繁衍；
（2）分批流加的过渡阶段（甘油或葡萄糖）； （3）诱导表达阶段（甲醇）；
各阶段碳源都为限制 性基质,其补加速率的 动力学模型是高效表 达的基础。
甲型优点
(1)具有醇氧化酶AOX1基因启动子，这是目前最强，调
控机理最严格的启动子之一；
(2)表达效率高,其表达的外源蛋白可占总表达蛋白的 90%以上,有利于目的蛋白的分离纯化； (3)在简单合成培养基中可实现高密度培养； (4)表达质粒能在基因组的特定位点以单拷贝或多拷贝 的形式稳定整合； (5)由于该酵母可以以甲醇为唯一碳源和能源,而绝大多 数微生物并不能以甲醇为碳源,可以减少污染。Fra bibliotek甲型不足
(1)发酵周期长；
(2)甲醇易燃易爆有毒，存在一 定的危险性； (3)筛选高产菌株需用的药物价 格比较昂贵； (4)培养基和培养条件不成熟。
开发利用
Koichi Ogata等人于1969年首次发现了某些酵母可以利用甲 醇为唯一碳源和能源生长，此后，用甲醇利用型酵母生产单细胞 蛋白作为动物饲料的潜力就引起了广泛关注。1987年，Cregg等 人首次报道了用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原，随后 Philip Petroleum公司与Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates(SIBIA)就开始了毕赤酵 母表达系统的合作开发。SIBIA.的研究人员分离了AOX基因的启 动子和宿主菌株，构建了载体，并开发出了相应的毕赤酵母基因 操作技术，结合Philip Petroleum公司生产单细胞蛋白的发酵工 艺，实现了外源蛋白的高效表达。1993年，Philip Petroleum公 司将毕赤酵母表达系统的专利卖给Research Corporation Technologies公司，并委托Invitrogea公司进行有关产品销售。