培养基配制和灭菌方法验证
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菌株代数
培养基
培养温度
培养时间（小时）
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉菌
4.2.验证容
4.2.1.执行标准
a.配制容器及配套器具的清洗严格按照《玻璃器皿清洗操作规程》执行。
b.培养基的配制严格按照《培养基管理规程》执行。
c.自动台式灭菌器严格按照《TMQ.R-3870型台式灭菌器使用维护保养操作规程》执行.
15分钟
灭菌效果（F0值）
≥12
灭菌后pH值
6.9-7.3
灭菌后外观性状
符合规定
适用性检查
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
有效期验证保存三周
外观性状
符合规定
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
连续验证3次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。
3.验证依据
3.1.SN/T1538.1-2005培养基制定指南
根据培养基的特性，按制定的方法进行配制和灭菌，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基的配制和灭菌，若不符合，重新制定方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
2.验证项目及认可标准
验证容
验证项目
验证标准
配制
灭菌前的pH
7.2-7.4
灭菌
灭菌温度
121℃
灭菌时间
c.分装 将已调节好PH值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至25×250ml试管中，分装的管数为190～200管围，用牛皮纸按40管/捆的方式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终pH值测定。
d.灭菌器中的培养基的数量及装载方式（满载）
将分装好的5捆（40管/捆）培养基试管置于灭菌器中，按下图A、B、C、D、E 5点放置。
3.2.《药品生产验证指南》（2003版）（国家食品药品监督管理局）
3.3.《药品生产质量管理指南》（2010版）
3.4.《中华人民国药典》（2010年版二部）
3.5.《中国药品检验标准操作规程》（2010年版）
4.验证方法与容
4.1.实验准备
4.1.1.器具：电磁炉（最大功率2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25×250ml试管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。
A B C
灭菌器柜门
D E
指示菌的放置：将指示剂嗜热脂肪芽孢菌（菌浓度：1.69×106cfu/支）5支各放入5捆培养基中间的其中一支试管，同时将已编号的5支校正好的留点温度计插入6支待灭菌培养基试管，开始灭菌。
将已装载好的硫乙醇酸盐流体培养基在121℃条件下灭菌15分钟。灭菌结束后记录各留点温度计点温度。同时取出5支已灭菌嗜热脂肪芽孢菌，直接置56～60℃培养24～48小时，另取一支未经灭菌的嗜热脂肪芽孢菌指示剂一起培养，作为阳性对照。
5、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证附属记录
6、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告
7、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证合格证书
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证计划
根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法进行验证，具体安排如下：
一、年月日—年月日，制定验证方案，由硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长负责起草。
二、年月日—年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。
三、年月日—年月日，验证工作实施。
四、年月日—年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。
五、
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证小组
组 长：
成 员：
1、目的
通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的制备，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌人员提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。
根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管应由紫色变为黄色为该指示剂有效。
e.灭菌后的pH值的测定 取20ml管已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基，放冷至25℃测定pH值，应在6.9-7.3围。
f.外观性状
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案
文件编码：
项 目
姓 名
签 名
日 期
起 草
审 核
审 核
批 准
生效日期
年 份
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证方案目录
1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划
2、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组
3、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案
4、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证培训记录
d.取同一批硫乙醇酸盐流体干粉培养基配制三批进行以下验证。
4.2.2.配制灭菌过程
a.称量 取硫乙醇酸盐流体干粉培养基29.25克,加纯化水1000ml,加热煮沸使其完全溶解。每次按照此处方量配制8547ml。
b.灭菌前的pH值测定 取已配制好的硫乙醇酸盐流体培养基100ml，放冷至25℃调节PH值至7.2-7.4围。以此比例来调节剩下的培养基的pH值。
名称
生产厂家
型号
校验情况
生化培养箱
电热恒温培养箱
自动台式灭菌器
电子天平
数字酸度计
生物安全柜
超净工作台
4.1.2.设备
4.1.3.培养基及试剂
名称
生产厂家
批号
纯化水
硫乙醇酸盐流体培养基
营养肉汤培养基
营养琼脂培养基
氢氧化钠
稀盐酸
嗜热脂肪芽胞菌（F0﹥12）
4.1.4Байду номын сангаас验证用菌株 来源于省药品检验所
验证菌株
2、适用围
本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。
3、容
1.概述
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、PH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。
培养基
培养温度
培养时间（小时）
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉菌
4.2.验证容
4.2.1.执行标准
a.配制容器及配套器具的清洗严格按照《玻璃器皿清洗操作规程》执行。
b.培养基的配制严格按照《培养基管理规程》执行。
c.自动台式灭菌器严格按照《TMQ.R-3870型台式灭菌器使用维护保养操作规程》执行.
15分钟
灭菌效果（F0值）
≥12
灭菌后pH值
6.9-7.3
灭菌后外观性状
符合规定
适用性检查
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
有效期验证保存三周
外观性状
符合规定
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
连续验证3次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。
3.验证依据
3.1.SN/T1538.1-2005培养基制定指南
根据培养基的特性，按制定的方法进行配制和灭菌，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基的配制和灭菌，若不符合，重新制定方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
2.验证项目及认可标准
验证容
验证项目
验证标准
配制
灭菌前的pH
7.2-7.4
灭菌
灭菌温度
121℃
灭菌时间
c.分装 将已调节好PH值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至25×250ml试管中，分装的管数为190～200管围，用牛皮纸按40管/捆的方式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终pH值测定。
d.灭菌器中的培养基的数量及装载方式（满载）
将分装好的5捆（40管/捆）培养基试管置于灭菌器中，按下图A、B、C、D、E 5点放置。
3.2.《药品生产验证指南》（2003版）（国家食品药品监督管理局）
3.3.《药品生产质量管理指南》（2010版）
3.4.《中华人民国药典》（2010年版二部）
3.5.《中国药品检验标准操作规程》（2010年版）
4.验证方法与容
4.1.实验准备
4.1.1.器具：电磁炉（最大功率2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25×250ml试管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。
A B C
灭菌器柜门
D E
指示菌的放置：将指示剂嗜热脂肪芽孢菌（菌浓度：1.69×106cfu/支）5支各放入5捆培养基中间的其中一支试管，同时将已编号的5支校正好的留点温度计插入6支待灭菌培养基试管，开始灭菌。
将已装载好的硫乙醇酸盐流体培养基在121℃条件下灭菌15分钟。灭菌结束后记录各留点温度计点温度。同时取出5支已灭菌嗜热脂肪芽孢菌，直接置56～60℃培养24～48小时，另取一支未经灭菌的嗜热脂肪芽孢菌指示剂一起培养，作为阳性对照。
5、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证附属记录
6、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告
7、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证合格证书
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证计划
根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法进行验证，具体安排如下：
一、年月日—年月日，制定验证方案，由硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长负责起草。
二、年月日—年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。
三、年月日—年月日，验证工作实施。
四、年月日—年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。
五、
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证小组
组 长：
成 员：
1、目的
通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的制备，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌人员提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。
根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管应由紫色变为黄色为该指示剂有效。
e.灭菌后的pH值的测定 取20ml管已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基，放冷至25℃测定pH值，应在6.9-7.3围。
f.外观性状
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案
文件编码：
项 目
姓 名
签 名
日 期
起 草
审 核
审 核
批 准
生效日期
年 份
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证方案目录
1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划
2、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组
3、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案
4、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证培训记录
d.取同一批硫乙醇酸盐流体干粉培养基配制三批进行以下验证。
4.2.2.配制灭菌过程
a.称量 取硫乙醇酸盐流体干粉培养基29.25克,加纯化水1000ml,加热煮沸使其完全溶解。每次按照此处方量配制8547ml。
b.灭菌前的pH值测定 取已配制好的硫乙醇酸盐流体培养基100ml，放冷至25℃调节PH值至7.2-7.4围。以此比例来调节剩下的培养基的pH值。
名称
生产厂家
型号
校验情况
生化培养箱
电热恒温培养箱
自动台式灭菌器
电子天平
数字酸度计
生物安全柜
超净工作台
4.1.2.设备
4.1.3.培养基及试剂
名称
生产厂家
批号
纯化水
硫乙醇酸盐流体培养基
营养肉汤培养基
营养琼脂培养基
氢氧化钠
稀盐酸
嗜热脂肪芽胞菌（F0﹥12）
4.1.4Байду номын сангаас验证用菌株 来源于省药品检验所
验证菌株
2、适用围
本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。
3、容
1.概述
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、PH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。