分子生物学研究法

第五章分子生物学研究法（上）------DNA、RNA及蛋白质操作技术

1、哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的生产和发展？

三大成就：a、在20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；b、50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和世代交替问题；c、50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，成功的破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。

2、如何理解PCR扩增的原理和过程？

PCR (Polymerase Chain Reaction) 是体外高效复制DNA的技术，该技术几乎贯穿于现在分子生物学的各个领域。PCR体系由模板，特异性引物，高温聚合酶，脱氧核糖核酸几部分组成。反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing），引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退火和延伸可以合二为一。

3、简述定量PCR的原理和过程。

原理：1;在含有插入性染料或特异性探针的体系中扩增目标序列.

2 光学系统激发并检测报告荧光

3 报告荧光的强度与所扩增DNA的量呈比例关系

反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing），引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退火和延伸可以合二为一。

4、基因组DNA文库和cDNA文库在构建原理和用途上的主要区别是什么？

基因组DNA文库含有一种生物的全部基因，从基因组文库中获得的基因是完整的，cDNA文库含有一种生物的部分基因，cDNA本质就是外显子，基因组文库大，其中基因含有启动子和内含子，cDNA文库小，没有内含子和启动子

5、基因克隆的方法主要有哪几种？简述各种方法的原理和用途。

6、在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法？

电泳，核酸通过琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质通过SDS-PAGE

7、蛋白质组学的研究对象和目的是什么？主要有哪些技术和方法？

8、SNP作为第三代遗传标记的优点是什么？

9、基因分型的方法有哪些？简述其原理。

10、已知一个cDNA3'端的部分序列，请设计实验流程得到该基因的全长cDNA。