细胞生物学实验内容
细胞生物学实验
二、实验原理
植物原生质体是除去细胞壁后为原生质所包围的“裸露细胞”，是开展基础研究的理想材料。其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分，除去细胞壁而使原生质体释放出来。
原生质体分离纯化或融合后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团，长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体培养中最基础也是最关键的环节。
选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。
将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。
将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。
二、实验原理
凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。
01
凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。
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三、实验仪器
显微镜、粗天平、载玻片、滴 管、 离心管、离心机等.
用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
洋葱、小麦种子或黄豆幼根根尖
人口腔上皮细胞
五、实验内容与实施过程
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10-l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察
医学细胞生物学实验
细胞凋亡诱导与检测
细胞凋亡检测
细胞凋亡诱导
自噬诱导
通过饥饿、药物刺激等手段诱导细胞自噬，以研究自噬的生物学意义和作用机制。
自噬检测
采用荧光染色、电镜观察、蛋白质印迹等方法检测自噬体的形成、数量和相关蛋白的表达。
自噬诱导与检测
03
02
01
实验原理
实验设计
根据实验目的和原理，设计具体的实验方案和操作流程。
实验操作
按照实验方案进行实验操作，包括细胞培养、显微观察、分子生物学检测等步骤。
数据收集与分析
收集实验数据，进行统计分析，得出实验结果。
结果汇报与讨论
将实验结果以书面形式汇报，并进行讨论和总结。
实验步骤
02
细胞培养
CHAPTER
利用免疫荧光染色、荧光共振能量转移等技术，可以检测和定位细胞内特定信号分子的分布和动态变化，进而揭示其在信号转导中的作用机制。
详细描述
总结词
信号转导抑制剂的应用
总结词：信号转导抑制剂是一类能够干扰细胞信号转导过程的化合物，具有潜在的治疗作用。
07
细胞凋亡与自噬研究
CHAPTER
通过使用化学物质、射线、病毒等手段诱导细胞凋亡，以研究其发生机制和生物学意义。
电子显微镜
利用电子束代替可见光，观察细胞超微结构。
显微镜观察
通过显微镜或细胞计数板，统计细胞数量。
细胞计数
利用染色剂或荧光染料，检测细胞活性，如MTT法、染色排除法等。
细胞活力检测
细胞计数与活力检测
利用染色剂对细胞进行染色，以便观察细胞形态和结构。
染色技术
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。
要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。
叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。
刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。
为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。
（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。
2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。
2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时，要真实、实事求是。
讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告动物细胞融合【实验目的】⒈了解动物细胞融合的常用方法。
⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。
这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可介导病毒和宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验用品】⒈材料鸡血红细胞。
⒉试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
⒊器材正置显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片、滴管、注射器等。
【实验步骤】⒈鸡血红细胞的制备和保存用无菌注射器先吸入Alsevers溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5~1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3mlAlsevers溶液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内。
细胞生物学实验
实验一细胞膜的渗透性一、实验目的1、了解细胞膜对物质渗透的一般规律。
2、了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液时，细胞吸水膨胀而发生溶血。
当红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
三、实验操作1、从集市买适量活鸡血，取5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。
2、使用前取用Alsever’s液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128mol/L NaCl溶液，小心混匀，1000r/min 离心5min，如此3次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。
3、取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于室温中，观察各支试管中发生溶血的时间及变化。
四、观察结果1、试管内液体分两层：上层浅黄色，下层红色不透明为不溶血（―）,镜检红细胞完好呈双凹盘状。
2、如果试管内液体浑浊，上层带红色者，称不完全溶血（+或++），镜检部分红细胞呈碎片。
3、如果试管内液体变红色而透明者，称完全溶血（+++），镜检发现细胞全部呈碎片。
五、实验建议1、鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。
2、目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液。
、3、试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。
实验报告及作业※目测判断标准：快速溶血：+++；慢速溶血：++或+；不溶血：―实验二核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察一、实验目的1、了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。
2、了解细胞中DNA和RNA的分布。
二、实验原理细胞内的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要存在于细胞质中。
甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
细胞生物学实验报告
细胞⽣物学实验报告[5]注意：这⼀步，动作要⾮常迅速，否则鸡⾎会凝固。
或者先把抗凝剂加⼊到烧杯中，再加⼊新鲜的鸡⾎，边加边震荡即可。
[6]为什么新鲜的鸡⾎会凝固？[7]为什么这⼀步要使⽤0.17 M 的 NaCl 溶液？实验六细胞膜的渗透性⼀、实验⽬的了解细胞膜[1]的渗透性及各类物质进⼊细胞的速度[2]⼆、实验原理1、在等渗溶液中，细胞对各种溶质的透过性不同。
有的溶质可以进⼊，有的溶质不能渗⼊。
2、渗⼊的溶质能提⾼细胞的渗透压，促进⽔分⼦进⼊细胞，引起溶⾎现象[3]。
3、不同的溶质渗⼊到细胞内的速度不同，因此溶⾎时间也不同。
三、实验材料新鲜⾎液（鸡⾎、猪⾎、⽜⾎等）四、实验器材试管（1.5 cm X 18 cm ）、试管架、10 ml 移液管、1 ml 移液管、200 ml 烧杯（2个）、250ml 容量瓶、移液枪、胶头滴管、菜⼑、吸球、电⼦天平、显微镜、盖玻⽚、载玻⽚、秒表五、实验药品及试剂 0.17 M NaCl 、 0.17 M NH 4Cl 、 0.17 M NH 4Ac 、 0.17 M NaNO 3、 0.12 M Na 2SO 4、 0.12 M 草酸铵、 0.32 M 葡萄糖、 0.32 M ⽢油、 0.32 M ⼄醇、 0.32 M 丙酮、肝素抗凝剂[4]六、实验步骤 1、制备⾎液稀释液（1）抗凝剂的制备：⾸先称取1克肝素钠粉末，然后加⼊0.17 MNaCl 溶液 10 ml （1∶10的⽐例），混合均匀，制成肝素抗凝剂。
（2）⾎液稀释液的制备：取新鲜⾎液，按⽐例（肝素抗凝剂:⾎液=1∶10）混合均匀，配制成经肝素抗凝的⾎液[5] [6]。
（3）按⽐例（经肝素抗凝的⾎液∶0. 17 M NaCl 溶液=1∶10）混合均匀，形成⼀种不透明的红⾊液体[7]。
2、低渗溶液（空⽩对照）的观察取试管⼀只，加⼊10 ml 蒸馏⽔，然后再加⼊1 ml 稀释的⾎液。
注意观察溶液颜⾊的变化。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验名称：细胞培养实验实验目的：1. 了解细胞培养的基本原理和过程2. 观察细胞生长和分化的现象3. 掌握细胞培养的实验技术和方法实验原理：细胞培养是一种将生物体细胞从其原始生存环境中分离出来，在体外条件下进行培养的技术。
这种技术对于研究细胞生物学、发育生物学、药物筛选等学科具有重要意义。
本实验将通过观察细胞生长和分化的现象，加深对细胞培养技术的理解。
实验材料：1. 人体皮肤细胞2. 培养基（包含血清、抗生素、氨基酸、维生素等）3. 塑料瓶（培养皿）4. 显微镜5. 记录表实验步骤：1. 取适量人体皮肤细胞，用胰蛋白酶消化，使其从组织中分离出来。
2. 将细胞接种到塑料瓶（培养皿）中，加入适当浓度的培养基。
3. 将塑料瓶（培养皿）放入恒温培养箱中，定期观察并记录细胞生长和分化的现象。
4. 在合适的时间点，使用显微镜拍照记录细胞生长和分化的过程。
5. 实验结束后，整理数据和图片，撰写实验报告。
实验结果：经过一段时间的培养，我们观察到皮肤细胞在培养基中开始贴壁，并逐渐生长。
随着时间的推移，部分细胞开始出现分裂，形成相互连接的细胞团。
一些细胞逐渐伸展成梭形或扁平形，呈现出典型的贴壁生长形态。
在某些区域，我们观察到细胞开始分化为两种不同形态的细胞群，一种呈圆形或椭圆形，另一种呈多角形。
这些现象表明细胞已经开始分化。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 细胞确实可以在体外条件下贴壁生长并增殖。
这证明了细胞培养技术的可行性。
2. 细胞分化是一个自然的过程，在本实验中得到了证实。
这说明细胞具有自我更新和多向分化的潜能。
3. 实验过程中需要注意无菌操作和适宜的培养条件，以确保细胞的存活和正常生长。
此外，不同种类的细胞可能需要不同的培养条件，因此在实际操作中需要针对具体细胞类型进行实验。
实验结论：通过本次实验，我们了解了细胞培养的基本原理和过程，观察了细胞生长和分化的现象，并掌握了细胞培养的实验技术和方法。
细胞生物学实验本科生实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
细胞生物学实验
细胞生物学实验
一、细胞培养
1、细胞复苏
将冻存有细胞的冻存管从－70ºC 冰箱中取出，迅速置于已预热37ºC的水浴箱中不断摇动使冻存液在1 min 内解冻。
在超净工作台内吸出细胞悬液并滴加在含6 ml DMEM 培养基的离心管中，放入离心机1 000 rpm 离心6 min, 弃上清液，向离心管中加入DMEM 培养基6 ml 吹打混匀制成细胞悬液种于培养瓶中, 放入37ºC 5%CO2培养箱中继续培养，24 h 内换液，以除去残存冻存液和未贴壁细胞。
2、细胞培养与传代
当细胞长满培养瓶底约85%～90%时弃去原培养液，用PBS 轻洗2～3 次，弃去PBS，加入适量胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察，若胞质回缩，细胞间不再连接成片时，吸弃胰蛋白酶液，加入DMEM 培养基终止消化，轻轻吹打直至细胞全部脱落悬浮，将细胞悬液吸出分装至2~3 个培养瓶中，再加入适量DMEM 培养基和胎牛血清，血清浓度为10%，放入培养箱中静置培养。
传代第2 天吸出原培养
液，加入新培养液。
细胞约2~3 天传代1 次。
3、细胞冻存
细胞冻存前一天更换培养基，观察细胞生长情况，使细胞处于指数生长期。
按照细胞传代的方法收集，去少量细胞悬液在倒置显微镜下进行细胞计数。
然后将细胞悬液吸入离心管，1000 rpm 离心6min，弃上清，吸取细胞冻存液，吹打混匀细胞，使细胞密度为1×107个/ml，将细胞悬液吸入冻存管中严密封口，冻存管做标记。
先将冻存管放入4ºC 冰箱30 min，接着置于-20ºC 冰箱1 h，再移入超低温冰箱中保存。
1-细胞生物学实验
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。 2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略） 3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液 2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管） 接下去的操作见下面的流程图。 健那绿染色：各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片 上混合，10分钟后加盖玻片，观察线粒体。 改良苯酚品红染色：取10μlD6涂片，滴10μl改良苯酚品 红染液，5分钟后加盖玻片，观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤 装有上清液的高速离心管→ 17000rpm 离心 20 分 钟 → 弃 上 清 ， 留 取 沉 淀 物 → 加 入 0．25mol／L蔗糖－0.003 mol／L氯化钙液1ml， 用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将 上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入 0.1ml 0． 25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙 溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液，分 别滴于载玻片上，各滴一滴 0.02 ％詹纳斯绿 B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察，颗粒状 的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm，分为 100 等份，每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且 左端对齐(0刻度重合)。
细胞生物学实验
1、根据安排配制洗液， 写出配制过程和遇到 的问题。
2、填表
器皿种类
新玻璃器皿 旧玻璃器皿 胶塞 塑料制品 微量离心管 加样器吸头
清洗步骤
注意事项
六、实验报告
实验五
人类淋巴细胞株培养（二）
Ⅱ、培养基的配制 一、实验目的
熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。 熟练掌握细胞传代培养的操作方法。 观察外培细胞在不同时期的形态变化及生长状况。
三、实验内容
RPMI 1640培养基的配制；细胞传代培养的接种、培养；使用 倒置显微镜观察培养细胞。
四、仪器、材料和试剂
（一）仪器 超净工作台、微孔过滤器（0.22um）、高压灭菌锅、蒸馏水器、 磁力搅拌器、天平、超低温冰箱、二氧化碳培养箱。 （二）用具、材料 细胞培养瓶、微量加样器、250ml和125ml试剂瓶、量筒、研钵、 离心管、pH试纸、培养细胞。 （三）试剂 HCl、 NaOH、 酚红、RPMI 1640干粉、小牛血清、青霉素、
三、实验内容
• 每一组同学准备三个细胞培养瓶、两个烧杯、一个微 孔滤器。 • 每二大组准备一瓶酒精棉球、两盒Tip、离心管、四 个试剂瓶等。 • 每两组配制一份洗液(120ml)。清洗二氧化碳培养箱。
四、仪器、材料和试剂
（一）仪器 超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器 （二）材料 紫外灯、微孔滤膜（直径25mm）：孔径为0.22um (三）试剂 70%或75%酒精、重铬酸钾、浓硫酸、蒸馏水、NaOH、HCl等
（六）消毒和灭菌
1）射线消毒灭菌
主要使用X、60Co进行消毒灭菌， 用于牛血清或塑料制品。 燥箱内，加热至160度，保 温90~120min。用于RNA提 取实验的用品则需要180度， 保温5~8h. （4）湿热灭菌 也称高压蒸汽灭菌，是最有 效的一种灭菌方法。主要应 用布类、橡胶、金属器械、 玻璃器皿、塑料以及加热后 不发生沉淀的无机溶液。 （5）滤过灭菌 用于培养用液和各种不能高 压灭菌的溶液。
医学细胞生物学实验大纲
医学细胞⽣物学实验⼤纲实验⼀显微镜的结构及使⽤⽅法⼀、实验⽬的1. 学习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使⽤⽅法。
2. 学习并掌握油镜的原理和使⽤⽅法。
⼆、光学显微镜的使⽤光学显微镜(microscope)，简称光镜，是⽣物医学研究及临床⼯作中常⽤的仪器，每个学⽣都必须熟悉它的结构和性能，掌握其使⽤⽅法。
1. 光学显微镜的主要构造显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分(见下图) 。
(1) 机械部分①镜座：亦称镜脚，是显微镜的基座，⽤以⽀持整个显微镜。
②镜柱：是镜座向上直⽴的短柱，⽤以⽀持其他部分。
③镜臂：是镜柱向上弯曲的部分，适于⼿握。
有些显微镜镜柱与镜臂之间有倾斜关节。
④镜筒：连在镜臂前⽅的镜筒部分，⼀般长度为16 cm 。
有直筒和斜筒两种，前者镜筒上下可调节，后者镜筒是固定的。
⑤调节器：是装在镜臂上的⼤⼩两种螺旋，转动时可使镜台升降或使镜筒上下移动以调节焦距。
粗调节器( 粗螺旋) 转动时可使镜台或镜筒在垂直⽅向以较快速度和较⼤距离进⾏上下升降，调节物镜与标本的距离。
通常在低倍镜下，先⽤粗调节器找到物像。
细调节器( 细螺旋) 形状较⼩，通常在粗调节器的下⽅或外侧，转动时可使镜台或镜筒缓慢地上下移动，以精细调节焦距，得到清晰的物像。
⑥旋转器( 镜头转换器) ：装在镜筒的下端，呈盘状，下⾯有3～4 个物镜孔供装置不同放⼤倍数的物镜。
⑦载物台( 镜台) ：⽤以放玻⽚样本，中间有⼀通光圆孔，称为镜台孔，由此孔可透⼊集光器传⼊的光线。
⑧标本移动器：装于载物台上，⽤于前后左右移动玻⽚标本。
移动器上有标尺，可以测定标本⼤⼩。
(2) 照明部分①显微镜采⽤电光源，使⽤时接上电源，在打开电源前，光照亮度旋⾄最⼩位置，然后打开电源，旋转亮度旋扭调节光照强度⾄适宜为⽌。
关闭电源前，应先将光照亮度旋⾄最⼩位置。
②聚光器( ⼜名集光器，condenser) ：位于载物台下⽅的聚光器架上，由聚光镜和虹彩光阑组成。
细胞生物学实验
究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
▪
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染
料的胶粒固定、堆积在细胞内某些持殊结构里，达到易于识
别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分
离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固
定在活细胞的某种结构上而显色。
Janus green B
电镜下的红细胞
实验原理
▪ 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透 性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出 细胞。水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照 物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透 压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。
▪ 将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到 细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中， 由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶 液，这种现象称为溶血。
4、显微镜观察方法
▪ 标本置于载物台上-----先于低倍镜（10×）观察------高倍镜（40×）------上抬1cm --------加香柏油到标本上------调节镜头（100×）， 并使之埋入油中 --------适量调节粗、微调焦螺旋至看清材料--------镜 下观察，并绘图；
▪ 实验结束，上升镜筒-------滴加二甲苯----用擦镜纸 擦拭镜头--------将显微镜恢复原位，放入镜箱
【实验材料】
▪ 1、主要设备：普通离心机、组织捣碎机、扭 力天平、光学显微镜。
▪ 2、小型器材：500m1烧杯2个，250m1量筒1 个，滴管10支，10m1刻度离心管20支，纱布 若干，载玻片和盖片各4片。
▪ 3、 0.35mol/L NaCl溶液。 ▪ 4、 新鲜菠菜。
【操作方法】
▪ A、游离叶绿体的制备与观察
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告实验名称：细胞染色体观察实验目的：观察和分析细胞染色体的结构和特点，了解细胞分裂过程中染色体的变化。
实验原理：细胞染色体是细胞核中的重要结构，由DNA和蛋白质组成。
本实验将通过制作和观察细胞染色体的垂直染色体图像，以分析染色体的数量、形状和分布情况，了解染色体在细胞分裂过程中的变化。
实验材料：细胞样本（如鲤鱼鳞片）、显微镜、盐酸、细胞染色试剂（如吉姆萨染液）、载片、封片胶。
实验步骤：1. 取一片鲤鱼鳞片作为实验的细胞样本，放在载片上。
2. 把加载着细胞样本的载片放入含有5%盐酸的试管中，轻轻摇晃试管，使细胞样本变得透明。
3. 把载片放入吉姆萨染液中，染液温度控制在60°C，染色时间为30分钟。
4. 取出染色后的载片用水洗净，尽量去除多余染色。
5. 将载片倒置在干净的玻璃滑板上，用纸巾轻轻擦干水分。
6. 取一滴封片胶放在载片上，再把玻璃滑板盖在上面。
7. 将载片封片胶放在显微镜架上，用显微镜进行观察。
实验结果：经过染色后，细胞样本的染色体呈现出深蓝色，能够明显看到染色体的形态。
观察到染色体的数量、形状和分布情况。
实验分析：通过观察实验结果，我们发现染色体的数量、形状和分布情况与细胞类型有关。
染色体的数量在细胞分裂过程中是相对固定的，但在不同细胞类型中会有差异。
染色体的形状也因细胞类型而异，可以是染色体形态较为规则的条状结构或染色体断裂后形成的不规则结构。
染色体的分布情况通常有两种类型，即离散分布和集中分布，前者表示细胞核内有多个染色体团，后者表示细胞核内有染色体团。
结论：通过本次实验，我们成功观察和分析了细胞染色体的结构和特点。
染色体的数量、形状和分布情况是细胞类型的重要特征，与细胞分裂过程密切相关。
这些发现对了解细胞生物学和机体发育具有重要意义。
实验存在的问题和改进方向：本实验中，实验步骤相对简单，但在染色后的观察过程中，可能存在染色不均匀、细胞过度变形等问题。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告目录：1.实验目的2.实验原理3.实验步骤4.实验结果与分析5.实验结论6.实验心得1.实验目的本实验旨在通过观察细胞的结构和功能，了解细胞的基本特征和生物学意义。
2.实验原理细胞是生物体的基本单位，由细胞膜、细胞质和细胞核组成。
细胞膜起着维持细胞内外环境平衡和物质交换的作用；细胞质内含有各种细胞器，如线粒体、高尔基体等，对细胞的代谢和功能发挥重要作用；细胞核则是细胞的遗传物质DNA的储存和转录的场所。
3.实验步骤步骤1：制备观察细胞的标本将动植物组织样本切片并固定在载玻片上，用甲醛或酒精进行固定。
步骤2：观察细胞结构将载玻片放在显微镜下，视野适当调整，首先用低倍镜观察整个组织结构，再用高倍镜观察细胞的细节。
步骤3：细胞核染色在载玻片上滴加少许乙醇溶液，保持片面湿润，然后在玻片上滴加适量的苏丹红G溶液，使其覆盖整个标本，再用玻片一端旋转均匀。
然后，用甲苯将玻片内溶液洗净，再用约10%苏丹红醇溶液染色5-10分钟，最后用水洗净，挤去水分。
步骤4：观察细胞核结构将载玻片放在显微镜下，用高倍镜观察染色的细胞核。
注意观察核膜、染色质和核仁的形态和位置。
4.实验结果与分析通过实验观察，得出以下结果和分析：-细胞膜：细胞膜是细胞的外层包裹结构，具有选择性通透性，能够控制物质的进出。
观察结果显示细胞膜是一个薄膜状结构，包裹着细胞质和细胞核。
-细胞质：细胞质是细胞核和细胞膜之间的区域，包含各种细胞器。
观察结果显示细胞质呈胶状或颗粒状，其中可以看到线粒体、高尔基体等细胞器。
-细胞核：细胞核是细胞的遗传中心，储存了细胞的遗传物质DNA。
观察结果显示细胞核通常为圆形或椭圆形，含有染色质和核仁。
5.实验结论本实验通过观察细胞的结构和功能，深入了解了细胞的基本特征和生物学意义。
细胞膜起着筛选物质进出细胞的作用，细胞质中的细胞器对细胞的代谢和功能起着重要作用，而细胞核则是细胞的遗传中心。
6.实验心得通过此次实验，我进一步了解了细胞的结构和功能。