抗菌肽替代抗生素实验实施方案
抗菌肽Protegrin-1与抗生素对致病性大肠杆菌的体外联合药效
抗菌肽Protegrin-1与抗生素对致病性大肠杆菌的体外联合药效王国栋【摘要】为研究抗茵肽Protegrin-1(PG-1)的抑茵效果及其与抗生素之间的协同效应关系,应用基因工程方法表达PG-1;测定几种常用的抗茵药物(四环素、丁胺卡那霉素和多黏茵素B等)对致病性大肠杆菌的最小抑茵浓度(MIC),并分别检测其与PG-1联用后的抗茵效果,采用分级抑制浓度指数(FIC)来分析PG-1与抗生素之间的抗茵作用关系,并进一步检测联合应用对细菌裂解率的影响.结果显示,PG-1与多黏茵素B、丁胺卡那霉素及四环素联用对大肠杆菌有协同作用,且PG-1与多黏菌素B 联用可以提高细茵裂解率.PG-1与一些抗生素存在协同或者相加作用,临床上使用PG-1可以在一定程度上减少甚至替代抗生素的使用.%To investigate the antibacterial activity of protgerin-1 and its synergic interaction with antibiotics,the Protegrin-1 was expressed in P.pastoris.Nine clinically used antibiotics,including tetracycline,amikacin sulfate,polymyxinB,cefradine,florfenicol,ciprofloxacin,norfloxacin,levofloxacin,streptomycin sulfate,were selected.In vitro antibacterial activities of the porcine antibacterial peptide Protegrin-1,alone or in combination with the antibiotics were measured by MIC.Synergy was surveyed when the antibacterial peptide was combined with the nine clinically used antibiotics by FIC.In the end,the bacterial lysis of Protegrin-1 was detected.The results showed that the antibacterial peptide had synergic interaction with amikacin,tetracycline and polymyxin B.The lysis rate of E.coli was increased substantially in the presence of the combination of Protegrin-1 andpolymyxin B.The results demonstrated that the effect of combination was synergistic or enhancement.The antibacterial peptide can reduce the using of antibiotics,and further studies are needed to analyze the antibacterial mechanism and their relationship.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2013(042)008【总页数】4页(P124-127)【关键词】抗菌肽;抗生素;致病性大肠杆菌;体外联合药效;FIC【作者】王国栋【作者单位】安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳455000【正文语种】中文【中图分类】S859.79+7抗菌肽作为一种免疫效应因子，在机体的先天性免疫中起重要作用。
抗菌肽叩响抗生素替代大门
连 续 阴 雨或 棚 内湿 度 较 大 ，可 以改用 百 菌 清烟 剂 熏蒸 防治 。
５ ． ２ 虫 害防治
可 采 用农 业 、物理 措施 与化 学 药 剂 防治 相 结
５ 病虫 害 防治
辣 椒病虫害较多 ，提倡 以农业 、物理防治为
主 ，化 学 药剂 防治 为辅 。
５ ． １ 病 害防治
合 的方法 进行 。利 用 防虫 网防虫 、黄 板诱 杀蚜 虫 、烟 粉 虱 。 药剂 防治 ：防 治蚜 虫 可选 用 吡蚜 酮 、吡虫 啉 、啶 虫 脒 等 药 剂 ；防治 烟 粉 虱 可 选 用 噻 虫 嗪 、
啶 虫 脒 等 ；防 治 红 蜘蛛 、茶 黄 螨 可 选 用 炔 螨特 、 哒螨 灵 、阿 维 菌 素 等 ；防治 烟 青 虫 、棉 铃 虫 可选 用 氯 虫 苯 甲酰胺 、茚 虫 威 、虫 酰 肼 、 甲维 盐 等药 齐 ４ 。防 治 时 药 液量 一 定要 用 足 ，要 选 用 对 路 农药 适 时进 行 防 治 。为 提 高化 学药 剂 的防 治 效 果 ，提
生 长 。 同 抗菌肽 叩 Nhomakorabea抗 生素替代 大 门
２ ０ 世 纪２ ０ 年 代 以来 ，抗 生 素 的发 现和 应 用拯 救 了无数 人 的 生命 。 如果说 之前 人 类 因其 受益 ，那 么 ，
如 今金 世 界 则 不得 不 致 力于 解 决抗 生 素滥 用 所 导致 的后果— — 耐 药细 菌 的 出现 及传 播 。
化学防治应在发病初期及时用药 。防治疫病 可选用嘧菌酯 、烯酰吗啉 、疫霉灵等药剂 ；防治 灰霉病可选用 嘧霉胺 、腐霉利 、异菌脲 等药剂 ； 防治菌核病可选用 乙烯菌核利 、腐霉利 、菌核净 等药剂 ；防治炭疽病可选用醚菌酯 、代 森锰锌 、 咪鲜胺 等药剂 ；病毒病重点做好药剂浸种和防治 蚜虫 ，在 发病初期选用宁南霉素 、盐酸吗啉胍等 加 叶 面肥 进 行 防治 。如 果 防 治 真 菌 类 病 害 时 遇 到
抗菌肽实验方案初稿
抗菌肽养殖场实验方案
实验目的：为了更好的挖掘抗菌肽样品在试验场中实际的使用效果，以及制定出产品在养猪场实际添加量，制定本方案
实验地点：实验负责人：
材料与方法
1.1试验时间与地点及试验材料
试验于2013年x月x日至x月x日在xx猪场试验场进行，抗菌肽由金斯瑞提供(3kg)。
1.2试验动物与试验设计
选择日龄为30±3天，胎次接近，健康水平良好的长大二元断奶仔猪6窝，随机分成对照组和试验组，每组3窝，分别装于6个小栏内，采取梯度实验方案，分别是300g/T,500g/T
1.3测定指标及方法
每天观察和记录各组仔猪采食量和健康状况（首次称重于x月x日下午进行，转群称重于x月x 日早上进行，准确试验时间共计31天）。
于试验开始和试验结束当天对猪只进行空腹称重。
饲料消耗量以进料量减省料量计算，根据给料量和省料量，计算平均日采食量和料肉比。
试验开始后每天观察仔猪生长状况和发病以及死亡情况。
同时记录养殖场的常规保健，免疫，发病情况及发病常规治疗用药情况。
2结果与分析
表1 抗菌肽饲料添加剂对仔猪生产性能的影响
组别初总重末总重初均重末均重总增重平均增重平均日增重料肉比
300g组
500g组
空白组
表2 抗菌肽对仔猪健康水平的影响
组别发病头数隔离头数死亡头数成活率／% 出栏头数出栏率／%
300g组
500g组
空白组
3讨论
4总结
起草人：qq85451078。
抗菌肽作为饲料添加剂在断奶仔猪上的田间试验
粪污进行合理的资源化利用，不仅可以减轻畜牧业对环境的污染，还可以为畜牧业赋能。
云平台通过对天津市畜禽粪污处理情况、处理成果进行统计、分析。
为畜禽粪污资源化利用提供参考依据，从而根据各地区的实际情况制定相对应的粪污资源化利用方案。
通过云平台实现粪污收集、处理设备和人员的调配，推动粪污收储，将粪污加工成有机肥等，将粪污的利用率实现最大化。
推动畜牧业与种植业相结合，实现种养一体化的良性循环。
4结语信息化是推动实现畜牧业现代化发展的强劲动力，天津市运用生猪产业技术体系创新团队服务云平台实现了畜牧业与信息化的有效对接。
以大数据和云计算为技术支撑，打破了数据、信息的孤岛，有效实现了机构、养殖户、技术人员、科研院所、专家等方面的紧密联系，实现了产业体系组织管理、畜牧业生产管理、环保监管信息化服务和粪污资源化利用的数字化发展，推动了畜牧业信息化发展，对“互联网+”现代农业的发展有十分重要的推动作用。
█抗菌肽作为饲料添加剂在断奶仔猪上的田间试验徐帆，刘娜，任含柳，侯彦秋（华北制药集团动物保健品有限责任公司石家庄050041）作者简介：徐帆（1993—），女，硕士。
研究方向为兽药及功能性饲料添加剂；E-mail:1252818013@。
了研究抗菌肽饲料添加剂在断奶仔猪生长性能及免疫活性指标等方面的影响，为抗菌肽在养猪生产中提供理论指导。
本次试验选30头体重较均匀、健康的28日龄断奶仔猪，随机分为不同的2个对照组，各组设立3个重复，每个重复5头猪；对照组正常饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加200g/t 的抗菌肽。
试验周期为28d 。
试验数据表明：对照组与试验组相比，试验组仔猪的平均日增重提高17.62%（P<0.05），耗料增重比降低13.74%（P<0.05），腹泻率降低72.99%（P<0.01），脾脏指数与胸腺指数分别提高22.82%和25.55%（P<0.05）。
由此可知，日粮添加了抗菌肽可以提高断奶仔猪的生长性能和免疫活性指标。
抗菌药替代研究报告
抗菌药替代研究报告抗菌药替代研究报告引言：近年来，随着抗生素滥用和耐药菌株的增多，抗菌药替代研究变得越来越重要。
寻找新的药物或策略来对抗细菌感染已经成为医学科研的焦点之一。
本报告将介绍最近一项抗菌药替代研究的发现和结果。
方法：本研究采用了体内和体外实验。
在体内实验中，利用小鼠感染模型，将小鼠分为两组：实验组和对照组。
对实验组小鼠采用了一种新的抗菌方法进行治疗，而对照组小鼠则采用传统的抗生素治疗。
在体外实验中，我们使用细菌培养方法，观察不同抗菌药物对不同细菌菌株的抑菌效果。
结果：在体内实验中，实验组小鼠在治疗后表现出了更快的恢复和更好的病情控制。
与对照组相比，实验组小鼠的存活率更高，感染程度更轻。
这表明新的抗菌方法具有更高的疗效和更低的毒副作用。
在体外实验中，我们发现了一种新的天然植物提取物，具有广谱的抗菌活性。
该提取物对多种细菌菌株具有明显的抑制作用，表明其有潜力作为抗菌药物替代品。
讨论：这项研究结果表明，新的抗菌方法和天然植物提取物有望成为抗菌药物的替代品。
传统抗生素的滥用导致了多种多样的抗药性细菌产生，而新的抗菌方法可能能够对这些菌株产生更好的治疗效果。
而天然植物提取物的发现也为寻找新的抗菌药物提供了线索。
未来的研究可以进一步探索这些新方法和提取物的机制和效果，并开展临床试验以验证其安全性和疗效。
结论：抗菌药替代研究是当今医学科研的热点之一。
本研究发现了一种新的抗菌方法和一种天然植物提取物，它们在体内和体外实验中表现出良好的抑菌效果和治疗疗效。
这些新发现为抗菌药物开发和治疗提供了新的思路和方法。
未来的研究将进一步探索这些新方法的机制和效果，并开展临床试验以验证其安全性和疗效，为人类抗菌药物替代创造更多可能性。
抗菌肽体外抑菌实验方法
微量肉汤稀释法（borth microdilution method）实验方法：1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液，4 ˚C下保存备用。
2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管中的MH肉汤，37 ˚C，180 r/min过夜培养。
将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 µL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 µLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。
37 ˚C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。
（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍）3.最小抑菌浓度MIC（mininmal inhibitory concentration）就是能阻止50%以上细菌生长的最小肽浓度。
用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。
4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残余菌落生长的肽的最低浓度。
从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 µL涂布到MH琼脂平板上，37 ˚C培养18 h，以此来确定肽的MBC。
参考文献：【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273.抗菌肽的体外抑菌实验（平板法）1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用剂量同样做6个浓度的稀释1 / 22.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL3.制板：取1 mL指示菌注入培养皿中，倒入灭菌的固体LB培养基摇匀，放冷后制成平板。
抗菌肽作为新型抗生素替代品的研究进展
抗菌肽作为新型抗生素替代品的研究进展一、引言哎呀，说起这个抗生素啊，真的是又爱又恨。
自从它被发明以来，救了多少条人命，简直就是医学界的大英雄。
可现在呢，这抗生素用得太多了，细菌们都快成“超级英雄”了，耐药性越来越强，让医生们头疼得不行。
所以啊，科学家们就琢磨着，得找个新法子来对付这些顽固的细菌。
这时候，抗菌肽就闪亮登场了，它就像是医学界的新希望，大家对它可是寄予厚望呢！二、核心观点一：抗菌肽的独特作用机制2.1 抗菌肽与细菌细胞膜的相互作用哎呀，说到抗菌肽啊，它的作用机制可真是让人眼前一亮。
你知道吗，这些小家伙们，它们并不直接攻击细菌的内部结构，而是像个聪明的小偷一样，先从外部下手。
它们会紧紧地吸附在细菌的细胞膜上，然后，你猜怎么着？它们开始在细胞膜上“挖洞”，就像是在搞破坏一样。
这些小洞一开始还只是些细微的裂缝，但很快，就像是雪崩一样，细胞膜的结构被彻底打乱了。
那些维持细胞生命所必需的离子和重要分子，就像是被打开了闸门的洪水一样，疯狂地涌出细胞。
这一下子，细菌内部的平衡就被彻底打破了，它们只能无奈地走向死亡。
2.2 与传统抗生素的比较说到抗菌肽和传统抗生素的区别，那可真是大了去了。
传统抗生素啊，它们就像是一群不分青红皂白的杀手，一股脑儿地攻击细菌。
这样确实能杀死不少细菌，但也误伤了不少好菌，让肠道菌群都乱了套。
可抗菌肽呢，它们就像是个精明的狙击手，专门挑那些坏蛋细菌下手，对好菌则温柔得很。
这样一来，不仅治疗效果好，还减少了对正常菌群的影响，简直是一举两得嘛！三、核心观点二：抗菌肽的开发潜力3.1 天然来源的丰富性哎呀，告诉你啊，自然界里抗菌肽的来源可多了去了，简直就是个宝库！从那些微小的细菌，到我们熟悉的真菌、植物，再到高等动物，每个生物体里都可能藏着抗菌肽的秘密。
就拿蜜蜂来说吧，它们的蜂毒里就有抗菌肽，不仅能抗菌，还能抗炎呢！还有那些海洋生物，比如鱿鱼和章鱼，它们的皮肤粘液里也富含抗菌肽，简直就是海洋中的“小卫士”。
抗菌肽--潜在的抗生素替代品
抗菌肽--潜在的抗生素替代品蔡菁【摘要】Antimicrobial peptides, a part of non-speciifc immune response, are participated in the direct destruction of various microorganisms. Some antimicrobial peptides have shown a broad spectrum of activity against gram-positive and gram-negative bacteria, enveloped viruses, fungi, parasites, and other microorganisms. Peptides as a new potential therapeutic drugs has been recently assessing.%抗菌肽作为非特异性免疫反应的一部分，参与对各种微生物的直接破坏。
现已证明一些抗菌肽具有广泛的抗革兰阳性和阴性细菌活性，也能抗包膜病毒，真菌等微生物和寄生虫。
鉴于抗菌肽具有广泛的抗菌作用，其作为新的治疗药物的潜力正在评估中。
【期刊名称】《上海医药》【年(卷),期】2013(000)019【总页数】4页(P55-57,58)【关键词】抗菌肽;抗生素;耐药性【作者】蔡菁【作者单位】四川大学华西药学院成都 610041【正文语种】中文【中图分类】R978.17抗生素耐药性在微生物中广泛存在的事实已经有据可查，促成这一发展的因素包括抗生素使用不当、广谱抗生素的过度使用、抗生素在食品和畜牧业以及家用产品中的使用或添加等，它们导致了许多致病菌株的多药耐药性的产生从而成为临床上的棘手问题。
细菌的多药耐药性对人类健康是一个极大的威胁，它激励我们努力开发包括潜在替代药物的抗菌肽。
抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)是指有机体在真核生物的核糖体和原核生物非核糖体合成的小分子碱性多肽，如昆虫抗菌肽、杆菌肽、多黏菌素等[1]，被称为进化的古代兵器，在动植物中都有发现。
两种方法测试抗菌肽与抗生素的联合抑菌效果
20244两种方法测试抗菌肽与抗生素的联合抑菌效果赵晶晶1李晓凤2刘保国2杭柏林2*（1洛宁县动物疫病预防控制中心，河南洛宁471700；2河南科技学院动物科技学院，河南新乡453003）摘要为了解抗菌肽泰立停与抗生素的联合抑菌作用，本研究通过倍比稀释法和纸片法测试了泰立停和抗生素在单用和联用时对大肠杆菌和沙门菌的抑菌活性。
结果表明：抗菌肽泰立停和抗生素安普霉素、恩诺沙星、多西环素在单用时对大肠杆菌和沙门菌均有不同程度的抑菌活性，在联合使用时，倍比稀释法观察到泰立停与恩诺沙星联合可以提高对大肠杆菌CVCC1568的抑菌活性；纸片法观察到仅泰立停与多西环素以8∶2的比例进行联合时对大肠杆菌AE1具有联合抑菌作用，同时观察到泰立停与某些抗生素联合时，抑菌效果与该抗生素单用的效果相当。
说明抗菌肽泰立停与某种抗生素联合可针对某种菌的某些菌株有很好的抑菌活性，同时可以降低抗生素的使用剂量。
这将减少抗生素在临床中的应用，进而避免或减少耐药菌的形成，维护人与动物的健康，保护生态环境。
关键词抗菌肽；泰立停；抗生素；联合抑菌作用中图分类号S859.79+6文献标识码A文章编号1007-5739（2024）04-0139-04DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2024.04.035开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Two Methods for Testing Combined Antibacterial Effects of Antimicrobial Peptideand AntibioticsZHAO Jingjing1LI Xiaofeng2LIU Baoguo2HANG Bolin2*(1Prevention and Control Center for Animal Disease in Luoning County,Luoning Henan471700;2College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang Henan453003) Abstract In order to understand the combined antimicrobial activity of antimicrobial peptide Tailiting and anti-biotics,the antibacterial activity of Tailiting and antibiotics against Escherichia coli and salmonella was tested by double dilution method and paper slice method when Tailiting or antibiotic was used alone,or Tailiting combined with anti-biotic.The results showed that single use of Tailiting or antibiotic(apramycin,enrofloxacin and doxycycline)had different antimicrobial activity against E.coli and salmonella.The combination of Tailiting and enrofloxacin could increase the antimicrobial activity against E.coli CVCC1568by double dilution method.Only the combination of Tailiting and doxycycline at the ratio of8∶2had the combined antimicrobial effect on E.coli AE1.The combined antimicrobial effect of Tailiting and some antibiotics was similar to that of antibiotic alone.The results indicated that the combination of antimicrobial peptide Tailiting and some antibiotics had good antibacterial activity against some strains of certain bacteria and could reduce the dosage of antibiotics.This would reduce the application of antibiotics in clinic,and could avoid or reduce the formation of drug-resistant bacteria,maintain the health of human and animals and protect the ecological environment.Keywords antimicrobial peptide;Tailiting;antibiotic;combined antibacterial activity基金项目河南省科技攻关项目（222102110411）；河南科技学院高层次人才启动项目（2014020）；河南省三区人才项目（105020222016/011）。
“基因工程系列饲用抗菌肽的产业化研究与开发”可行性方案
“基因工程系列饲用抗菌肽的产业化研究与开发”可行性方案一、项目背景当前，农业养殖业面临着疾病防控和抗生素使用等问题。
抗生素滥用不仅会导致抗生素残留，还会加剧细菌耐药性的形成。
因此，寻找一种新型的抗菌剂替代传统抗生素成为当前农业养殖业的迫切需求。
二、项目概述“基因工程系列饲用抗菌肽的产业化研究与开发”旨在利用基因工程技术，研发和生产一种新型的饲料添加剂，即饲用抗菌肽，用于农业养殖业防病抗菌。
该项目的目标是实现抗生素替代品的研发和产业化应用，为农业养殖业提供更安全、高效的抗菌解决方案。
三、项目内容1.技术路线研究：通过基因工程技术，利用重组DNA技术构建一系列饲用抗菌肽基因。
2.基因克隆与表达：将构建好的基因进行克隆和表达，获取有效的抗菌肽。
3.产品开发与工艺优化：根据抗菌肽的特性，进行产品开发和工艺优化，确保产品的稳定性和高效性。
4.临床试验与效果评估：进行动物试验和临床试验，评估抗菌肽的效果和安全性。
5.产业化推广：根据试验和评估结果，进行产业化推广，扩大抗菌肽在农业养殖业的应用范围。
四、项目预期效益1.资源可持续利用：通过基因工程技术，利用自然资源构建抗菌肽基因，实现资源的可持续利用。
2.抗菌效果显著：饲用抗菌肽对多种细菌具有广谱杀菌作用，能够有效预防和控制养殖业中的疾病传播。
3.降低养殖成本：与传统抗生素相比，饲用抗菌肽更安全有效，能够降低养殖成本。
4.提高产品质量：饲用抗菌肽能够改善动物健康状况，提高肉、蛋、奶等畜产品的质量。
5.社会效益显著：通过减少抗生素使用，抗菌肽的应用对社会公众的健康和环境保护具有重要意义。
五、项目实施计划1.第一年：完成技术路线研究和基因克隆与表达工作。
2.第二年：开展产品开发与工艺优化，同时进行动物试验和临床试验。
3.第三年：根据试验和评估结果，进行产业化推广和市场应用。
六、项目风险分析与对策1.技术风险：基因工程技术在操作和操作过程中存在一定的技术风险，需要建立完善的质量管理体系和实验室操作规范。
抗菌肽用作饲料添加剂代替抗生素的优势和效果
药性 ， 新 德里 金属 一Ｊ ３ 一内酰胺 酶 １ （ ＮＤ和结构 特征分 类 。一般可 细 菌 的出现 ， 更 是 引起 了全 世界 对 病 菌 耐药 性 问题 分为 ４类 ， 即天 蚕 素 、 蛙皮 素 （ Ｍａ ｇ ｉ ｎ ｉ ｎ ｓ ） 、 防 御 素 的极大重 视 Ｌ １ ］ 。因此 ， 抗 生素 被 新 型 的无 公 害 添 加 （ Ｄ ｅ ｆ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ ｓ ） 及蜂毒 素（ Ｍｅ ｌ ｉ ｔ ｉ ｎ ｓ ） 。其 中 ： 天 蚕 素 是
】 、 昆虫 抗 菌 肽 、 人 的 骨髓 和 生 殖 道 防御 素 后分 离纯化 出许 多抗 菌肽 ； 四是 １ ９ ７ ２ 年 瑞典科 学 家 抗 菌肽 ｌ ａ ｌ ｌ －３ ９等 ） 、 含等量 半胱 氨酸 的抗 菌肽 及 富含 １ ～２ 在果 蝇 中发现抗 菌 肽 ， 随后 又从 惜 古 比天蚕 蛹 体 内 Ｆ
１ ） 根 据抗 菌 肽 的来 源分 类 。一般 可 分 为 ６类 ，
抗 病 能力 ； 但是， 长期 、 广泛 、 不 加 选 择 地 使 用抗 生 即植物抗 菌肽 、 哺 乳 动物 抗 菌肽 、 两 栖 动 物抗 菌 肽 、
素， 导致很 多病 原微 生 物 对 现有 的抗 生素 产 生 了耐 昆虫抗菌 肽 、 细菌抗 菌肽 以及病毒 抗菌肽 ｌ 】 。
张
兵． 男， １ ９ ７ ７干 Ｆ ｔ， 本科 ， 畜牧师 。
饲料 ２ ０ １ ３年 第 １ １
饲 料 营 养 ．３ ５．
而 细胞 膜却 能 等量 半胱 氨 酸 的抗 菌肽 又可 分 为含有 １ 个 二硫 键 的 之 进入 细胞 内并 作用 于胞 内靶位 点 ，
剂 所替代 是 必然趋 势 。
世界上第 一个 被发 现 的抗 菌 肽 ； 富 含半 胱 氨 酸 残基
抗菌肽作为新型抗生素替代品的研究进展
抗菌肽作为新型抗生素替代品的研究进展一、研究背景与重要性1.1 当前抗生素面临的挑战嗨，聊到抗生素啊，这真的是个让人又爱又恨的话题。
抗生素自从被发明以来，简直是人类医学史上的一大壮举！想想以前，一个小小感染就能要人命，现在呢？割个阑尾、整个容，没有抗生素护体，那画面太美我不敢看。
但问题来了，这些超级英雄用多了，好像也有点“审美疲劳”，那些细菌小怪兽们开始穿上了“防弹衣”——耐药性。
A项研究数据显示，到了2050年，如果没有新招儿，耐药菌每年能导致1000万人提前下线，经济损失高达100万亿美刀！这可不是闹着玩的，到时候咱们不是在看病，简直是在看谁运气好了。
1.2 抗菌肽的潜力与优势说到抗菌肽，这可是自然界的秘密武器！它们就像是细菌世界的“天然警察”，专门对付那些不安分的坏家伙。
比如，蜂毒肽和防御素，听名字就自带主角光环，既能迅速干掉细菌，还能玩点花样，比如破坏细胞膜，让细菌自己崩溃。
更神奇的是，这些抗菌肽还很难让细菌产生耐药性，简直就是抗生素界的一股清流啊！B项研究表明，某些抗菌肽通过干扰细菌的细胞壁合成或DNA复制，展现了其独特的抗菌机制，这为解决耐药性问题提供了新思路。
二、核心观点一：抗菌肽的作用机制2.1 膜破坏模型咱们得说说抗菌肽是怎么工作的。
想象一下，抗菌肽就像是微型的忍者，它们悄无声息地接近细菌，然后——“咻”地一声，插入细菌的细胞膜。
就像用针刺气球一样，细胞膜瞬间破裂，细菌里面的东东都漏出来了，细菌也就领盒饭了。
C项实验揭示了抗菌肽如何通过其两亲性α螺旋结构插入细菌膜，形成孔洞，导致细胞内容物泄漏。
这种物理性的杀伤方式，减少了细菌产生耐药性的机会，因为细菌想抵抗都不知道怎么下手。
2.2 非膜破坏机制但别以为抗菌肽只会这一招，它们可是多才多艺的。
除了直接破膜，抗菌肽还能钻进细菌体内，找到细菌的弱点——比如蛋白质合成啊、DNA复制啊这些关键过程，给它使个绊儿。
这样一来，细菌就算细胞膜完好无损，也得乖乖完蛋。
抗菌肽替代抗生素在肉鸡生产上的应用
（ １ ． 林州 中农 颖 泰生 物肽 有 限公 司 ； ２ ． 北 京 中农 颖 泰生 物技 术有 限公 司 ；
３ ． 中 国农 业 大学 动物 科技 学 院 ）
摘
要： 本试 验 旨在 研 究抗 菌肽 （ 商 品名 ： 梭 力克 ） 替代 １ ０ ％亚 甲基 水杨 酸 杆 菌 肽预 混
剂 对 肉鸡 坏 死性 肠 炎的 防制 效果及 生长性 能的影 响 。将 １ ５日龄 肉鸡 随机 分 为 ４个试 验 组 ，
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２ ０ １ ７年第 １ ２ 期（ 总第 １ ８ ８ 期）
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新型抗菌肽菌丝霉素被认为有望替代抗生素的理想药物
新型抗菌肽菌丝霉素被认为有望替代抗生素的理想药物抗菌肽是生物体的诱导产生的一种具有生物活性内经小分子多肽，是生物体非特异性绝大部分特异性中必须部分。
多肽抗菌肽具有广谱的抗菌活性，且不易造成耐药性，被认为是有望替代抗生素的理想化药物看来之一，逐渐开始在畜禽、水产、抗癌药物等各方面广泛应用。
菌丝霉素体腔是来源于腐生子囊菌的一种真菌抗菌肽，也称作宿主的防御嘌呤，抗菌谱主要包括革兰氏阳性菌、多重耐药细菌、寄生虫、包膜恶意软件和肿瘤细胞。
菌丝霉素发现至今仅有10年，对其起源、结构、重组表达、药物应用进展等研究夺得一定进展。
新型抗菌肽菌丝霉素被认为有望替代抗生素的药物？获得抗菌肽的手段之一是基因重组表达后，进行生物工程发酵。
发酵后将菌丝霉素与宿主蛋白分离，制备较高纯度的目的蛋白，纯化技术或者使用离心、膜过滤或色谱等方法。
然而抗菌肽分子量小，带大量正电荷，与杂质不易分开，单独使用上述所用途径进行纯化，分离效果不理想，得到的纯度不高。
虽然可使用制备型色谱进一步分离纯化，但成本太高、效率太低，并不适合生产时扩大纯化业务规模。
据报道，科研工我通过添加蛋白表达标签，如His-tag，利用亲和层析方法能比较便捷地获得纯蛋白。
但有研究指出添加表达标签改变菌丝可能会蛋白本身结构霉素降低抑菌活性。
因此，为了获得天然结构的菌丝霉素重组线粒体，本实验室构建了小带表达标签的菌丝霉素表达载体，再使用多种纯化技术组合法，将凝胶过滤色谱与离子交换柱铋组合、疏水柱与离子交换柱组合，分析三种这两种组合的氢化效果，为大规模获得高纯度菌丝霉素天然蛋白提供参考。
1、材料与设备1.1材料检测菌：金黄色葡萄球菌CMCC26003；纯化原料：含菌丝霉素的毕赤酵母发酵液；纯化填料：GE的疏水作用树脂PhenytSepharoseHP；GE的离子交换树脂CMSepharoseFF；GE的凝胶过滤树脂SephadexG25。
1.2主要仪器旋转真空蒸发仪、高速冷冻离心机、垂直电泳仪、紫外检测仪、高效液相色谱仪、酶标仪。
抗生素的理想替代品——抗菌肽
应用前景
• 抗生素的理想替代品
• 开发和应用潜力巨大
目前，所有的常规抗生素都出现了相应的抗药 性致病株系，致病菌的抗药性问题已经日益严重地 威胁着人们的健康。寻找全新类型的抗生素是解决 抗药性问题的一条有效途径。抗菌肽因为抗菌活性 高，抗菌谱广，种类多，可供选择的范围广，靶菌 株不易产生抗性突变等原因，而被认为将会有广阔 的应用前景。更为重要的是，肽在序列和结构上具 有多样性，为新药设计提供了很大的想象和发挥空 间，能生产出性能稳定的产品。
抗菌肽的分类
• • • • 昆虫抗菌肽 哺乳动物抗菌肽 两栖动物抗菌肽 鱼类、软体动物、甲壳类动物来源的抗菌 肽 • 植物抗菌肽 • 细菌抗菌肽
抗菌肽作用机理
目前严格地说，抗菌肽以何种机制杀死细菌至今 还没有完全弄清楚。有人提出抗菌肽分子通过膜内分 子间的位移而相互聚集在一起，从而在膜上形成离子 通道，使膜蛋白凝集，使细菌因不能保持正常的渗透 压而死亡。也有人提出是通过影响细胞膜上的能量转 运和代谢，从而损伤细胞呼吸链的功能而杀死细菌。 抗菌肽还可以断裂癌细胞的核DNA，通过抑制DNA的 合成而杀死癌细胞。总而言之，抗菌肽作用机理的关 键在于通过物理方式和细胞膜发生作用，不同类别的 抗菌肽其作用机理可能不同。
存在问题
• 抗菌肽的天然资源有限，化学合成和基因工程便成为获取 抗菌肽的主要手段。化学合成肽类，成本较高。而通过基 因工程，在微生物中直接表达抗菌肽基因，可能造成宿主 微生物自杀而不能获得表达产物。以融合蛋白的形式表达 抗菌肽基因，虽然可以克服这一缺点，但仍有表达产物少 的问题。 • 与传统抗生素相比，抗菌肽的抗菌活性还不够理想。改造 已有抗菌肽和设计新抗菌肽分子是创造高活力抗菌肽的有 效途径。这就需要进一步研究抗菌肽结构与活性的关系和 作用机理，为抗菌肽分子的改造和设计提供足够的理论依 据。 • 动物对各种肽的耐受浓度不同，这一问题尚需研究。
抗菌肽相关实验报告
一、实验目的1. 学习抗菌肽的分离纯化方法。
2. 了解抗菌肽的生物学活性及其在抗菌中的应用。
3. 掌握抗菌肽活性测定方法。
二、实验原理抗菌肽是一种具有广谱抗菌活性的小分子肽，主要由20-50个氨基酸组成。
抗菌肽通过破坏细菌细胞壁、干扰细菌蛋白质合成等途径发挥抗菌作用。
本实验旨在从某种生物来源中分离纯化抗菌肽，并对其活性进行测定。
三、实验材料1. 生物材料：某种生物组织（如动物血液、皮肤等）。
2. 试剂：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、氯化钠（NaCl）、三氯乙酸（TCA）、醋酸乙酯、乙醇、丙酮等。
3. 仪器：高速离心机、紫外可见分光光度计、pH计、电泳仪、凝胶成像系统等。
四、实验方法1. 抗菌肽的提取（1）将生物材料剪碎，加入适量PBS缓冲液，搅拌充分。
（2）加入TCA溶液，使pH降至3.0，静置30min。
（3）离心（10000r/min，15min），弃去上清液。
（4）加入醋酸乙酯，静置30min，离心（10000r/min，15min）。
（5）收集沉淀，加入适量乙醇，静置30min，离心（10000r/min，15min）。
（6）收集沉淀，加入适量丙酮，静置30min，离心（10000r/min，15min）。
（7）收集沉淀，真空干燥，得到抗菌肽粗提物。
2. 抗菌肽的分离纯化（1）将抗菌肽粗提物溶解于适量PBS缓冲液中。
（2）采用Sephadex G-50凝胶柱层析，用PBS缓冲液洗脱。
（3）收集各洗脱峰，采用SDS-PAGE电泳检测各峰的纯度。
（4）将纯度较高的洗脱峰收集，真空干燥，得到抗菌肽纯品。
3. 抗菌肽的活性测定（1）采用纸片扩散法，将抗菌肽纯品点于含有金黄色葡萄球菌的琼脂平板上。
（2）观察抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径，与已知浓度的抗生素进行对比，计算抗菌肽的活性。
五、实验结果1. 抗菌肽的提取通过以上方法，成功从生物材料中提取出抗菌肽。
2. 抗菌肽的分离纯化通过Sephadex G-50凝胶柱层析，成功分离纯化抗菌肽。
抗菌肽——潜在的抗生素替代品
抗 菌肽
ⅡⅡ 潜在 的抗 生素替代
蔡菁
口
（ 四川 大学华西药学院
摘 要
成都
６ １ ０ ０ ４ １ ）
抗 菌肽作 为非特异性免疫反应的一部分 ，参与对各种微生物的直接破坏。现 已证明一些抗菌肽具有广泛的
抗 革兰阳性和 阴性细菌活性 ，也能抗 包膜病毒 ，真 菌等微 生物和寄生虫。鉴于抗菌肽具有广泛的抗菌作用 ，其作为新的
师 ，主要从 事 生物 安全方 面的研 究。Ｅ ． ｍａ ｉ ｌ ： ２ ７ ８ ０ ６ ６ ８ ０ ＠
ｑ ｑ． ｃ ｏｍ ．
称 为进化 的古代兵器 ，在动植 物中都有发现 。抗 菌肽在
先 天的非特 异性 防御 系统 中扮 演重要 的角 色 ，赋予没有
ＩＭ ［ １ ０ 】 Ａ ｄＣＯＣｋ
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抗菌肽替代抗生素对肉鸡生产性能、免疫功能及肠道健康的作用效果
试验方案
一、研究背景
由于饲用抗生素的危害日趋严重，目前允许使用的种类越来越少，欧盟已于去年全面禁止在饲料中添加使用，所以开展抗生素替代物的研究显得非常重要。
本试验以抗菌肽为研究材料，添加到肉鸡日粮中，研究不同的添加量对肉鸡的生长、消化和免疫系统的影响，并通过肠绒毛结构的观察及免疫指标的检测，探索抗菌肽增强肉鸡生产功能的机理，旨在确定应用抗菌肽替代饲用抗生素的可行性，为抗菌肽制剂在肉鸡生产中推广利用提供试验数据。
二、试验设计
本试验采用单因子完全随机化试验设计，将900（或720）只AA肉鸡随机分
成6个处理，每个处理6个重复，每个重复25（20）只鸡，试验期为6周。
试验材料：富力泰C（海纳川药业的抗菌肽）、抗菌肽D对照组（国内某企业生
产的抗菌肽）、恩拉鼎F-40（先灵葆雅的恩拉霉素）。
具体试验设计见表1。
表1 试验设计
处理
组别
A空白对照组（日粮不添加任何抗生素）
B富力泰C1组（空白对照组日粮+50mg/kg抗菌肽）
C富力泰C2组（空白对照组日粮+100mg/kg抗菌肽）
D 富力泰C3组（空白对照组日粮+150mg/kg抗菌肽）
E抗生素对照组（日粮+200mg/kg恩拉鼎F-40组, 4ppm,不休药）
F 抗菌肽D对照组（日粮+200mg/kg肽生素）
三、测定指标
1.生产性能
在试验的第21d和42d，每个重复的鸡空腹称重，记录前后两期（1-21d，22-42d）每个重复鸡的体重和采食量，统计计算平均日采食量、平均日增重和料重比。
平均日采食量（ADFI）=总耗料量/饲养日
平均日增重（ADG）=（试验末体重-起始体重）/试验天数
料重比（F/G）=总耗料/总增重试验鸡每周统计一次耗料。
2.免疫功能
1）免疫器官指数测定
试验第21d和42d，从个每个重复中随机取2只鸡，称重后宰杀，解剖剥离或摘取胸腺、脾脏、法氏囊，称取各免疫器官重量。
免疫器官指数计算公式：脾脏指数=脾脏重量（g）/鸡体重（kg）
胸腺指数=胸腺重量（g）/鸡体重（kg）
法氏囊指数=法氏囊重量（g）/鸡体重（kg）
2）血清生化指标
试验第21d和42d，从每个重复中随机取2只鸡，翅静脉采血，离心分离血清，用免疫透射比浊法试剂盒，测定血清中血清白蛋白、IgG、IgM以及补体C3、C4含量。
同时用免疫比浊法试剂盒测定血清中的溶菌酶。
3.肠道健康的影响
1）肠道食糜消化酶活性
样品采集和处理：21d和42d，从个每个重复中随机取2只鸡，宰杀，取小肠食糜。
食糜用4℃的0.4mol/L氯化钠溶液稀释10倍，匀浆。
将匀浆液4℃下1200rpm 离心5min，将上清液置于﹣20℃保存备测。
测定淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等活性，采用南京建成生物有限公司试剂盒。
2）肠道内容物菌群测定
试验第21d和42d，从每个重复中随机取2只鸡，宰杀，无菌取回盲交接处回肠、盲肠段，两端结扎，无菌操作台内称取0.5g左右肠段内容物于灭菌稀释瓶内，加入先配好已灭菌的生理盐水4—10倍稀释，将回盲肠内容物稀释液10ul 分别接种于麦康凯培养基、MRS培养基，培养肠道内大肠杆菌、乳酸杆菌。
细菌数量统计：根据菌落可数性原则，选择合适稀释度，用血球计数板统计菌落个数，换算出每克肠道内容物中所含有的细菌数，并以其对数值表示（lgN/g）。
3）小肠绒毛长度及隐窝深度比值
试验第21d和42d，从个每个重复中随机取2只鸡，宰杀，取空肠（卵黄囊遗迹之上5cm）肠管约2cm，用10%甲醛磷酸缓冲液固定，做石蜡切片，HE染色，显微镜观察。
4.残留检测
42d杀鸡，取肌肉及肝脏样，检测肌肉样及肝脏恩拉霉素残留，将每个重复中随机取的2只鸡的样品合并检测，加上空白对照共：3组*6重复*2肌肉及肝脏样=36个样。
对于抗菌肽组，检测高、中、低及空白对照组的肌肉、肝脏、粪便中的抗菌肽基因。
共4组*6重复*3=72个样。
具体的引物设计请参考“转柞蚕抗菌肽CAD基因毕赤酵母GS115.CAD-1在广东省环境释放”。
5. 经济效益分析
4%的恩拉鼎F-40价格为120元/千克，富力泰C成本约120元/千克，肽生素成本约80元/千克。
根据生长性能指标评估成本。
体外试验
1、产品评价
检测富力泰、肽生素的药物残留（即产品是否掺有抗生素）
2、体外抑菌试验
采用琼脂打孔法对恩拉鼎F-40、富力泰C、肽生素进行体外抑菌试验。
以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及产气荚膜梭菌为病原指示菌，测以上三种产品的MIC值。
以富力泰C对大肠杆菌的MIC检定为例，方法如下：
1.试剂：
液体LB培养基配制
胰蛋白胨：1% OXOID牌TRYPTONE
酵母浸粉：0.5% OXOID牌YEASTEXTRACT
NaCl:1%
技术琼脂粉（进口）：1.2～1.5% 广东环凯微生物科技有限公司
将上述培养基配比，以水为溶剂，调pH值7.0，灭菌备用。
2.大肠杆菌（ATCC25922）培养液制备：
2.1 菌液制备：将大肠杆菌（ATCC25922）先接种在营养平板上，35～37℃培养16～24h。
将培养后营养平板上的单菌落（5~6个）接种至50ml的无菌LB 液体培养基中，置于摇床（转速220rpm）培养，培养温度：30度，培养时间：10—12h。
置4℃冰箱中贮存备用（菌液贮存时间不得超过3天）
2.2测试菌的配制：将上述测试菌培养液放置于常温后，置分光光度计于600nm处测吸光值至2.3，如高于此吸光值，可用培养液调整测试菌液吸光值至
2.3。
3.检测培养基制备：
3.1将灭菌后的LB培养基置室温使其冷却至48-50°C，按100ml无菌LB培养基中加入100ul菌液（OD=2.3），摇匀。
吸取含测试菌的LB培养基10.5ml，置90mm碟底内均匀摊布，使其在水平台面上凝固，凝固后放置20分钟后盖好陶瓦盖，备用。
4.样品制备：
4.2精密称定待测的试样1.0000 g，精密加入灭菌水10mL，40℃超声水浴15分钟使溶解。
放至室温，吸取适量上述溶液于具塞灭菌离心管中，10000 rpm 离心5分钟，取上清液，过0.4微米除菌膜，作供试样品溶液。
4.3在上述3.1项制备好的检测培养基上用灭菌的打孔器（2.7 mm）打孔，记录每孔的号码（1-5号），每孔中分别加入5 µL 的富力泰C测试样品溶液。
盖好陶瓦盖，置在37°C培养箱中培养16至20小时后，用多功能微生物分析测量仪测定抑菌圈直径，取平均值。
注：肽生素检定方法同富力泰C，恩拉霉素检定参考资料兽药典。