异喹啉酮类化合物

三、实验部分
(一)实验前准备 清洗→包装→灭菌 （二）实验方法 1 肺腺癌细胞A549的复苏 2 细胞的传代培养与观察 3 细胞计数 4 细胞冻存 5 体外抗肿瘤活性筛选(MTT法)
1.细胞复苏:紫外消毒→细胞解冻→离心→接种 培养48h 2.传代培养：洗细胞→胰酶消化→接种 3.细胞计数 4.细胞冻存：消化→加培养液→离心→制成含 10%DMSO的冷细胞悬液→温度渐降冻存细胞 5.活性筛选：细胞悬浮液→96孔板(1板两组，每 组5复孔)孵育24h→受试药物48h→MTT→弃MTT， DMSO→酶标仪检测
0.834365 -0.09743 -0.05649 -0.06103 0.086757
0.891687 0.103497 0.11209 0.022482 -0.01301
0.833946 -0.02421 0.047877 -0.18736 0.122043
0.974589 0.221901 0.13595 0.048995 -0.06314
异喹啉酮类化合物抗肿瘤活性筛选
指导教师：杨洪一 2006级生命科学1班 梁琦
一、课题的提出及意义
根据抗肿瘤药物4-苯胺基喹唑啉类化合物的构效 关系，采用骨架跃迁的方法，获得8-羟基-2-芳基-1异喹啉酮类化合物 。由于它们具有相同的药效团，因 此我们认为8-羟基-2-芳基-1-异喹啉酮类化合物也具 有抗肿瘤活性，所以，本实验采用四氮唑盐比色(MTT 法)，旨在探究新合成的8-羟基-2-芳基-1-异喹啉酮类 化合物抑制人肺腺癌细胞A549增殖的作用大小，并与 经典抗肿瘤药物吉非替尼进行比较，争取得到抗肿瘤 活性比吉非替尼强的化合物，为我国抗肿瘤药物的研 究作出应有的贡献。
注：IC50是指“反应”被抑制一半时抑制剂的浓度
五、实验结论
通过MTT法测定新合成化合物的抑制率以及计算其半数致死 率IC50，可以得出以下结论： 1．新合成的13种化合物均具有抑制A549细胞增殖的活性且 高浓度时抑制率较高。 2．5、7、11号化合物抑制率出现较多负数，可能是给药时间 太短造成的，接下来的研究应该适当延长给药时间。 3．1、2、3、4和8号化合物抑制人肺腺癌细胞A549增殖的作 用比吉非替尼强，而5、6、7、9、10、11、12和13号化合物与吉 非替尼相当。
N NH
O N H O N
4-芳氨基喹唑啉类
8-羟基-2-芳基-1-异喹啉酮类
二、实验原理
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源 性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉 积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜 （DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫 检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间 接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
0.976390 0.509061 0.407671 0.365123 0.177078 11
0.857914 -0.11638 -0.05292 -0.06207 -0.06053 12
0.901398 0.120329 0.088428 -0.048800 -0.11088 13
0.986278 -0.16923 -0.02259 -0.18912 0.405860 14
改良寇式法：lgIC50=Xm-I（P-(3- Pm-Pn)/4） Xm:lg最大剂量；I:lg(最大剂量/相临剂量)； P:阳性反应率之和；Pm:最大阳性反应率；Pn: 最小阳性反应率 例如：药物1 Pm=0.918520；Pn=0.127904； P=2.15226 Xm=lg0.0001=-4 lgI=lg(0.0001/0.00001)=1 lgIC50= Xm-I（P-(3-Pm-Pn)/4）=-5.663866 IC50=2.168×10-6
谢
谢!
四、实验结果
药品 抑 制率12源自3456
7
10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
药品 抑 制率
0.918520 0.256736 0.127904 0.208449 0.640651 8
0.936669 0.224498 0.390908 0.227229 0.430187 9
0.894950 0.408945 0.290661 -0.01442 0.306211 10
10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
0.850593 0.039754 0.094896 0.227219 0.387659
0.875144 0.116402 0.004281 0.088696 -0.00163
0.988073 0.194199 0.014572 0.029863 -0.07657
药品号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14(吉非替尼)
IC50(mg/ml) 2.17× 2.17×10-6 1.78× 1.78×10-6 3.57× 3.57×10-6 1.06×10-6 1.06× 4.39×10-5 2.47×10-5 1.29×10-5 8.46×10-6 8.46× 2.79×10-5 1.87×10-5 4.17×10-5 2.46×10-5 3.35×10-5 1.30×10-5