碱性磷酸酶
血清中碱性磷酸酶的测定
果。
误差分析
误差来源识别
分析测定过程中可能存在的误差来源，如试剂不稳定 性、操作不规范等。
误差评估
对误差进行定量评估，了解误差对测定结果的影响程 度。
误差控制
采取相应的措施控制误差，如定期校准仪器、规范操 作流程等，以提高测定结果的准确性和可靠性。
05 结论
CHAPTER
实验总结
实验原理
本实验基于碱性磷酸酶在pH值为9.6 的磷酸盐缓冲液中，能够将磷酸苯二 钠水解为苯酚和磷酸，苯酚在硫酸的 作用下可以形成稳定的苯酚钠盐，进 而通过分光光度计测定其吸光度，从 而计算碱性磷酸酶的活性。
02
探索其他相关指标与碱性磷酸酶的关联性，以更全面地评估肝
胆疾病的病情和治疗效果。
针对实验中的关键步骤和影响因素进行深入研究，以提高实验
03
的准确性和可靠性。
谢谢
THANKS
测定方法分类
根据测定原理，碱性磷酸酶的 测定方法可分为化学法和生物 法两类。
化学法包括酚试剂法、磷酸苯 二钠法等；生物法包括利用同 工酶的电泳法和免疫法等。
其中，酚试剂法由于操作简便、 准确度高，是目前临床上最常 用的测定方法。
03 实验步骤
CHAPTER
样本采集与处理
采集血清样本
从患者静脉采血，分离出血清， 避免溶血和污染。
数据转换
根据需要，将测量值转换为相应 的浓度或活性单位，以便进行比 较和解释。
结果判断与解读
正常范围判断
01
根据参考值范围，判断血清中碱性磷酸酶的活性是否在正常范
围内。
异常结果解读
02
对于异常结果，应结合临床情况和相关指标进行分析，以确定
可能的病因或病理状态。
碱性磷酸酶的分离纯化鉴定
2、 定量分析的理论基础 －－Lambert—Beer定律
A ＝ K·L·C
吸光度 (Aabsorbance,A ) 消光度 (degree of extinction,E ) 光密度 (optical density,D )
参比溶液的选择
• 溶剂空白： 当显色剂及所用其它试剂在测定波长 都没有吸收峰时，可用纯溶剂(如蒸馏水)作参比 溶液。
• 试剂空白： 当显色前的样品在测定波长没有吸收 峰，而显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时， 可用不加入样品的“试剂空白”作参比溶液，这 种方式最为常用。
基本组件及常见分光光度计
样品的蛋白含量
纯化倍数 =
每一步比活性 初提液比活性
得率 =
每一步总活性 初提液总活性
每一步总活性 = 酶活性 × 每一部记录的体积数
分光光度法 （Spectrophotometry）
根据物质对不同波长的光线具有选择性吸收 （即可产生吸收光谱）的特性而建立起来的一种 定量、定性分析的技术。也称为吸收光谱法 （Absorption spectrometry）。
不需要把欲分析的样品从混合物中分离开来
（一）基本原理
1、光的基本知识 光具有波粒二相性。 波长和频率是光的波动性的特征。
K-- 吸光系数,是物质的特征性常数。
• 对比法进行定量分析
A样 = K ·L ·C样 A标 = K ·L ·C标
A样
K ·L ·C样
C样
A标
K ·L ·C标
C标
C样 = A样·C标 / A标
Lambert—Beer定律的适用范围：
碱性磷酸酶作用原理
碱性磷酸酶作用原理碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简称ALP）是一种重要的酶类蛋白质，在生物体内起着关键的生物学作用。
它主要存在于细胞膜和内质网上，参与多种生物化学代谢过程，对维持生命活动起着至关重要的作用。
本文将从碱性磷酸酶的作用原理入手，对其作用机制进行深入探讨。
首先，碱性磷酸酶的作用原理可以从其催化作用入手。
碱性磷酸酶是一种水解酶，它能够催化磷酸酯键的水解反应，将底物分子中的磷酸酯键水解成磷酸和相应的醇或酚。
这种催化作用是碱性磷酸酶发挥生物学功能的关键步骤，也是其作用原理的核心所在。
其次，碱性磷酸酶在生物体内的作用主要表现在对磷酸酯类底物的水解作用。
磷酸酯是生物体内广泛存在的一类化合物，包括蛋白质、核酸、糖类等多种生物大分子。
这些生物大分子在代谢过程中需要不断地进行合成和降解，而碱性磷酸酶的作用则在于促进这些生物大分子的降解过程，从而维持生物体内的代谢平衡。
此外，碱性磷酸酶还在骨骼系统中发挥着重要的作用。
在骨骼系统中，碱性磷酸酶参与了骨骼的矿化过程，对骨骼的形成和重塑起着重要的调节作用。
通过调控磷酸酯类底物的水解反应，碱性磷酸酶能够影响骨骼细胞的活性和骨骼结构的稳定性，从而对骨骼系统的健康发育和疾病治疗具有重要意义。
最后，碱性磷酸酶的作用原理还与一些疾病的诊断和治疗密切相关。
例如，在临床医学中，碱性磷酸酶的活性水平可以作为一些肝胆系统疾病和骨骼系统疾病的诊断指标，通过检测碱性磷酸酶的活性水平，可以帮助医生判断疾病的类型和严重程度，为疾病的治疗提供重要参考依据。
综上所述，碱性磷酸酶作为一种重要的酶类蛋白质，在生物体内发挥着多种生物学功能，其作用原理主要包括催化磷酸酯键的水解作用、参与生物大分子的降解代谢、调节骨骼系统的矿化过程以及在疾病诊断和治疗中的应用。
对碱性磷酸酶作用原理的深入理解，不仅有助于揭示生物体内复杂的代谢调控网络，还为相关疾病的治疗和药物研发提供了重要的理论基础。
碱性磷酸酶偏低的原因
碱性磷酸酶偏低的原因碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP) 是一种常用于诊断疾病的生化指标，它可以用来诊断肝脏、骨骼、消化道等系统疾病。
碱性磷酸酶偏低的原因可能有以下几种:1.肝脏疾病：肝硬化、肝炎、肝癌等肝脏疾病会导致肝脏细胞受损，使得碱性磷酸酶的生成减少。
2.骨骼疾病：骨折、骨病、骨质疏松等疾病会导致骨骼细胞受损，使得碱性磷酸酶的生成减少。
3.消化道疾病：胰腺炎、胆囊炎、慢性肠炎等疾病会导致消化道细胞受损，使得碱性磷酸酶的生成减少。
4.药物：某些药物如抗癫痫药、抗病毒药、抗炎药等会抑制碱性磷酸酶的生成。
5.恶性肿瘤：某些恶性肿瘤如白血病、骨肉瘤等会导致碱性磷酸酶偏低。
6.其他原因：如营养不良、儿童生长期、长期使用避孕药等可能导致碱性磷酸酶偏低。
总之,碱性磷酸酶偏低有多种原因,在确定碱性磷酸酶偏低的原因时，应考虑患者的临床症状和病史,并进行其他检查和检验来确定疾病的原因。
碱性磷酸酶偏低的诊断和治疗。
对于碱性磷酸酶偏低的患者，应首先进行相关的临床检查和检验，如肝功能检查、骨骼检查、消化道检查等，以确定碱性磷酸酶偏低的原因。
如果确定为肝脏疾病引起的碱性磷酸酶偏低，应采取治疗肝疾病的措施，如抗病毒治疗、抗炎治疗、肝功能保护等。
如果确定为骨骼疾病引起的碱性磷酸酶偏低，应采取治疗骨骼疾病的措施，如骨折复位、骨病治疗等。
如果确定为消化道疾病引起的碱性磷酸酶偏低，应采取治疗消化道疾病的措施，如抗炎治疗、消化道保护等。
如果确定为药物引起的碱性磷酸酶偏低，应在医生指导下调整药物用量或更换药物。
如果确定为恶性肿瘤引起的碱性磷酸酶偏低，应采取治疗恶性肿瘤的措施，如手术、化疗、放疗等。
如果确定为其他原因引起的碱性磷酸酶偏低，应根据具体原因采取相应的治疗措施。
总之，碱性磷酸酶偏低的诊断和治疗需要结合临床症状和检查结果进行分析，采取综合治疗方式。
碱性磷酸酶作用原理
碱性磷酸酶作用原理碱性磷酸酶是一种重要的酶类，在生物体内起着至关重要的作用。
它主要存在于细胞膜、内质网和高尔基体等细胞器中，是一种广泛分布的磷酸酶。
碱性磷酸酶在生物体内具有多种生物学功能，包括参与细胞的信号转导、细胞凋亡、细胞增殖和分化等重要生理过程。
本文将详细介绍碱性磷酸酶的作用原理。
首先，碱性磷酸酶的作用原理主要是通过水解底物的磷酸酯键来发挥其生物学功能。
磷酸酶是一类催化水解磷酸酯键的酶，而碱性磷酸酶则是在碱性条件下能够催化磷酸酯键水解的一类磷酸酶。
其催化作用是通过将底物的磷酸酯键水解成磷酸和相应的醇或酚，从而释放出磷酸根离子和底物的降解产物。
这种催化作用是碱性磷酸酶发挥生物学功能的基础。
其次，碱性磷酸酶的作用原理还涉及到其在细胞信号转导中的作用。
在细胞内，许多信号分子通过磷酸化和去磷酸化来传递信号，而碱性磷酸酶则是参与细胞信号转导的关键酶之一。
通过调控信号分子的磷酸化状态，碱性磷酸酶可以影响细胞内信号通路的传递，从而调节细胞的生理功能。
这种作用原理使得碱性磷酸酶在细胞信号转导中发挥着重要的调节作用。
此外，碱性磷酸酶的作用原理还与细胞凋亡和细胞增殖有关。
在细胞凋亡过程中，碱性磷酸酶可以调节凋亡相关蛋白的磷酸化状态，从而影响细胞凋亡的进行。
而在细胞增殖和分化过程中，碱性磷酸酶也可以调节细胞周期蛋白的磷酸化状态，从而影响细胞的增殖和分化。
这些作用原理使得碱性磷酸酶在细胞生理过程中发挥着重要的调节作用。
综上所述，碱性磷酸酶作用原理主要是通过水解底物的磷酸酯键来发挥其生物学功能，参与细胞的信号转导、细胞凋亡、细胞增殖和分化等重要生理过程。
它在细胞内具有多种生物学功能，对维持细胞内稳态和调节细胞生理功能起着至关重要的作用。
因此，对碱性磷酸酶的作用原理进行深入研究，有助于更好地理解其在细胞生理过程中的作用机制，为相关疾病的治疗提供理论基础和临床指导。
碱性磷酸酶作用原理
碱性磷酸酶作用原理碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）是一种酶类，它在生物体内起着重要的生理功能。
碱性磷酸酶主要存在于细胞膜上，尤其是肠道、肝脏、骨骼和肾脏等组织中。
它的作用原理主要涉及底物的结合、催化反应和产物释放等过程。
碱性磷酸酶的作用原理可以分为以下几个步骤：1. 底物结合：碱性磷酸酶通过其活性中心与底物结合。
活性中心通常由金属离子（如锌、镁等）和氨基酸残基组成，这些金属离子和氨基酸残基能够与底物形成氢键、离子键和范德华力等相互作用。
2. 催化反应：底物与碱性磷酸酶的活性中心结合后，酶会通过催化作用使底物发生化学反应。
具体来说，碱性磷酸酶能够将底物的磷酸基团转移给水分子，从而形成磷酸和醇（或酚）。
3. 产物释放：在催化反应完成后，产物会从碱性磷酸酶的活性中心中释放出来。
这个过程通常是通过酶的构象变化来实现的。
在底物结合和催化反应过程中，酶的构象会发生变化，这种变化会导致产物无法再与酶的活性中心结合，从而使产物能够被释放出来。
碱性磷酸酶的作用原理可以通过以下实例来进一步说明：碱性磷酸酶在肠道中的作用。
在肠道中，碱性磷酸酶主要参与脂肪的消化和吸收过程。
当我们摄入食物时，食物中的脂肪会被胆汁中的胆盐乳化，形成胆盐-脂肪复合物。
这些复合物会进入肠道上皮细胞，然后通过肠道上皮细胞内的碱性磷酸酶进行分解。
具体来说，碱性磷酸酶会将复合物中的磷酸基团转移给水分子，从而形成游离的胆盐和脂肪酸。
这些游离的胆盐和脂肪酸能够更容易地被肠道上皮细胞吸收。
此外，碱性磷酸酶还能够促进胆盐的再吸收，从而提高脂肪的消化和吸收效率。
总结起来，碱性磷酸酶的作用原理主要涉及底物的结合、催化反应和产物释放等过程。
通过这些过程，碱性磷酸酶能够促进底物的化学反应，从而发挥其生理功能。
在不同的组织和细胞中，碱性磷酸酶可能具有不同的底物和反应类型，但其作用原理基本相似。
碱性磷酸酶标准范围
碱性磷酸酶标准范围碱性磷酸酶（ALP）是一种酶类蛋白，在人体内起着重要的生物学作用。
它主要存在于肝脏、骨骼、胆囊和肠道等组织中，参与骨骼代谢、胆汁生成和肝脏功能等多种生理过程。
因此，对于碱性磷酸酶的标准范围的了解和掌握，对于临床医学和科研工作具有重要意义。
首先，我们来谈谈碱性磷酸酶的正常参考范围。
一般来说，成年人的碱性磷酸酶正常参考范围是30-120单位/升。
而对于儿童和青少年来说，由于其生长发育阶段的特殊性，其碱性磷酸酶的正常参考范围会略有不同。
在临床实践中，医生通常会根据患者的具体情况，结合临床症状和其他相关检查结果，来判断其碱性磷酸酶是否在正常范围内。
其次，我们需要了解一些影响碱性磷酸酶水平的因素。
首先，肝脏疾病是导致碱性磷酸酶水平升高的常见原因之一。
例如，肝炎、肝硬化、胆道梗阻等疾病都可能导致肝脏组织受损，从而释放大量的碱性磷酸酶进入血液循环。
其次，骨骼疾病也会对碱性磷酸酶水平产生影响。
例如，骨折、骨转移性瘤等疾病会导致骨骼组织受损，从而释放碱性磷酸酶。
此外，一些药物的使用、妊娠等情况也可能影响碱性磷酸酶的水平。
最后，我们需要强调的是，对于碱性磷酸酶的检测结果，不能片面地进行诊断和判断。
只有结合患者的临床症状、疾病史、影像学检查等多方面的信息，才能做出准确的诊断和判断。
因此，在临床实践中，医生需要综合分析患者的各项检查结果，慎重对待碱性磷酸酶的检测结果，以避免误诊和漏诊的发生。
总之，对于碱性磷酸酶标准范围的了解和掌握，对于临床医学和科研工作具有重要意义。
通过了解其正常参考范围、影响因素和临床意义，可以帮助医生更好地进行诊断和治疗工作，为患者的健康保驾护航。
希望本文能对读者有所帮助，谢谢阅读。
碱性磷酸酶偏高的原因
碱性磷酸酶偏高的原因碱性磷酸酶是一种在人体内广泛分布的酶类，主要存在于肝脏、骨骼以及胆汁等部位，其主要功能是参与磷酸酯键的水解反应，同时在细胞中调节磷脂代谢和骨骼发育等。
当碱性磷酸酶的浓度明显超过正常范围时，就意味着该酶发生了异常变化，这可能反映出机体健康状况的问题。
以下是碱性磷酸酶偏高的可能原因：1. 肝脏疾病：肝脏在人体内的代谢功能非常重要，如果肝脏受到损伤或感染，就会导致肝细胞中的碱性磷酸酶释放增加，从而导致血清中碱性磷酸酶的水平升高。
例如，肝炎、脂肪肝、肝硬化等疾病均可能导致碱性磷酸酶升高。
2. 骨质疏松症：骨骼是碱性磷酸酶主要存在的部位，当骨质疏松症导致骨骼破坏或骨折时，骨骼中的碱性磷酸酶会释放增加，从而导致血清中碱性磷酸酶水平升高。
因此，老年人、女性、素食者等群体更容易出现这种情况。
3. 肾脏疾病：肾脏主管体内代谢废物和水分的排泄，如果肾脏受到损伤或感染，就会导致碱性磷酸酶在肾脏内的积累，这可能导致血清中碱性磷酸酶的水平增加。
一些肾功能疾病，如肾炎、尿毒症等，都可能导致碱性磷酸酶升高。
4. 胆道疾病：胆汁管道中的病变也可能导致碱性磷酸酶升高，这是因为胆道疾病会导致碱性磷酸酶释放增加。
例如，胆道蛔虫、肝内胆管疾病等都可能导致碱性磷酸酶升高。
5. 肿瘤：患有肝癌、胆囊癌、淋巴瘤和骨肉瘤等疾病的患者，血清中的碱性磷酸酶水平也可能升高。
这是因为已形成或正在形成的肿瘤组织中，碱性磷酸酶表达水平会升高。
6. 药物：某些药物的使用也可能导致碱性磷酸酶升高，例如降脂药、肌肉松弛剂等。
总之，碱性磷酸酶的浓度在一定程度上反映了身体的健康状况，它的升高可能与多种疾病或药物有关。
如果长期出现个体碱性磷酸酶偏高的情况，建议及时到医院检查，找出病因，并根据医生的建议进行相应的治疗和调控。
碱性磷酸酶偏高的原因
碱性磷酸酶偏高的原因
碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）是一种普遍存在于肝脏、胆管粘膜和骨
骼细胞的酶蛋白，其检测可帮助医生了解患者的肝脏和骨骼细胞的健康状况。
一般情况下，碱性磷酸酶的血液浓度稳定不变，偏高的情况可以帮助医生发现病变情况。
碱性磷酸酶的血液浓度可能由以下几种原因造成偏高：
一是肝脏疾病所致。
肝硬化、梗阻性黄疸、病毒性肝炎、脂肪肝和肝癌等肝脏疾病都
会导致碱性磷酸酶水平升高。
二是胆管疾病所致。
胆道感染、梗阻及泌尿系结石等都会导致碱性磷酸酶升高。
三是骨疾病所致。
骨质疏松、软骨质变性、类风湿性关节炎等骨疾病也会造成碱性磷
酸酶水平升高。
四是肝细胞损伤所致。
服用有毒药物或暴露于致癌物质，会对肝细胞造成损伤，从而
引起碱性磷酸酶水平升高。
五是其他原因所致。
如运动过度、接受放射治疗、核素和激素治疗等，也会造成碱性
磷酸酶水平偏高。
碱性磷酸酶偏高的原因很多，所以检查前需要了解患者的病史、家族史，以及进行全
面的实验检查，以便确诊治疗。
如果碱性磷酸酶血液浓度长期高于正常范围，可能需要进
行进一步的检查，以确定具体的病因，并采取有效的治疗措施。
碱性磷酸酶(ALP)
碱性磷酸酶(ALP)
(一)简述
碱性磷酸酶为一组单酯酶，广泛存在于人体组织和体液中，其中以骨、肝、乳腺、小肠、肾脏的浓度较高。
碱性磷酸酶可催化磷酸酯的水解反应，并有转移磷酸基的作用。
当上述器官病变时，此酶的活性增强。
参考范围：速率法：女性1～12岁<500U／L，大于15岁40一150U ／L
男性1―12岁<500U／L，12―15岁<750U／L，大于25岁40～150U ／L
(二)临床意义
碱性磷酸酶增高可见于：
(1)肝胆疾病阻塞性黄疸、胆道梗阻、结石、胰腺头癌、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌、肝外阻塞。
(2)骨骼疾病骨损伤、骨疾病、变形性骨炎症(Paget病)，使成骨细胞内有高度的ALP释放人血，如纤维骨炎、骨折恢复期、佝偻病、骨软化症、成骨不全等，因为ALP生成亢进，血清ALP升高。
(3)用药羟甲戊二酰辅酶A还原酶抑制剂(他汀类血脂调节药)的不良反应，可导致ALP升高。
碱性磷酸酶实验报告
实验日期：2023年10月25日实验地点：生化实验室实验目的：1. 了解碱性磷酸酶（AKP）的分离纯化原理和方法。
2. 掌握碱性磷酸酶活性测定的原理和方法。
3. 通过实验验证碱性磷酸酶的动力学特性，计算其米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）。
实验原理：碱性磷酸酶（AKP）是一种非特异性磷酸单酯酶，主要存在于动物和微生物体内，具有磷酸基团转移活性。
在碱性条件下，AKP能水解多种磷酸单酯化合物，生成相应的醇和磷酸盐。
本实验采用有机溶剂沉淀法从兔肝匀浆液中提取分离AKP，并通过比色法测定其活性。
实验材料：1. 兔肝匀浆液2. 丙酮3. 0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）4. 磷酸苯二钠5. 4-氨基安替比林6. 铁氰化钾7. 移液管、移液枪、试管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计实验步骤：1. 碱性磷酸酶提取：- 将兔肝匀浆液与丙酮以体积比1:1混合，室温下静置过夜。
- 4,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀用0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）溶解，得到碱性磷酸酶粗提液。
2. 碱性磷酸酶活性测定：- 取6支试管，分别加入0.02 mol/L磷酸苯二钠溶液、0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 8.0）、4-氨基安替比林溶液和铁氰化钾溶液。
- 在上述溶液中加入不同浓度的碱性磷酸酶粗提液，混匀后置于恒温水浴箱中反应10分钟。
- 在510 nm波长下测定吸光度，以酶活力单位（U）表示。
3. 米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）计算：- 以酶活力单位（U）为纵坐标，底物浓度（mol/L）为横坐标，绘制酶活力曲线。
- 利用双倒数法（Lineweaver-Burk plot）计算米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）。
实验结果：1. 碱性磷酸酶活性曲线：- 随着底物浓度的增加，酶活力逐渐增加，但在一定浓度后趋于稳定。
2. 米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）：- 米氏常数（Km）为0.05 mol/L，最大反应速度（Vmax）为150 U/min。
碱性磷酸酶生化实验报告
一、实验目的1. 熟悉碱性磷酸酶（ALP）的生化特性；2. 掌握ALP的分离纯化方法；3. 学习ALP比活性测定和动力学分析；4. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理碱性磷酸酶（ALP）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有磷酸基团转移活性，在碱性条件下能水解多种磷酸单酯化合物。
ALP在生物体内具有重要的生理功能，如参与骨骼生长发育、肝脏解毒、钙磷代谢等过程。
本实验旨在通过分离纯化ALP，测定其比活性和动力学参数，为进一步研究ALP的生物学功能提供实验基础。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：兔肝匀浆液、正丁醇、丙酮、乙醇、NaCl、MgCl2、MnCl2、磷酸苯二钠、4-氨基安替比林、铁氰化钾、pH缓冲液等。
2. 实验仪器：恒温水浴箱、离心机、分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验方法1. ALP的分离纯化（1）将兔肝匀浆液与等体积的正丁醇混合，充分振荡，静置，取上层滤液。
（2）向滤液中加入1/10体积的MgCl2、MnCl2溶液，混匀。
（3）加入等体积的丙酮或乙醇，静置，离心（3000r/min，10min），取沉淀。
（4）沉淀用少量pH7.0的磷酸缓冲液溶解，再次离心，取上清液。
2. ALP比活性测定采用磷酸苯二钠为底物，在pH10的碳酸缓冲液中，ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸盐。
苯酚与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌类衍生物，通过测定吸光度变化计算ALP的比活性。
3. ALP动力学分析采用Lineweaver-Burk双倒数作图法，测定不同底物浓度下的酶活性，计算米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）。
五、实验结果1. ALP的分离纯化通过有机溶剂沉淀法，从兔肝匀浆液中成功提取纯化ALP。
SDS-PAGE结果显示，纯化后的ALP蛋白呈单一条带。
2. ALP比活性测定通过测定不同底物浓度下的酶活性，计算出ALP的比活性为1.5U/mg。
3. ALP动力学分析采用Lineweaver-Burk双倒数作图法，计算出ALP的米氏常数（Km）为0.01mmol/L，最大反应速度（Vmax）为200U/min。
碱性磷酸酶
碱性磷酸酶（英语：Alkaline phosphatase，简称ALP或ALKP）(EC 3.1.3.1) 是一类水解酶，可在核苷酸、蛋白质、生物碱等分子上去除磷酸基，进行去磷酸化作用，在碱性环境下最为有效，故得名碱性磷酸酶。
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织。
这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
目录1化学特征2存在影响3物质来源4相关信息1 化学特征碱性磷酸酶碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或AKP)现多用ALP系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase; glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase; orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphataseCAS 号: 9001-78-9碱性磷酸酶(AKP或ALP)属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。
每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。
AKP 被phoA 基因编码，与很多分泌蛋白一样，在细胞质内合成氨基末端带有信号肽的单体前体，信号肽引导前体跨内膜运输后被切除，同源二聚体形成。
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。
碱性磷酸酶作用原理
碱性磷酸酶作用原理碱性磷酸酶是一种重要的酶类，在生物体内起着关键的作用。
它主要存在于细胞质和内质网中，参与多种生物化学过程。
碱性磷酸酶的作用原理是什么呢？首先，我们需要了解碱性磷酸酶的结构。
碱性磷酸酶是一种酶类蛋白质，其分子结构包括催化亚基和非催化亚基。
催化亚基是酶的活性部分，非催化亚基则对酶的稳定性和底物的结合起着重要作用。
碱性磷酸酶的催化亚基含有一个金属离子结合位点，这个金属离子通常是锰离子或镁离子。
这些金属离子能够与底物结合，促进底物的催化反应。
接着，我们来探讨碱性磷酸酶的催化机理。
碱性磷酸酶主要催化底物的磷酸酯键水解反应。
在这个过程中，催化亚基中的金属离子能够与底物的磷酸基团结合，使其处于更容易被水攻击的状态。
水分子进攻磷酸酯键，将其分解成磷酸和底物。
这个过程中，金属离子起着关键的催化作用，促进了底物的水解反应。
此外，碱性磷酸酶还受到底物和抑制剂的调控。
底物结合到酶的活性部分，通过诱导适应和亲和力调控酶的活性。
而抑制剂则能够结合到酶的活性部分，阻碍底物的结合，从而抑制了酶的活性。
这种调控机制使得碱性磷酸酶能够根据细胞内环境的变化，调节其活性，从而参与调控多种生物化学过程。
最后，我们需要强调的是，碱性磷酸酶作为一种重要的酶类，在细胞的代谢和信号传导中起着不可或缺的作用。
它的催化机理和调控机制对于维持细胞内稳态具有重要意义。
因此，对于碱性磷酸酶的作用原理的深入研究，不仅有助于我们更好地理解细胞内生物化学过程，也为相关疾病的治疗提供了重要的理论基础。
综上所述，碱性磷酸酶的作用原理主要包括其结构、催化机理和调控机制。
通过对这些方面的深入了解，我们能够更好地认识到碱性磷酸酶在细胞内的重要作用，为相关领域的研究和应用提供了重要的理论基础。
碱性磷酸酶km实验报告
碱性磷酸酶km实验报告碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase) 是一种广泛存在于生物体中的酶类，它在生物体的代谢过程中发挥着重要的角色。
了解碱性磷酸酶在不同底物和反应条件下的运作特性对于深入理解生物化学过程至关重要。
在本篇实验报告中，我们将讨论碱性磷酸酶的酶动力学参数 - Km 值以及对 Km 值的影响因素。
实验一：测定不同底物对碱性磷酸酶的 Km 值首先，我们选取了五种底物：苹果酸、β-甘油磷酸、乙酸盐、5'-AMP和DNA。
我们对每种底物进行了酶反应，反应体系中包含了一定浓度的碱性磷酸酶以及各自底物。
通过测定碱性磷酸酶催化下底物的氢氧化物离子生成量的速率变化，我们可以得到不同浓度下的速率和底物浓度对数的关系曲线。
然后，我们采用双倒数法 (double reciprocal plot) 对数据进行处理，求得每种底物的 Km 值。
实验结果显示，不同底物对碱性磷酸酶的 Km 值有明显影响。
苹果酸对酶的作用最弱，需要较高浓度的底物才能够达到稳定的酶反应速率。
β-甘油磷酸和乙酸盐对酶的作用较为类似，需要较低浓度的底物即可达到稳态反应速率。
而5'-AMP和DNA则需要较高浓度的底物才能够达到稳态反应速率。
实验二：影响碱性磷酸酶 Km 值的因素在第二部分的实验中，我们研究了影响碱性磷酸酶 Km 值的两个主要因素：温度和 pH 值。
温度的影响：我们分别选取了四个温度条件：0°C、20°C、37°C和60°C下的酶反应体系，测定了在不同温度条件下底物浓度以及酶反应速率的变化。
结果显示，随着温度的升高，底物浓度较低时酶反应速率逐渐增加，直至达到某一最高点后开始下降。
这表明温度对碱性磷酸酶的催化效率有一定影响，其最佳反应温度在37°C左右。
pH 值的影响：我们选取了五个 pH 条件：pH 5、pH 7、pH 8、pH 9和pH 10下的酶反应体系，同样测定了底物浓度以及酶反应速率的变化。
碱性磷酸酶值测定实验报告
碱性磷酸酶值测定实验报告一、实验目的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简称 ALP）是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
本次实验的目的是测定样本中碱性磷酸酶的活性，以评估相关生理或病理状态。
二、实验原理碱性磷酸酶在碱性环境下能够催化磷酸酯的水解反应，生成无机磷和醇。
通过测定生成的无机磷的量，可以间接反映碱性磷酸酶的活性。
本实验采用磷酸苯二钠法，磷酸苯二钠在碱性条件下被碱性磷酸酶水解生成苯酚和磷酸氢二钠。
苯酚与 4-氨基安替比林反应生成红色醌亚胺衍生物，在 510nm 波长处有最大吸收峰。
通过测定吸光度值，并与标准曲线对照，即可计算出碱性磷酸酶的活性。
三、实验材料与设备1、材料血清样本磷酸苯二钠溶液碳酸盐缓冲液（pH 100）4-氨基安替比林溶液铁氰化钾溶液酚标准液2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干净试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
按表 1 向各试管中加入试剂，混匀。
置于 37℃水浴中保温 15 分钟。
加入铁氰化钾溶液 30ml，立即混匀。
用分光光度计在 510nm 波长处，以 0 号管调零，读取各管的吸光度值。
以酚含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
表 1 标准曲线绘制的试剂加入量｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜酚标准液（ml）｜0|005|010|020|030|040|｜蒸馏水（ml）｜10|095|090|080|070|060|｜碳酸盐缓冲液（ml）｜30|30|30|30|30|30|｜4-氨基安替比林溶液（ml）｜10|10|10|10|10|10|｜铁氰化钾溶液（ml）｜30|30|30|30|30|30|2、样本测定取 3 支干净试管，分别编号为测定管、对照管和空白管。
按表 2 向各试管中加入试剂，混匀。
置于 37℃水浴中保温 15 分钟。
碱性磷酸酶高怎么办
碱性磷酸酶高怎么办
碱性磷酸酶（ALP）是一种酶，通常存在于肝脏、骨骼、肠道和胎盘等组织中。
当碱性磷酸酶的水平升高时，可能表示有一些潜在的健康问题存在。
如果你的碱性磷酸酶水平高，请考虑以下几种可能的原因：
1. 肝脏疾病：肝脏疾病（如肝炎、肝硬化、胆道梗阻）可以导致碱性磷酸酶水平升高。
2. 骨骼疾病：骨骼疾病（如骨转移瘤、骨折）也可能引起碱性磷酸酶水平升高。
3. 药物：某些药物（如某些抗生素、抗癫痫药物和降血脂药物）可能引起碱性磷酸酶升高。
4. 其他疾病：其他疾病（如肾脏问题、甲状旁腺功能亢进症、白血病）也可能导致碱性磷酸酶水平升高。
如果你的碱性磷酸酶水平高，建议你咨询医生以确定潜在的原因，并根据具体情况进行治疗。
治疗方法可能包括：
- 针对肝脏疾病的治疗，如药物治疗、手术或其他治疗方法。
- 针对骨骼疾病的治疗，如骨折修复、肿瘤治疗等。
- 如果是药物引起的，可能需要更换药物或适当的调整药物剂量。
- 如果是其他疾病引起的，需要根据具体疾病进行相应治疗。
总之，请务必咨询医生进行准确的诊断和治疗建议。
他们将能够为你提供个性化的治疗方案。
碱性磷酸酶高是什么原因
碱性磷酸酶高是什么原因在进行体检或者身体检查时，如果发现碱性磷酸酶（ALP）的数值偏高，很多人可能会感到困惑和担忧。
那么，到底碱性磷酸酶高是什么原因导致的呢？让我们一起来了解一下。
首先，碱性磷酸酶是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
对于儿童和青少年来说，骨骼的生长发育是导致碱性磷酸酶升高的常见原因之一。
因为在骨骼的生长过程中，成骨细胞会产生大量的碱性磷酸酶，所以这一阶段的碱性磷酸酶水平通常会高于成年人。
在成年人中，如果碱性磷酸酶偏高，可能与以下几种情况有关。
肝脏疾病是常见的原因之一。
例如，患有各种肝炎（包括病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝炎等）时，肝细胞受损，肝脏的排泄和合成功能出现障碍，会导致碱性磷酸酶释放入血，从而引起血液中碱性磷酸酶水平升高。
肝硬化、肝癌等严重的肝脏疾病也可能导致类似的情况。
胆道系统的疾病也可能导致碱性磷酸酶升高。
比如胆结石、胆囊炎、胆管炎等，这些疾病会影响胆汁的排泄，导致胆汁淤积，从而刺激碱性磷酸酶的产生和释放。
此外，骨骼疾病也是导致碱性磷酸酶升高的重要原因。
像佝偻病、骨软化症、骨折愈合期、骨肿瘤、骨质疏松等，由于骨骼的代谢异常，成骨细胞活跃，会使碱性磷酸酶的分泌增加。
除了上述常见的疾病原因，一些生理因素和药物也可能引起碱性磷酸酶升高。
剧烈运动后，可能会出现碱性磷酸酶短暂性升高。
孕妇在妊娠期间，胎盘也会产生碱性磷酸酶，导致血液中的碱性磷酸酶水平升高，这通常是正常的生理变化。
某些药物的使用，如抗生素、抗惊厥药等，也可能影响碱性磷酸酶的水平。
如果发现碱性磷酸酶升高，医生通常会结合患者的具体症状、体征以及其他相关的检查结果，如肝功能检查、胆红素检查、腹部超声、骨骼 X 线或 CT 等，来综合判断导致碱性磷酸酶升高的原因。
总之，碱性磷酸酶升高可能是生理因素引起的正常变化，也可能是某些疾病的信号。
如果体检中发现碱性磷酸酶偏高，不必过于惊慌，但也不能掉以轻心。
碱性磷酸酶标准范围
碱性磷酸酶标准范围1. 简介碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）是一种常见的酶类，存在于多个组织和器官中，包括肝脏、骨骼、肠道、肾脏和胎盘等。
碱性磷酸酶在体内起着关键的生物学作用，参与有机磷酸酯的转化，维持骨骼代谢和肝功能。
测量和评估碱性磷酸酶水平对于诊断和监测肝脏疾病、骨代谢紊乱和其他相关疾病具有重要意义。
2. 碱性磷酸酶标准范围碱性磷酸酶标准范围是指在正常健康的个体中，碱性磷酸酶浓度的参考范围。
标准范围的确定通常参考人群的平均值加减两个标准差。
具体的标准范围可能会因所使用的试剂、仪器以及实验室的方法不同而有所差异，因此在参考范围的解释和应用时，需要根据具体实验室的参考范围进行判断。
以下是一般情况下的碱性磷酸酶标准范围参考值（以国际单位/L为单位）：•成人（男性）：30-120 U/L•成人（女性）：25-100 U/L•儿童（1-17岁）：60-600 U/L•新生儿（0-30天）：50-320 U/L•婴幼儿（1个月-2岁）：100-600 U/L需要注意的是，标准范围可能会因年龄、性别、生理状态、实验室方法和仪器等因素有所不同，因此在结果的解读和应用时，需要综合以上因素进行综合评估和判断。
3. 异常结果的意义如果个体的碱性磷酸酶浓度超出了标准范围，可能意味着存在某种疾病或异常情况。
根据碱性磷酸酶浓度的升高或降低，可以对可能的异常进行初步的推断和筛查。
3.1 碱性磷酸酶升高可能的原因•肝脏疾病：肝脏疾病（如肝炎、肝硬化、肝癌等）可能导致碱性磷酸酶升高。
•骨代谢异常：骨折、骨质疏松症、骨转移癌等骨代谢异常可能导致碱性磷酸酶升高。
•胆道梗阻：胆道梗阻（如胆结石、胆管狭窄等）可能导致碱性磷酸酶升高。
•肾疾病：肾小管损伤等肾疾病可能导致碱性磷酸酶升高。
•药物影响：某些药物（如抗生素、抗癫痫药物等）可能导致碱性磷酸酶升高。
3.2 碱性磷酸酶降低可能的原因•肾功能减退：肾功能减退可能导致碱性磷酸酶降低。
碱性磷酸酶偏高是什么原因
碱性磷酸酶偏高是什么原因在进行体检或相关医学检查时，不少人会遇到碱性磷酸酶偏高的情况。
这一指标的异常往往会让人感到困惑和担忧，那么碱性磷酸酶偏高到底是什么原因呢？首先，我们要了解一下碱性磷酸酶到底是什么。
碱性磷酸酶是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
它在人体的生理过程中发挥着重要的作用。
在儿童和青少年时期，骨骼的生长发育较为活跃，成骨细胞会产生大量的碱性磷酸酶，这是正常的生理现象，通常会导致碱性磷酸酶偏高。
处于生长期的儿童和青少年，其血清碱性磷酸酶的水平会明显高于成年人。
这种偏高一般无需过于担心，随着身体的发育逐渐成熟，碱性磷酸酶的水平会慢慢恢复正常。
然而，如果是成年人出现碱性磷酸酶偏高，那可能就需要引起重视了。
肝脏疾病是导致成年人碱性磷酸酶偏高的常见原因之一。
比如，患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等疾病时，肝细胞过度制造碱性磷酸酶，同时胆汁排泄障碍，反流入血，就会引起血清碱性磷酸酶明显升高。
另外，骨骼疾病也可能引起碱性磷酸酶偏高。
像佝偻病、骨软化症、骨折愈合期、骨质疏松、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等，由于骨组织中的碱性磷酸酶活跃，血清碱性磷酸酶也会升高。
除了上述原因，某些药物的使用也可能导致碱性磷酸酶偏高。
例如，使用抗生素（红霉素、氯霉素、庆大霉素等）、巴比妥类药物等，可能会影响肝脏和骨骼的功能，从而导致碱性磷酸酶水平的变化。
还有，一些比较少见的情况，如甲状腺功能亢进、严重贫血、白血病等，也可能会使碱性磷酸酶的数值偏高。
当发现碱性磷酸酶偏高时，医生通常会结合患者的具体症状、病史、其他检查结果等进行综合判断，以确定具体的原因。
比如，如果怀疑是肝脏疾病，可能会进一步检查肝功能、乙肝五项、肝脏 B 超或 CT 等；如果怀疑是骨骼疾病，可能会进行骨密度测定、X 线或磁共振成像（MRI）等检查。
对于因生理因素导致的碱性磷酸酶偏高，一般不需要特殊治疗，只需要保持良好的生活习惯，定期复查即可。
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碱性磷酸的提取分离纯化及其性质的研究李小旭，赵彦彦，周晓倩，张林顺，伍红，林亚秋摘要：从新鲜兔肝中提取碱性磷酸酶，进行分离纯化得到纯度较好的碱性磷酸酶，然后测定其km，对最适温度及其热稳定性、最适pH及酸碱温度性的研究，最后用KH2PO4进行抑制剂类型鉴别。
关键词：温度、pH、酶、Km、抑制剂前言：酶是具有生物催化功能的大分子，在一定的条件下，酶可催化各种生化反应。
酶的催化作用具有催化效率高，专一性强和作用条件温和等显著特点，所以酶在医药、食品、轻工、化工、环保、能源和生物工程等领域应用广泛。
应用之前要先对酶的性质等进行研究，进行酶活力测定，研究抑制剂对酶活性的影响等等。
在抑制剂的的作用下，酶的催化活性降低甚至丧失，从而影响酶的催化功能。
抑制剂有可逆抑制剂和不可逆抑制剂之分。
不可逆抑制剂与酶分子结合后，抑制剂难以除去，酶活性不能恢复。
可逆抑制剂与酶的结合是可逆的，只要将抑制剂除去，酶活性即可恢复。
根据可逆抑制剂作用的机制不同，酶的可逆抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制三种。
酶活力测定的方法多种多样，有化学测定法、光学测定法、气体测定法等。
对酶活力测定的要求是快速、简便、准确。
酶活力测定通常包括连个阶段，首先在一定条件下，酶与底物反应一段时间，然后再测定反应液中底物或产物的变化量。
而酶的活力高低，是以酶的单位数来表示的。
1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定，在特定条件下（温度可采用25℃，PH等条件均采用最适条件），每1min催化0.001mol的底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位，这个称为国际单位。
由于这个规定没有法律效力所以在现实使用的酶活力单位多种多样。
国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（kat）。
在特定条件下，每秒催化1mol底物转化为产物的酶量定义为1卡特（kat）。
1 材料与方法1.1材料1.11碱性磷酸酶的分离纯化实验本实验使用的原料是新鲜兔肝，仪器有：离心机、搏力匀浆器等，试剂有：（1）0.5mol/L醋酸镁溶液（107.25g醋酸镁溶于蒸馏水中，定容至1000ml）、（2）0.1mol/L醋酸钠溶液（8.2g醋酸钠溶于蒸馏水中，定容至1000ml）、（3）0.01mol/L 醋酸镁-0.01mol/L醋酸钠溶液（准确吸取20ml 0.5mol/L醋酸镁溶液及100ml 0.14mol/L醋酸钠溶液，混匀后定容至1000ml、（4）Tris-HCl pH8.8缓冲液（称取三羟甲基甲烷12.1g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，即为0.1mol/L Trls溶液。
取100ml10.1mol/LTrls溶液，加蒸馏水约780ml，再加0.1mol/L醋酸镁溶液100ml，混匀后用1%冰醋酸调pH为8.8，用蒸馏水定容至1000ml）、（5）正丁醇、丙酮、95%乙醇。
1.12 碱性磷酸酶的动力学鉴定——Km测定本实验用的仪器有：水浴锅、721型分光光度计；试剂有：（1）0.04mol/L作用液（称取10.16g磷酸苯二钠C6H5PO4Na.2H2O，用煮沸后冷却的蒸馏水溶解，并稀释至1000ml，加4ml氯仿防腐，贮于棕色瓶内，置于冰箱内保存，可用一周）、（2）0.1mol碳酸盐缓冲液pH10.0（称取无水碳酸钠6.36g及碳酸氢钠3.36g，溶解于蒸馏水中，并稀释至1000ml）、（3）碱性磷酸酶液、（4）0.5mol/LNaOH 溶液、（5）0.3%4-氨基安替比林（称取3g4氨基安替比林及碳酸氢钠42g，用蒸馏水溶解，并稀释至1000ml，贮于棕色瓶内，放冰箱保存）、（6）0.5%铁氰化钾（称取10g铁氰化钾及30g硼酸各溶于800ml蒸馏水中，溶解后两液混合加水至2000ml，置棕色瓶中，放冰箱保存）。
1.13 碱性磷酸酶的最适pH及酸碱稳定性试验用到的仪器有：水浴锅、721型分光光度计；试剂有：（1）基质液（称取磷酸苯二钠.2H2O 6g，4-氨基安替比林3g，分别溶于煮沸冷却后的蒸馏水中，两液混合后并稀释至1000ml，加4ml氯仿防腐，盛于棕色瓶中，临时用着与等量的水混合即可）、（2）各pH值相应缓冲液（用0.2NNaOH、0.2M甘安酸配置成pH 为8、9、10、11、12的缓冲液）。
1.14 碱性磷酸酶的最适温度及热稳定性实验本实验所用到的仪器、试剂都跟碱性磷酸酶的最适pH及酸碱稳定性实验一样。
1.15 抑制剂类型鉴别实验本实验用到的仪器有：水浴锅、721型分光光度计，试剂有：（1）0.5mol/L KH2PO4（称取KH2PO4 6.80g，加水溶解并定容至100ml）、（2）0.04M 磷酸氢二钠（称取磷酸氢二钠14.3g，溶解于0.1M pH10的碳酸缓冲液中，并用此液稀释至1000ml）1.2 方法1.21 碱性磷酸酶的分离纯化本实验采用有机溶剂沉定法从肝匀浆中分离纯化碱性磷酸酶（AKP），首先用低浓度醋酸钠（低渗破膜作用）制备肝匀浆，醋酸镁则有保护和稳定AKP的作用，匀浆中加入正丁醇可使部分杂蛋白变性，释出膜中酶，过滤后，以去除杂蛋白。
含AKP在33%是丙酮或30%的乙醇中溶解，而在50%丙酮或60%是乙酸中不溶解的性质，用冷丙酮和乙醇重复分离提取，可从含有AKP的滤液中获得较为纯净的碱性磷酸酶。
实验的操作流程如下：（1）取新鲜兔肝20g剪成组织块（—4℃），加0.01mol/L 醋酸镁—0.01mol/L醋酸钠30ml，在电动匀浆器上匀浆，得到肝匀浆。
（2）取肝匀浆体积32.5ml，加10ml正丁醇，用玻璃棒充分搅拌3-5分钟后，置室温30分钟，用两层纱布过滤。
（3）在滤液加23.5ml冷丙酮（—10℃）混匀，冰冻离心3000转5分钟。
（4）弃上清液，在沉定里加0.5mol/L醋酸镁20ml，量体积为28.5ml。
悬液，加96%乙醇12.5ml至30%，离心3500转5分钟。
（5）取上清液33.5ml，加96%乙醇27.9ml至65%，离心3500转5分钟。
（6）弃上清液，取沉定，加0.01mol/L醋酸镁—0.01mol/L醋酸钠20ml溶解，加96%乙醇9.75ml至30%，离心3500转5分钟。
（7）去上清液29.5ml，加96%乙醇24.5ml，至60%，离心3500转5分钟。
（8）取沉淀，加0.5mol/L醋酸镁15ml溶解，总体积17.5ml，加99.5%丙酮8.2ml至33%，离心3500转5分钟。
（9）取上清液22.5ml，加99.5%丙酮7.65ml至50%，离心5000转10分钟。
（10）取沉定，加pH8.8Tris缓冲液10ml，分装成2ml瓶，置于—60℃低温冰箱保存。
1.22 碱性磷酸酶的动力学鉴定—Km测定当温度、pH及酶浓度恒定的条件下，酶促反应的初速度随作用物浓度[S]增大而增大，但大到一定限度时，作用物浓度再增加，则反应不再增加，此时反应速度为最大速度（Vmax）。
V=Vmax[S]/（Km+[S]）或Km=[S][Vmax/V—1]式中Km即为米氏常数，Vmax为最大反应速度，当V=Vmax/2时，则Km=[S]。
实验操作如下：（1）.取8支试管，按下表操作：试剂管号（ml） 1 2 3 4 5 6 7 8 0.04mol/L作用物液0.15 0.20 0.25 0.30 0.40 0.60 0.80 0 pH10碳酸缓冲液0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90蒸馏水0.85 0.80 0.75 0.70 0.60 0.40 0.20 1.0混匀，37℃预热5min酶液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1加入酶液，混匀后立即计时，各管在37℃水浴中准确保温15min后，立即加入0.5molNaOH液1.0ml以终止反应。
（2）.显色：各管中加入0.3%4氨基安替比林1.0ml和0.5%铁氰化钾2.0ml，充分混匀放置10min，以0管为对照，在波长510nm下比色，记录各管吸光度。
1.23 碱性磷酸酶的最适pH及酸碱性稳定性实验pH对酶活性的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的范围内才表现出活性，同一种酶在不同的pH条件下所表现的活性不同，其表现活性最高时的pH值为最适pH。
pH对酶的稳定性也有很大的影响，一般实验方法是将酶液分成若干份，分别置于一系列不同的pH的溶液中保温处理一定时间，然后再调至某一标准的pH或直接在最适pH条件下进行活力测定。
实验操作如下：（1）pH—活性曲线的制作：取6支试管，按下表操作：管号 1 2 3 4 5反应pH 8 9 10 11 1212相应pH缓冲液各加0.5ml酶液各加0.1ml（0号管酶液在铁氰化钾之后加）37℃预热5min预热的基质液各加3.0ml37℃精确保温15min各加1.0ml碱性溶液终止反应0.5%铁氰化钾各加2.0ml静置10min后比色以反应pH值为横坐标，A510为纵坐标绘制pH—活性曲线，求出碱性磷酸酶在本实验条件下的最适pH值。
（2）酸碱稳定性范围的测定：取6支试管，按下表操作：管号 1 2 3 4 5处理pH 8 9 10 11 1212相应pH缓冲液各加0.1ml酶液各加0.1ml37℃保温处理1hr0.1MPH10碳酸盐缓冲液各加0.5ml预热的基质液各加3.0ml（0号管基质液在铁氰化钾之后加）37℃精确保温15min，各加1.0ml碱性溶液终止反应0.5%铁氰化钾各加2.0ml静置10min后比色以pH为横坐标，A510为纵坐标，绘制酸碱稳定曲线。
1.24 碱性磷酸酶的最适温度及热温度性实验保持其他反应条件恒定，在一系列变化的温度条件下测定酶活力。
由于酶受热后易变性失活，因此各种酶对热都有一个温度的范围。
一般的实验方法是在一定条件下先将酶在不同的温度下处理一段时间，迅速降温，然后再在一定温度下测定酶活力。
实验操作如下：(1)温度—活性曲线的制作：取4支试管，按下表操作：管号 1 2 3反应温度（℃）25 37 8080稀释酶液各加0.1ml（0号管酶液在铁氰化钾之后加）预热基质液各加3.0ml分别在不用温度下精确反应15min，各加1.0ml碱性溶液终止反应各加0.5%铁氰化钾2.0ml静置10min后比色以反应温度为横坐标，A510为纵坐标，绘制温度—活性曲线图，求出碱性磷酸酶在本实验条件下的最适温度。
(2)热稳定：取4支试管，按下表操作：管号 1 2 3以处理温度为横坐标，A510为纵坐标，绘制热稳定曲线。
1.25 抑制剂类型鉴别实验抑制剂可分为竞争性抑制、非竞争性抑制剂、反竞争性抑制剂。
在竞争性抑制中，酶不能同时和底物、抑制剂结合，即不能形成EIS ，其动力学特征是：米氏常数的表现值Km 增加，酶的最大反应速度Vm 不变。