一种建立肝细胞癌顺铂耐药细胞株的方法

一种建立肝细胞癌顺铂耐药细胞株的方法

2016-11-21 13:33来源：内江洛伯尔材料科技有限公司作者：研发部

一种建立肝细胞癌顺铂耐药细胞株的方法原发性肝癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在恶性肿瘤中排名第六，死亡率则居第三，且大多数肝癌患者诊断时已是中晚期，术后频频复发转移，导致肝癌患者的预后较差。化疗是治疗肝癌的重要手段之一，但化疗中常出现且难以解决的是肿瘤多药耐药性（multidrugresistance,MDR)，即肿瘤同时对多种结构和作用机制不同的化学药物产生交叉耐药，它是化疗失败的主要原因。因此克服肿瘤多药耐药性以及防止或逆转肿瘤多药耐药的发生对于提高化疗效果十分重要。而建立肿瘤耐药细胞株对于研究肿瘤耐药机制、肿瘤细胞耐药性逆转、开发及评价新药等具有重要的应用价值。

顺铂（cis-diaminedichloroplatinum，Q)DP)属细胞周期非特异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞的DNA复制过程，并损伤其细胞膜上结构，有较强的广谱抗癌作用，为临床治疗肝癌常用药物。

本发明提供一种建立肝细胞癌顺铂耐药细胞株的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、取人肝癌细胞LM3细胞复苏后用DMEM培养液，于培养箱中培养；步骤二、取对数生长期LM3细胞种于24孔板中，分别加入0.1μmol/L、0.25μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L顺铂，适时传代或换夜。以顺铂加入后细胞可以保持长期生长的最大浓度为最佳浓度。步骤三、寻找到最佳浓度为0.5μmol/L，后用最佳浓度长期刺激细胞4个月，得到肝细胞癌顺铂耐药细胞株。本发明得到的肝细胞癌顺铂耐药细胞株可用于发现肿瘤耐药标志物以及筛选和评估新型抗肿瘤药物等。