交叉配血知识讲座.ppt

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1.盐 水法
盐水介质中红细胞上的抗原决定族与相应抗体 分子上的抗原结合位点结合，交叉连接形成肉 眼可见的凝集块。盐水介质凝集试验用于IgM 抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以及用盐水 抗体鉴定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系 统的抗原。在盐水介质中，凝集是IgM抗体的 行为。当ＩｇＧ抗A、抗B的浓度足够大时，在 盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应
（1）另从受检者采取1份新鲜血
液标本，这样
可以纠正因污染或搞错标本造成
（2）将红的细不胞符洗合涤。数次，配成5%
盐水细胞悬
液，用抗A、抗B、抗A+B做实
验，可以得到其他有用的信息。有
条件的可加做抗H试验。
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（3）对受检者作直接抗人球蛋白试验，看红细胞有没 有被致敏
（4）如疑为A抗原或B抗原减弱，可将受检红细胞与抗 A或抗B血清作吸收放散试验
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正反 定型 不一 致的 原因
■（2）标准血清效价太低、亲和力不强。 如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型， AB型误定为B型。
■（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体 比例不适当，使反应不明显，误判为阴性 反应。
■（4）血清异常 华通胶或血清蛋白异 常引起串钱状形成，影响反定性结果。
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4. 抗体筛选和交叉配血试验结果分析
① 抗筛阴性，交叉配血相容 ② 抗筛阴性，盐水直接离心交叉配血不相容原因有： 献血者红细胞是ABO血型不相容 存在在室温反应的同种异体抗体 献血者的红细胞是多凝集红细胞
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③ 抗筛阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相 容
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2%的红细胞悬液一般用于抗体效价的测定
2. 红 细胞悬 液的常 用浓度
5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配 血试验、及抗球蛋白试验等大多数血型血 清学试验
10%的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲 和力试验
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3.离心力的标准
4.离心后结果观 察注意事项
不同规格离心机，力矩不同，统 一离心转速，但没有统一离心力。
离心转速换算公式：RCF = 1.118 × 10-5 × (rpm) 2× R (cm)
将试管成30-45℃角拿在手上， 细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液 体去冲细胞扣，如果为阴性，则细 胞成细沙状沿试管壁流下，如果为 阳性，细胞成块状脱落细胞壁或成 齿状沿试管壁留下。切不可用力使 劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散， 弱凝集则会误判为阴性。
■（5）红细胞致敏 在含高蛋白介质的试 剂中可发生凝集，产生假阳性结果。
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■（6）近期曾异型输血，使病人血液标本成为不 同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合 外观凝集”现象。
■（7）疾病因素导致抗原减弱 某些白血病病人 ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。
■（8）红细胞多凝集现象 红细胞因遗传或获 得性的表面异常，发生多凝集现象。
献血者红细胞DAT试验为阳性 受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性 抗体与低频率抗原反应
④ 抗筛阳性，交叉配血相容 自身抗-H 抗-Lebh 抗筛阳性，但献血者红细胞可能正好不含与相应的
抗原，因此配血可以相合。
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⑤ 抗筛阳性，交叉配血不相容 同种异体抗体存在，自身对照成阴性 同种异体抗体存在，自身对照成阳性 冷反应自身抗体能引起难以确定的阳性 温反应自身抗体能引起难以确定的阳性 “钱串状”红细胞形成引起非真实的阳性结果
■（12）不规则抗体的产生 受检者血浆 中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体， 如自身抗I，与试剂A、B细胞上的相应抗原 起反应。
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■（13）低丙种球蛋白血症 可能会因免疫球蛋白
水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集 反应。 ■（14）药物等因素 药物、右旋糖酐等静脉注射
的
为原始交叉配血用的血清已不能代表患者 血清的情况。
采
集 4.标本必须有正确的标签,要防止血样的
及 要
稀释和溶血的产生,溶血的标本一般不能使 用,因为血清中的游离血红蛋白可以掩盖在 输血前实验中抗体反映引起的溶血。标本
求 标签上的内容与血液申请单上的内容要一
致。
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标
本 5.血清或血浆均可用于输血前检查,但使 的 用血浆标本时,应注意排除纤维蛋白原的干
离细胞
1+:很小的凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需 要用显微镜观察
W+:微小凝集块,肉眼很难看清,背景混浊,需要用显微镜观 察
O:无凝集,无溶血,全部是游离细胞,要用显微镜观察 PH:部分溶血 H:完全溶血 WF:混合外观
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疑难血型病例 1.白血病血型变异 2.血浆蛋白紊乱 3. 类B 4.多/全凝集 5.冷凝集 6.ABO亚型
■（9）获得性类B 由于革兰氏阴性杆菌的作 用，红细胞可获得“类B”活性。
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正反 定型 不一 致的 原因
■（10）近期内进行大量的血浆置换治疗， 影响抗体效价，造成反定型困难。
■（11）异常血浆蛋白 病人血浆中异常 的白蛋白、球蛋白比例异常和高浓度的纤 维蛋白原等能导致缗钱状形成，造成假凝 集现象。
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2.筛选细胞通常是由2-3个单人份的O型红细胞组成一 套筛选细胞试剂，包括以下常见的抗原：Rh系统 、 MNSs系统、P系统、Lewis系统、Duffy系统等。
3.抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的不 规则抗体。一些抗低频率抗原的抗体则可能漏检。
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不规则抗体筛选的操作步骤
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一
标本的采集及要求
二
血型
三
不规则抗体的筛选
四
交叉配血
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一 1.标本要新鲜: 前三个月内病人输过血或
标
已经妊娠,则配血试验使用的标本不得在这 次输血的48小时前抽取,避免因回忆反应产
本 生的抗体漏检。新近的输血或妊娠可以引
的 起意外抗体的迅速出现,如果对病人的输血
采 扰,因为血浆有时有少许纤维蛋白凝块,容 集 易导致凝集结果的判断。
及 要
6.输血后所有的标本均应妥善保存于28℃冰箱中,至少一周。
求
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源自文库
二、血 型
1.红细胞悬液的配制 用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要 用大量生理盐水洗一次,其目的是通过洗 涤可以去除红细胞表面的物质,如少量的 血浆蛋白、已溶解红细胞的基质,他们有 竞争抗体的作用,还有抗凝剂,他们有抗补 体的作用。
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输血前试验“三保险”:血型、抗筛、交叉配血


随机

ABO

Rh

抗筛

交叉配血

自身输血
相合% 64 99.4 99.8 99.94 99.95 100
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四、交叉配血
交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合 性，使病人，献血者血液之间没有可测到的不相配合的 抗原，抗体成分，试验应在37℃下进行。试验方法除作 盐水介质外，还有抗球蛋白试验法、酶法、聚凝胺法或 其改良法。在配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集献 血者的血液才能给予病人输注。
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9. 正反定型不一致的原因
一般正反定型结果不一致有技术原因也有受检红细胞或血清 本身的的问题。 ■（1）技术和管理错误---ABO定型中产生异常结果主要原因 标本和试剂搞错，造成假阳性或假阴性的结果。 器材不洁产生假阳性结果。 试剂污染或不足，产生假阳性或假阴性的结果。 离心过度或不足，产生假阳性或假阴性的结果。 阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。 漏加试剂，产生假阴性结果。 结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。
采
史或人身史不明,使用的标本必须是输血前 48小时内抽取的。血量约为5ml 。
集
及 2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治疗前抽 要 取病人血液标本备用,以防止红细胞缗钱状 求 凝集对试验结果的干扰。
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标 3.在24小时内输了12单位血后,可以输注
本 未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因
（5）如试验结果红细胞成缗钱状排列，加等渗盐水1 滴混匀，往往可使缗钱现象消失。
（6）做反定型试验时需要加做O细胞
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常用的记录符号及所示的凝集强度
4+:一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞 3+:数个大凝集块,背景透明,无游离细胞 2+:许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游
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三、不规则抗体的筛选
1.所谓不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体，其多为 ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。进行 不规则抗体的筛选的目的是发现有临床意义的不规则抗体， 以确保安全用血，有效用血，有条件或时间允许的情况下 最好献血者血清也作不规则抗体的筛选，如有发现不规则 抗体，鉴定此抗体，找出能与其相配合的血液，不可随便 用于输血。因为多为ＩｇＧ抗体，在盐水介质中不能凝集 而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质(酶、抗 人球蛋白、ｐｏｌｙ等)才能使致敏红细胞出现凝集反应， 这些方法的选择可按抗体的血清学行为和试验的具体条件 来确定。临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ 血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必 相同。如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有 可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗 体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发 生。
病人/被检血清 + 抗体筛选细胞 → 盐水介质

非盐水介质（聚凝胺、抗球蛋白、酶）
1、取试管四支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和自身对照并向各管加病人血清（血浆）
100ul，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各50ul于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 管中和5%自身
细胞于自身对照管中。
2、各加LIM0.6ML，混合均匀后，静置15秒,再各加Polybrene 溶液100ul(约 2滴)，并混合均匀。
①如果在室温放置2分钟后离心,可能使3+-4+的凝集减弱为 0+-1+,并伴有溶血现象。
②如果在室温放置5分钟后离心,原有的凝集可能消失,并有 溶血。
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③ 有的标本在延迟离心后,本来应有的凝集会变为既不凝集 也不溶血,因而难以发现ABO血型的不配合。这多数发生在O 型人的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应的试验中,发 生率为2%-3%。发生上述的原因是反应强的抗A、抗B和抗 原强度强的A、B抗原作用,补体C1在有Ca2+存在的条件下, 固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶 血。解决的方法： A:血清与红细胞混合后立即离心。 B:用血浆或灭活的血清做试验 C:用EDTA盐水配制红细胞悬液, D:稀释血清
3 、以1300G离心，离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留 约0.1ML液体。
4、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
5、最后加入Resuspending 100ul(约2滴) ，轻轻转动试管混合并同时观察 结果。如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检 结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体 筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
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5.加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加；抗体和抗原 的比例一般为2：1。
6.必须要做正反定型实验才能确定血型。
7.正定型试验如果有条件可加做抗AB,可用来检测弱A和弱 B ,反定型一定要加做O细胞,可用来发现不规则抗体。
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8.盐水试验多采用立即离心法,正确的操作是红细胞悬液 加到血清后立即离心并观察结果。反应时间过长而延误立 即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。
某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集。 ■（15）年龄因素 如新生儿、老年人等。
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正反定型不一致的处理方法
如发现ABO正反定性不一致，首先要重做试验一次。严格
执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可
解决明显的问题，对一些疑难问题需进一步检查。可初步采
取以下措施：