关于植物组织培养技术流程课件
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关于植物组织培养技术流程
§1 实验室仪器设备
§2 实验基本操作
一、母液的配制 1.MS母液的配制
大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐 (100倍)、有机元素(100倍)
2.激素母液的配制 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml
二、培养基的配制与灭菌
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正确
错误
§3.植物组织培养流程
路 线 一
路 线 二
路 线 三
使用浓度(%)
消毒时间 (min.)
效果
残液去除 难易
乙醇
70-75
0.1-3
好
易
新洁尔灭
10～20
5～30
好
易
氯化汞
0.1～1
2～15 最好 最难
过氧化氢 抗菌素
10～12 4～50mgl-
1
5～15 30～60
较好 较好
最易 较难
次氯酸钙/纳 9 ～ 10
5～30
好
易
取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡 消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的 接种器械进行分离、切割或其他处理。
正确
错误
2.无菌操作
1、用75%的酒精喷洒超净工作台。 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪 镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置 太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 3、关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗 手和手臂，进入接种台。
4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。 5。、试验操作。 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。 7、收拾无菌纸、材料瓶等。
1.培养基配制
MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30
mg/L pH 6.0
1L
2.培养基灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、 纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能 开盖。
三、外植体的消毒与无菌操作Fra Baidu bibliotek1.外植体消毒
消毒剂
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3） 为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原 则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左 侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或 细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样， 培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重 复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。
§1 实验室仪器设备
§2 实验基本操作
一、母液的配制 1.MS母液的配制
大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐 (100倍)、有机元素(100倍)
2.激素母液的配制 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml
二、培养基的配制与灭菌
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正确
错误
§3.植物组织培养流程
路 线 一
路 线 二
路 线 三
使用浓度(%)
消毒时间 (min.)
效果
残液去除 难易
乙醇
70-75
0.1-3
好
易
新洁尔灭
10～20
5～30
好
易
氯化汞
0.1～1
2～15 最好 最难
过氧化氢 抗菌素
10～12 4～50mgl-
1
5～15 30～60
较好 较好
最易 较难
次氯酸钙/纳 9 ～ 10
5～30
好
易
取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡 消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的 接种器械进行分离、切割或其他处理。
正确
错误
2.无菌操作
1、用75%的酒精喷洒超净工作台。 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪 镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置 太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 3、关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗 手和手臂，进入接种台。
4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。 5。、试验操作。 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。 7、收拾无菌纸、材料瓶等。
1.培养基配制
MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30
mg/L pH 6.0
1L
2.培养基灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、 纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能 开盖。
三、外植体的消毒与无菌操作Fra Baidu bibliotek1.外植体消毒
消毒剂
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3） 为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原 则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左 侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或 细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样， 培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重 复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。