分析方法学验证及确认管理规程

质量管理标准

1.目的: 制定分析方法学验证及确认的管理规程。

2. 范围: 适用于分析方法学的验证及确认。

3. 责任: QC检测员，QC主管。

4. 内容：

4.1 方法验证

方法验证就是根据检验项米的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法是都符合检验项目的要求。

4.1.1 方法验证的一般原则

通常情况下，分析方法需进行方法验证。对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、pH值、灰分、装量等。

方法学验证的内容应根据检验项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。

同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。

4.1.2 需要验证的检验项目

检验项目是为控制药品质量，保证药品安全有效而设定的测试项目，根据检验项目的设定目的和验证内容的不同要求，需验证的检验项目分为四类：

1. 鉴别试验；

2. 杂质的限度检查；

3. 杂质的定量测定；

4. 含量测定，包含原料药或制剂中有效成分的含量，制剂中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检查中的溶出量。以及含量均匀度。

除此之外还有一些物理项目的检测如粒径分布、旋光度、熔点和硬度，其要求与其他检验项目有所不同，通常其分析方法验证应有不同的要求。

鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其他物质。用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性和耐用性。

杂质检查主要用于控制主成分意外的杂质，如无机杂质、有机杂质等。杂质检查分为限度检查和定量测定这两部分。用于限度检查的分析方法验证侧重专属性、检测限和耐用性。用于定量测定的分析方法验证强调专属性、准确度、精确度、线性、范围、定量限和耐用性。

含量测定对准确度要求较高，因此所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性要求。

《中国药典》2010年版中规定了不同的检验项目需要验证不同的内容，详见表一：

表一验证项目和验证内容

备注：

1. *：已有重现性验证，不需验证中间精密度；

2. **：如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充；

3. ***：视具体情况予以验证；

4. “是”代表该项内容需要验证，“否”代表该项内容不需要验证。

4.1.3 方法验证内容

4.1.3.1 准确度

准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率表示。准确度应在规定的范围内测试。

（1）验证方法

准确度应在规定的范围内建立，至少用9个测定结果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。

准确度是定量测定的必要条件，因此含量测定、杂质定量测定均需验证准确度。原料药与制剂所用的具体方法见表二。

表二准确度验证方法

例如：测定含量的准确度，按标示的80%，100%和120%配制三个浓度的溶液，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。根据测定结果与配制浓度计算出平均回收率以及相对标准偏差。

（2）数据要求

需报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及相对标准偏差或可信限。

4.1.3.2 精密度

精密度系指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

精密度与准确度不同。精密度体现了多次重复测定同一被分析物时各测定值之间的接近程度，但它不能表达与已建立的真实值或者参考值之间的符合程度，后者由准确度来测定。通过一系列的测定值，可以得到良好的精密度，但是由于所用分析方法存在的偏差，所得的平均值不一定与真实值或参考值相符，在这种状况下，需要修改方法以消除偏差。

（1）验证方法

精密度可从重复性、中间精密度、重现性三个层次考察。详见表三。

表三精密度验证方法

（2）数据要求

均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。

4.1.3.3 专属性

专属性系指在其他成分（如：杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。

通常，鉴别反应、杂质检查、含量测定均应考察其专属性。如一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充。例如检测具有旋光特性的活性物质，除采用非手性薄层色谱法或高效液相色谱法外，还应增加旋光度的检查。

验证方法见表四。

表四专属性验证方法

4.1.3.4 检测限

检测限（LOD或DL）系指试验中的被测物能够被检测出的最低量。

药品的杂质测定，应通过测试确定方法的检测限。

（1）验证方法（表五）

表五杂质测定检测限验证方法

（2）数据要求

应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。

4.1.3.5 定量限

定量限（LOQ或QL）系指试样中的被测物能够被定量测定的最低量，其被测结果应具有一定的准确度和精密度。

杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定方法的定量限。

（1）验证方法（表六）

表六杂质定量测定验证方法

4.1.3.6 线性

线性是指在设计的测定范围内，检测结果与试样中被测物的浓度直接呈正比关系的程度。

线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量测定和含量测定均需验证线性。

（1）验证方法

应在规定的测定范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试样品每个浓度各一份，每份供试样品测定3次，以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察