第十六课维生素类药物分析三
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第四节 维生素D的分析
CH3 H H CH3 CH3 CH3 H CH3 CH2 HO H H
维生素D2（骨化醇、麦角骨化醇）
CH3
H H CH3
CH3 CH3
CH2 HO H
H
维生素D3（胆骨化醇）
一、结构与性质
1. 溶解性 2. 不稳定性 脂溶性 含多个双健易被氧化，
对酸不稳定
3. 旋光性 4. 显色反应 性状项下比旋度
维生素D及前维生素D折算成维生
素D的总量（mi）
mi ( f1 Ai1 f2 Ai 2 )ms / As
单位 = 0.025 µg
第二法
适用于有维生素A醇及其它杂
质干扰时
皂化提取 分离净化
反相色谱系统
按第一法
第三法
适用于按第二法处理后前维
生素D仍被干扰的样品 第二法净化后样品
5. 紫外吸收特征 性状项下吸收系数
二、鉴别试验
（一）显色反应
1. 与醋酐-浓硫酸反应 Ch.P（2005）
维生素D2
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三 氯甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫
酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，
迅即变为紫色，最后成绿色。
维生素D3
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三氯
甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸
0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，迅
即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。
2. 与三氯化锑反应 BP
维生素D + 三氯化锑 →橙红色→粉红色 3. 其他显色反应
（二）IR
Ch.P（2005）
维生素D2
邻苯二甲酸二甲酯
2. 系统适应性试验
维生素D3
维生素D3 对照品
光照
△
前维生素D3
反式维生素D3
速甾醇D3
目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，
检查分离度是否符合规定
3. 计算校正因子（对照品为维生素D3）
（1）维生素D校正因子（f1）
内标 进样 f1 对照
As / m s f1 Ar / mr
N Fe +
2+
N Fe N
3
N
3
红色
（三）UV法
0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm
1% E1cm
= 41.0～45.5
维生素EUV图
（四） TLC法
薄层板 展开剂 硅胶G 环己烷 -乙醚（4 ：1）
显色剂
VitE
硫酸（105℃ 5′）
Rf = 0.7
三、特殊杂质
VitE 生 育 酚 [O] △ 对生育醌 Fe
2
KOH
Fe
3
红 色
联吡啶
CH 3 H 3C HO CH 3 O
CH 3 C 16 H 33
生育酚
[O]
Fe
3+
弱氧化 剂
CH 3
H 3C O CH 3
O
OH CH 3 C 16 H 33
对-生育醌
2+
Ch.P（2005）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图 谱应与对照的图谱（光谱集452图）
一致。
（三）维生素D2、D3的区别反应
维生素D 与乙醇+硫酸反应
维生素 D2显红色，max在570nm 维生素 D3显黄色，max在495nm
三、杂质检查 维生素D2中麦角甾醇的检查
灵敏度法 维生素D2 Ch.P（2005） 取本品10mg，加90% 【检查】麦角甾醇
例
取本品0.10g，加无水乙醇 5ml溶解后，加二苯胺试液1滴， 用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定， 消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不 得过 1.0ml。
第五节 维生素E
O HO
苯并－二氢吡喃醇
CH3 R2 HO R1 O
*
*
*
名
称
R1
α-生育酚 β-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚
CH3 CH3 H H
R2 CH3 H
相对活性 1.0 0.5
CH3 H
0.2 0.1
生物效价 右旋体
： 消旋体 = 1.4 ：10
（天然品） （合成品）
CH 3 H3C H 3 C CO O CH 3 O CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
1. 酸度 检查制备过程中引入的游离羧酸，
酸碱滴定法
2. 游离生育酚的检查
（一）原理
利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成硫酸亚铈
生 育 酚 2Ce
4
2Ce
3
对 生育醌
（二） 试剂
硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄→灰紫）
CM （M生育酚= 430.8） T n 0.01 430.8 T 2.154 （m g / m l） 2
橙红色
[O ]
CH 3 H 3C O
CH 3 C 16 H 33
强氧化剂
HO CH 3
生育酚
HNO3
CH 3 H 3C O O O CH 3 C 16 H 33
生育红 （橙红色）
取本品约30mg，加无水
乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml， 摇匀，在75℃加热15分钟，溶
液应显橙红色。
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
（2）前维生素D折算成维生素D的校
正因子（f2）
N 2，排空气、密塞 对照品 2， 6 二叔丁基对甲酚 通
冷至室温 进样
90 ℃、1.5 h
内标物
As mr f1 ms Ar1 f2 Ar 2 ms
4. 计算含量
乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取
洋地黄皂苷20mg，加90%乙醇2ml，加
热溶解制成）2ml，混合，放置18小时，
不得发生浑浊或沉淀。
四、含量测定
HPLC 药典附录 维生素D测定法 共有三法
第一法
适用于无维生素A醇及其它
正相色谱、内标法
杂质干扰时 1. 色谱条件 色谱柱
硅胶
流动相
内 标
正己烷 –正戊醇（997:3）
对照
维生素D
外标法计算维生素D含量
维生素D2
Ch.P（2005）
【含量测定】 精密称取本品25mg，置100ml
棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热
，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷
至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶
液各5ml，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至 刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素D 测定法（附录Ⅶ K 第一法）测定，即得。
dl－α－生育酚醋酸酯
一、结构与性质 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂，不溶于水
2、UV 3、酯键
Hale Waihona Puke Baidu
易水解
△
VitE 生育酚 醌型化合物
[O]
H orOH
二、 鉴别
（一）硝酸反应
VitE 生 育 酚
75℃15′
HNO3
生 育 红
CH3 H H CH3 CH3 CH3 H CH3 CH2 HO H H
维生素D2（骨化醇、麦角骨化醇）
CH3
H H CH3
CH3 CH3
CH2 HO H
H
维生素D3（胆骨化醇）
一、结构与性质
1. 溶解性 2. 不稳定性 脂溶性 含多个双健易被氧化，
对酸不稳定
3. 旋光性 4. 显色反应 性状项下比旋度
维生素D及前维生素D折算成维生
素D的总量（mi）
mi ( f1 Ai1 f2 Ai 2 )ms / As
单位 = 0.025 µg
第二法
适用于有维生素A醇及其它杂
质干扰时
皂化提取 分离净化
反相色谱系统
按第一法
第三法
适用于按第二法处理后前维
生素D仍被干扰的样品 第二法净化后样品
5. 紫外吸收特征 性状项下吸收系数
二、鉴别试验
（一）显色反应
1. 与醋酐-浓硫酸反应 Ch.P（2005）
维生素D2
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三 氯甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫
酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，
迅即变为紫色，最后成绿色。
维生素D3
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三氯
甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸
0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，迅
即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。
2. 与三氯化锑反应 BP
维生素D + 三氯化锑 →橙红色→粉红色 3. 其他显色反应
（二）IR
Ch.P（2005）
维生素D2
邻苯二甲酸二甲酯
2. 系统适应性试验
维生素D3
维生素D3 对照品
光照
△
前维生素D3
反式维生素D3
速甾醇D3
目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，
检查分离度是否符合规定
3. 计算校正因子（对照品为维生素D3）
（1）维生素D校正因子（f1）
内标 进样 f1 对照
As / m s f1 Ar / mr
N Fe +
2+
N Fe N
3
N
3
红色
（三）UV法
0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm
1% E1cm
= 41.0～45.5
维生素EUV图
（四） TLC法
薄层板 展开剂 硅胶G 环己烷 -乙醚（4 ：1）
显色剂
VitE
硫酸（105℃ 5′）
Rf = 0.7
三、特殊杂质
VitE 生 育 酚 [O] △ 对生育醌 Fe
2
KOH
Fe
3
红 色
联吡啶
CH 3 H 3C HO CH 3 O
CH 3 C 16 H 33
生育酚
[O]
Fe
3+
弱氧化 剂
CH 3
H 3C O CH 3
O
OH CH 3 C 16 H 33
对-生育醌
2+
Ch.P（2005）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图 谱应与对照的图谱（光谱集452图）
一致。
（三）维生素D2、D3的区别反应
维生素D 与乙醇+硫酸反应
维生素 D2显红色，max在570nm 维生素 D3显黄色，max在495nm
三、杂质检查 维生素D2中麦角甾醇的检查
灵敏度法 维生素D2 Ch.P（2005） 取本品10mg，加90% 【检查】麦角甾醇
例
取本品0.10g，加无水乙醇 5ml溶解后，加二苯胺试液1滴， 用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定， 消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不 得过 1.0ml。
第五节 维生素E
O HO
苯并－二氢吡喃醇
CH3 R2 HO R1 O
*
*
*
名
称
R1
α-生育酚 β-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚
CH3 CH3 H H
R2 CH3 H
相对活性 1.0 0.5
CH3 H
0.2 0.1
生物效价 右旋体
： 消旋体 = 1.4 ：10
（天然品） （合成品）
CH 3 H3C H 3 C CO O CH 3 O CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
1. 酸度 检查制备过程中引入的游离羧酸，
酸碱滴定法
2. 游离生育酚的检查
（一）原理
利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成硫酸亚铈
生 育 酚 2Ce
4
2Ce
3
对 生育醌
（二） 试剂
硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄→灰紫）
CM （M生育酚= 430.8） T n 0.01 430.8 T 2.154 （m g / m l） 2
橙红色
[O ]
CH 3 H 3C O
CH 3 C 16 H 33
强氧化剂
HO CH 3
生育酚
HNO3
CH 3 H 3C O O O CH 3 C 16 H 33
生育红 （橙红色）
取本品约30mg，加无水
乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml， 摇匀，在75℃加热15分钟，溶
液应显橙红色。
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
（2）前维生素D折算成维生素D的校
正因子（f2）
N 2，排空气、密塞 对照品 2， 6 二叔丁基对甲酚 通
冷至室温 进样
90 ℃、1.5 h
内标物
As mr f1 ms Ar1 f2 Ar 2 ms
4. 计算含量
乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取
洋地黄皂苷20mg，加90%乙醇2ml，加
热溶解制成）2ml，混合，放置18小时，
不得发生浑浊或沉淀。
四、含量测定
HPLC 药典附录 维生素D测定法 共有三法
第一法
适用于无维生素A醇及其它
正相色谱、内标法
杂质干扰时 1. 色谱条件 色谱柱
硅胶
流动相
内 标
正己烷 –正戊醇（997:3）
对照
维生素D
外标法计算维生素D含量
维生素D2
Ch.P（2005）
【含量测定】 精密称取本品25mg，置100ml
棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热
，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷
至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶
液各5ml，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至 刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素D 测定法（附录Ⅶ K 第一法）测定，即得。
dl－α－生育酚醋酸酯
一、结构与性质 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂，不溶于水
2、UV 3、酯键
Hale Waihona Puke Baidu
易水解
△
VitE 生育酚 醌型化合物
[O]
H orOH
二、 鉴别
（一）硝酸反应
VitE 生 育 酚
75℃15′
HNO3
生 育 红