抗菌药物的敏感试验
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7. 质量控制 采用标准菌株：金黄色葡萄球ATCC25923，
大肠埃希菌ATCC25922，和铜绿假单胞菌
ATCC27853
2）直接纸片药敏法 由确证感染部位采集到的一些重要临
床标本直接涂布接种MH琼脂或5%羊血 MH琼脂，然后放置药敏纸片。不仅可 提早24h得出初步药敏结果供临床用药参 考，还有助于发现混合感染中的不同菌
3. 提供所选择药物的依据；
4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁， 掌握耐药菌感染病的流行病学，控制 和预防耐药菌感染的发生和流行。
（二）药敏试验方法
1 纸片扩散法 1）K-B纸片琼脂扩散法
（1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片 贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中 所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便 不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯 度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试 菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓 度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大， MIC愈小。
最 低 抑 菌 浓 度 （ minimal inhibitory concentration,MIC）： 细 菌 生 长 被 完 全 抑 制 的 最低药物浓度为该药对测试菌的MIC。
最 低 杀 菌 浓 度 （ minimal bactericidal concentration,MBC）： 某 抗 菌 药 物 能 杀 灭 99.9%以上测试菌时的最低药物浓度。
抗菌药物的敏感试验
张德纯 教授 病原生物学教研室
医院感染近年来已成为全球性的突出
问题，其主要原因之一是抗菌药物的使用 不当促进耐药菌在病人体内和医院环境中 定植繁衍，进而导致的交叉感染和内源性 感染日益增多。合理使用抗菌药物的前提 之一是要重视感染病原学的实验室诊断和 监控抗感染治疗的实验室服务。为临床抗 感染治疗的药物选择以及疗效的监测和考 核提供实验室依据是临床微生物实验室的 重要职能之一。
部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。
6. 影响因素 （1） 培养基的质量，如PH、深度、硬度和表
面湿度等； （2） 药敏纸片的质量，含药量和保存方式； （3） 接种菌量正确与否是影响结果的重要因
素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和 保存；
（4） 试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15
分钟； （5） 孵育条件，温度和时间：培养时间 16~18h,不要超过24h。
菌液(ml)： 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
（1.5×107 /ml)
混匀
35℃ 16~20h
观察结果
注意 :设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管 和质控菌生长对照管.
35℃ 16-18h
观察结果
5. 结果判断：量取抑菌圈直径 抗菌药物敏感性标准分为以下三级：
敏感：表示测试菌能被测定药物常规剂
量给药后在体内达到的血药浓度所抑制 或杀灭。
中度敏感(中介)：指测试菌可被测定药
物大剂量给药后在体内能达到的浓度所
抑制，或在测定药物浓集部位的体液中， 如尿中被抑制。
耐药：表示测试菌不能被在体内感染
种、耐药菌株以及病原菌的鉴定。但由
于此法难以控制接种菌量，且标本中可
能存在多种细菌，因此还需要在病原菌 分纯后再用K—B法对其进行验证和补充。
2 稀释法
1） 肉汤稀释法
包括试管稀释法和微量稀释法。下面重点 讲述试管稀释法（常量稀释法）。
（1）. 原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基 将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细 菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓 度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。
一、临床常用的抗菌药物
抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗 生素和化学合成药物。
1. 青霉素类抗生素 2. 头孢菌素类抗生素 3. 其他-内酰胺类抗生素 4. 氨基糖甙类抗生素 5. 喹诺酮类抗生素 6. 大环内酯类抗生素 7. 四环素、氯霉素和林可酰胺类抗生素 8. 糖肽类抗生素 9. 磺胺类药物及增效剂 10. 其他合成抗菌药
二、抗菌药物敏感性试验
（一）抗菌药物敏感性试验的意义
抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility test ,AST）意义在于：
1. 可预测抗菌治疗的效果，既AST试验结 果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结 果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失 败；
2. 指导临床医生选择使用抗生素，AST的 结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之 后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有 效，若结果为“耐药”，即应更换药物；
4. 操作步骤：
接种
在已分纯的待测菌平板上挑取4~5个菌落
35℃ 4~6 h
3~5mlMH肉汤中
用肉汤调整菌液至
15min 内
0.5个麦氏管（1.5х108/ml）
用无菌
棉签均匀涂布平板（涂布3次，每次旋转平板60 度，最后沿平板内缘涂抹1周）
室温5分钟后
贴纸片（各纸片中心相距应大 于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm）
(2) 方法 试管编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
抗生素： 1ml 2ml
(512µg/ml)
不加抗生素wenku.baidu.com
MH肉汤 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
对倍稀释： 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml1ml(弃去 ) 抗生素含量 256 128 64 32 16 8 4 2 1---
2. 抗菌药物纸片：选择直径6.35mm的新 华滤纸含药物纸片，-20℃保存。
3. 培养基：用水解酪蛋白（MuellerHinton MH）琼脂。琼脂厚度4mm。9cm 内径的平板需倾注25-30ml琼脂，7cm内 径的平板需倾注15 ml琼脂。对于营养要 求高的细菌在MH琼脂基础上加入血清或 血液。
药物敏感试验包括体外抗菌药物敏 感试验、体内抗菌药物活性的测定和药 物浓度的测定。
体外抗菌药物敏感试验包括抑菌试 验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细 菌产生的抗生素灭活酶。常用的体外抗 菌药物敏感试验有纸片扩散法、稀释法 和E试验法。
本章仅对临床微生物实验室常用的 体外药敏试验的基本原理和方法进行介 绍。
大肠埃希菌ATCC25922，和铜绿假单胞菌
ATCC27853
2）直接纸片药敏法 由确证感染部位采集到的一些重要临
床标本直接涂布接种MH琼脂或5%羊血 MH琼脂，然后放置药敏纸片。不仅可 提早24h得出初步药敏结果供临床用药参 考，还有助于发现混合感染中的不同菌
3. 提供所选择药物的依据；
4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁， 掌握耐药菌感染病的流行病学，控制 和预防耐药菌感染的发生和流行。
（二）药敏试验方法
1 纸片扩散法 1）K-B纸片琼脂扩散法
（1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片 贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中 所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便 不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯 度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试 菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓 度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大， MIC愈小。
最 低 抑 菌 浓 度 （ minimal inhibitory concentration,MIC）： 细 菌 生 长 被 完 全 抑 制 的 最低药物浓度为该药对测试菌的MIC。
最 低 杀 菌 浓 度 （ minimal bactericidal concentration,MBC）： 某 抗 菌 药 物 能 杀 灭 99.9%以上测试菌时的最低药物浓度。
抗菌药物的敏感试验
张德纯 教授 病原生物学教研室
医院感染近年来已成为全球性的突出
问题，其主要原因之一是抗菌药物的使用 不当促进耐药菌在病人体内和医院环境中 定植繁衍，进而导致的交叉感染和内源性 感染日益增多。合理使用抗菌药物的前提 之一是要重视感染病原学的实验室诊断和 监控抗感染治疗的实验室服务。为临床抗 感染治疗的药物选择以及疗效的监测和考 核提供实验室依据是临床微生物实验室的 重要职能之一。
部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。
6. 影响因素 （1） 培养基的质量，如PH、深度、硬度和表
面湿度等； （2） 药敏纸片的质量，含药量和保存方式； （3） 接种菌量正确与否是影响结果的重要因
素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和 保存；
（4） 试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15
分钟； （5） 孵育条件，温度和时间：培养时间 16~18h,不要超过24h。
菌液(ml)： 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
（1.5×107 /ml)
混匀
35℃ 16~20h
观察结果
注意 :设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管 和质控菌生长对照管.
35℃ 16-18h
观察结果
5. 结果判断：量取抑菌圈直径 抗菌药物敏感性标准分为以下三级：
敏感：表示测试菌能被测定药物常规剂
量给药后在体内达到的血药浓度所抑制 或杀灭。
中度敏感(中介)：指测试菌可被测定药
物大剂量给药后在体内能达到的浓度所
抑制，或在测定药物浓集部位的体液中， 如尿中被抑制。
耐药：表示测试菌不能被在体内感染
种、耐药菌株以及病原菌的鉴定。但由
于此法难以控制接种菌量，且标本中可
能存在多种细菌，因此还需要在病原菌 分纯后再用K—B法对其进行验证和补充。
2 稀释法
1） 肉汤稀释法
包括试管稀释法和微量稀释法。下面重点 讲述试管稀释法（常量稀释法）。
（1）. 原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基 将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细 菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓 度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。
一、临床常用的抗菌药物
抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗 生素和化学合成药物。
1. 青霉素类抗生素 2. 头孢菌素类抗生素 3. 其他-内酰胺类抗生素 4. 氨基糖甙类抗生素 5. 喹诺酮类抗生素 6. 大环内酯类抗生素 7. 四环素、氯霉素和林可酰胺类抗生素 8. 糖肽类抗生素 9. 磺胺类药物及增效剂 10. 其他合成抗菌药
二、抗菌药物敏感性试验
（一）抗菌药物敏感性试验的意义
抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility test ,AST）意义在于：
1. 可预测抗菌治疗的效果，既AST试验结 果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结 果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失 败；
2. 指导临床医生选择使用抗生素，AST的 结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之 后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有 效，若结果为“耐药”，即应更换药物；
4. 操作步骤：
接种
在已分纯的待测菌平板上挑取4~5个菌落
35℃ 4~6 h
3~5mlMH肉汤中
用肉汤调整菌液至
15min 内
0.5个麦氏管（1.5х108/ml）
用无菌
棉签均匀涂布平板（涂布3次，每次旋转平板60 度，最后沿平板内缘涂抹1周）
室温5分钟后
贴纸片（各纸片中心相距应大 于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm）
(2) 方法 试管编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
抗生素： 1ml 2ml
(512µg/ml)
不加抗生素wenku.baidu.com
MH肉汤 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
对倍稀释： 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml1ml(弃去 ) 抗生素含量 256 128 64 32 16 8 4 2 1---
2. 抗菌药物纸片：选择直径6.35mm的新 华滤纸含药物纸片，-20℃保存。
3. 培养基：用水解酪蛋白（MuellerHinton MH）琼脂。琼脂厚度4mm。9cm 内径的平板需倾注25-30ml琼脂，7cm内 径的平板需倾注15 ml琼脂。对于营养要 求高的细菌在MH琼脂基础上加入血清或 血液。
药物敏感试验包括体外抗菌药物敏 感试验、体内抗菌药物活性的测定和药 物浓度的测定。
体外抗菌药物敏感试验包括抑菌试 验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细 菌产生的抗生素灭活酶。常用的体外抗 菌药物敏感试验有纸片扩散法、稀释法 和E试验法。
本章仅对临床微生物实验室常用的 体外药敏试验的基本原理和方法进行介 绍。