乙肝病毒DNA实验室检测
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、 α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等 对于 ≥105的患者应进行抗病毒治疗
谢谢
3’
5’
4. 检测荧光
3’
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一） 乙型肝炎病毒结构及特点
：是感染的主要标志 ：保护性抗体
：仅存于感染的肝细胞核内， 一般不存在于血循环中
: 非保护性抗体， 提示处于复制状态
：复制及强感染性的指标 ：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） 与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
与 有着良好的相关性
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
慢性感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
与临床
检测的临床意义
是存在最直接的依据 是复制的标志 是患者具有传染性的标志 对乙肝两对半起补充作用 是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
荧光定量原理
插入染料法 I
杂交探针法(最常用)
3’ 5’
Taq
探针
5’ 3’
酶
R 5’
Probe
Q 3’
反应体系
l
R
5’
Q
3’
变性
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Taq
3’ 5’
Taq
3’ 5’
R 5’
R
Taq
R
Taq
R
l
R
3’
退火
1. 链取代
3’
5’
2. 水 解
3’
5’
3. 聚 合
• 每个体系含4种主要成分：含有待扩增序列的模板、引物 、聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（）
荧光定量技术
实时荧光定量技术，是指在反应体系中加入荧光标记， 利用荧光信号积累实时检测整个过程，通过标准曲线对终 产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的 一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的 方法。
：检测的是本身的遗传物质—，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不 能 反应体内病毒复制水平与感染程度。
3. 血清学指标(－)不能排除感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋)
HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现(＋)，(－)。 5阳性标本 检出率90％左右
检测的临床意义
提供直接证据缩短“窗口期”
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于复制 期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人都无 复制。因此，要准确知道是否处于复制状态，最准 确的方法还是通过检测 来决定。
和均阳性而 阴性？
检测的临床意义
反应过程
3’
5’
5’
3’
酶
Leabharlann Baidu
反应组分
变性
3’ 5’
3’
Taq
5’
退
火
3’
5’
Taq
延
伸
3’
重复
3’ 3’ 3’ 3’
3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
循环2 4个拷贝
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’
3’
循环3 8个拷贝
乙肝病毒的实验室检测 袁立云
1、荧光定量技术 2、乙肝病毒的感染 3、与临床
荧光定量技术
荧光定量技术
• ()，聚合酶链式反应，是一种的快速扩增技术。技术通 过两个短的称为引物的小片段和一种耐热酶（聚合酶）的 作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3 个小时内反复循环25-30次，把特定的片段扩增1000万倍 。
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。 ●所用引物相应的序列发生突变，此引物与突变不能配对结合。 ●病毒整合于宿主肝细胞染色体而血中游离 很少或缺乏。
乙肝的治疗
目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的 药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类：
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等 对于 ≥105的患者应进行抗病毒治疗
谢谢
3’
5’
4. 检测荧光
3’
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一） 乙型肝炎病毒结构及特点
：是感染的主要标志 ：保护性抗体
：仅存于感染的肝细胞核内， 一般不存在于血循环中
: 非保护性抗体， 提示处于复制状态
：复制及强感染性的指标 ：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） 与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
与 有着良好的相关性
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
慢性感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
与临床
检测的临床意义
是存在最直接的依据 是复制的标志 是患者具有传染性的标志 对乙肝两对半起补充作用 是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
荧光定量原理
插入染料法 I
杂交探针法(最常用)
3’ 5’
Taq
探针
5’ 3’
酶
R 5’
Probe
Q 3’
反应体系
l
R
5’
Q
3’
变性
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Q 3’ 5’
Taq
3’ 5’
Taq
3’ 5’
R 5’
R
Taq
R
Taq
R
l
R
3’
退火
1. 链取代
3’
5’
2. 水 解
3’
5’
3. 聚 合
• 每个体系含4种主要成分：含有待扩增序列的模板、引物 、聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（）
荧光定量技术
实时荧光定量技术，是指在反应体系中加入荧光标记， 利用荧光信号积累实时检测整个过程，通过标准曲线对终 产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的 一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的 方法。
：检测的是本身的遗传物质—，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不 能 反应体内病毒复制水平与感染程度。
3. 血清学指标(－)不能排除感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋)
HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现(＋)，(－)。 5阳性标本 检出率90％左右
检测的临床意义
提供直接证据缩短“窗口期”
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于复制 期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人都无 复制。因此，要准确知道是否处于复制状态，最准 确的方法还是通过检测 来决定。
和均阳性而 阴性？
检测的临床意义
反应过程
3’
5’
5’
3’
酶
Leabharlann Baidu
反应组分
变性
3’ 5’
3’
Taq
5’
退
火
3’
5’
Taq
延
伸
3’
重复
3’ 3’ 3’ 3’
3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
循环2 4个拷贝
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’
3’
循环3 8个拷贝
乙肝病毒的实验室检测 袁立云
1、荧光定量技术 2、乙肝病毒的感染 3、与临床
荧光定量技术
荧光定量技术
• ()，聚合酶链式反应，是一种的快速扩增技术。技术通 过两个短的称为引物的小片段和一种耐热酶（聚合酶）的 作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3 个小时内反复循环25-30次，把特定的片段扩增1000万倍 。
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。 ●所用引物相应的序列发生突变，此引物与突变不能配对结合。 ●病毒整合于宿主肝细胞染色体而血中游离 很少或缺乏。
乙肝的治疗
目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的 药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类：