课程实验-桂味荔枝皮中多酚物质含量及抗氧化性研究实验报告

桂味荔枝皮中多酚物质含量及抗氧化性研究

摘要：本实验通过超声辅助提取法和微波辅助提取法研究提取桂味品种的荔枝皮多酚含量及抗氧化性，分别测得多酚平均含量为44.1 mg/g和54.6 mg/g，IC50平均浓度分别为14.54 mg/L 和16.10mg/L。微波辅助提取法提取效率较高，而超声辅助提取法所得试样对DPPH自由基的半抑制浓度IC50浓度较小。两种方法各有所长，值得推广。

关键字：桂味荔枝皮多酚抗氧化性半抑制浓度微波超声

1.引言：

荔枝为常绿乔木荔枝的果实，作为中国华南地区的特色水果，其栽培已有两千多年的历史，主要产地为广东、广西福建等地。

荔枝主要含花色素类、原花色素类、挥发性成分、脂肪族化合物及多种营养成分。荔枝果皮组织约占荔枝单果重的15%，它富含黄酮类、酚酸类和水溶性多糖等生理活性物质。研究表明，荔枝鲜果皮提取物单宁（多酚）含量为4 mg/ 1g鲜果皮。因此，荔枝皮若能在食品防腐方面进行运用，不但可以变废为宝，而且前景十分广阔。

为此，作者特意从众多荔枝品种中选取桂味荔枝皮作为研究对象，对荔枝皮中的抗氧化成分进行定性定量及抗氧化活性研究。[4]

2.实验部分

2.1仪器试剂

仪器：

（1）紫外可见分光光度计：波长644 nm，517 nm；

（2）微波萃取仪：微波功率400 w，温度60。C，时间15 min；

（3）超声波震荡仪：时间30 min；

（4）电子分析天平（0.1 mg），电子天平（1 mg）；

（5）玻璃仪器：碘量瓶，量筒（100 mL），移液管（2 mL；5 mL），容量瓶（50 mL；100mL），玻璃棒，具塞比色管（10 mL），烧杯（50 mL；250 mL），布氏漏斗，抽滤瓶。

试剂：干荔枝皮（桂味），分析纯95%乙醇，没食子酸标准品，福林酚试剂（储备液），5 %碳酸钠溶液（储备液），DPPH（储备液），纯水。

2.2实验步骤

2.2.1样品制备——荔枝皮中多分化合物的提取

（1）微波辅助提取法：准确称取在60。C烘干的洁净荔枝皮（桂味）2.0 g，置于碘量瓶中，加入30 mL95%乙醇，在400 w微波功率、60。C下提取15 min。抽滤并用少量95%乙醇洗涤两次，再用95%乙醇定容至50 mL备用，平行两次实验。

（2）超声波震荡辅助提取法：准确称取在60。C烘干的洁净荔枝皮（桂味）2.0 g，置于碘量瓶中，加入30 mL95%乙醇（再瓶口磨口处垫上一片纸，防止超声后塞子与瓶口黏在一起），利用超声波震荡30 min。抽滤并用少量95%乙醇洗涤两次，再用95%乙醇定容至50 mL备用，平行两次实验。

2.2.2抗氧化物质定量测量——Folin-Denis法测定荔枝皮中总多酚的含量

（1）没食子酸储备液（100 mg/L）配置：准确称取10.0 mg没食子酸标准品，溶解后定量转移至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。

（2）样品溶液的制备：准确移取2.5 mL提取液至50 mL容量平中，用水稀释至刻度，摇匀备用。

（3）标准曲线绘制：取7支10 mL具塞比色管，准确移取没食子酸使用液（100 mg/L）0、0.40、0.60、0.80、1.20、1.60、2.00 mL，加入1.2 mL福林酚试剂，摇匀后静止5 min，再加入3 mL5%的碳酸钠溶液，用水定容至10 mL，充分摇匀，室温下避光放至30 min，于644 nm 波长下测定标准系列溶液的吸光度，绘制标准曲线。

（4）样品中总多酚含量的测定：准确取1 mL样品（微波辅助提取与超声辅助提取）溶液至10 mL具塞比色管中，加入1.2 mL福林酚试剂，摇匀后静止5 min，再加入3 mL5%的碳酸钠溶液，用水定容至10 mL，充分摇匀，室温下避光放至30 min，于644 nm波长下测定标准系列溶液的吸光度。平行两次实验。

2.2.3抗氧化物质性能研究——DPPH法测定荔枝皮乙醇提取物中总多酚的抗氧化性能

（1）稀释样品溶液：准确移取2 mL样品溶液（微波辅助提取与超声辅助提取）至50 mL 容量瓶，用乙醇定容备用。平行两次实验。

（2）配置系列样品溶液：准确移取稀释后的样品溶液0、0.20、0.4、0.80、1.20、1.60，2.00 mL，分别加入5.0 mL 50 mg/L DPPH-乙醇溶液，静止60 min，使用95%乙醇作为调零试剂，于517 nm处测定反应液的吸光度并进行计算其抑制率。

利用没有加入样品溶液的DPPH-乙醇溶液作为空白试剂，测试其吸光度，记录为A

空白

，即空白对照。根据公式得样品抑制率。

抑制率计算公式：η(%)=(A

空白－A

样品

)/A

空白

×100

调零：95%乙醇试剂；空白：DPPH-乙醇溶液。

3.结果及分析

3.1荔枝皮中总多酚的含量计算

3.1.1标准曲线计算与绘制

表1.Folin-Denis法紫外分光光度计测试数据

由于4.0、6.0 mg/L没食子酸浓度太低，不确定性较大，因此舍去4.0 mg/L的数据，进行线性拟合，得到以下拟合曲线。

图1 Folin-Denis法线性回归方程

线性方程：y=0.003x+0.153，R2=0.9751

R2〉0.95，吸光度A从0.1762~0.2156与对应的浓度成线性关系

3.1. 2样品总多酚含量的计算

表2.样品紫外吸光度数据列表

1.超声波辅助提取法，计算平均值，d，s，RSD，t值检验法，F值检验法（建议）

2.微波辅助提取法，同样

（2）两种提取方法的比较

1.提取效率

从样品平均浓度可以看出，微波辅助提取的样品溶液浓度比超声辅助提取的要高，证明在较短（30 min以内）提取时间内，使用微波辅助提取的效率会更高。

2.重现性

通过计算单次实验偏差：

可以看出超声波辅助提取方法单次实验偏差较小，重现性较微波辅助法要好。

3.2样品中多酚物质抗氧化性性能研究-清除DPPH自由基的能力