中药海藻提取物的抗病毒活性研究

中药海藻提取物的抗病毒活性研究

目的:明确羊栖菜提取物对呼吸道合胞病毒及肠道病毒71型的抑制活性。方法:首先采用水提醇沉法提取6种不同海藻获得海藻提取物,进行体外致细胞病变(CPE)法抗RSV与EV71实验,比较他们的抗病毒活性高低,从中筛选出抗病毒最优海藻进一步筛选其它几种病毒,比较筛选结果。

RSV滴鼻感染幼龄小鼠,构建RSV肺炎小鼠模型,腹腔注射给药,设置正常对照组、病毒对照组、阳性对照组、药物组,比较各组小鼠的肺指数、肺指数抑制率,并对肺组织病毒基因组进行实时荧光定量PCR,最后观察各组肺组织HE染色病理切片。以预防、治疗和直接杀灭等3种方式进行96孔板上的体外抗EV71实验,用荧光病毒GFP-EV71感染细胞,荧光显微镜下观察病毒增殖情况。

最后基因芯片法初步筛选出ESF作用于EV71感染宿主的作用点,以待进一步研究。结果:(1)6种海藻的抑毒指数,对RSV的抗病毒效果:羊栖菜﹥大叶海藻﹥马尾藻﹥刚毛藻﹥鼠尾藻﹥石莼﹥利巴韦林;对EV71的抗病毒效果:羊栖菜﹥刚毛藻﹥大叶海藻﹥马尾藻﹥鼠尾藻﹥石莼﹥利巴韦林。

羊栖菜提取物对7种病毒的抑毒指数:EV71>Cox A16>RSV>Cox

B3>Cox B5>Cox B2。(2)小鼠肺指数抑制率:利巴韦林<ESF小剂量

<ESF中剂量<ESF大剂量;实时荧光定量显示ESF组的小鼠肺组织中RSV 基因表达丰度较低;观察小鼠肺组织HE染色病理切片,ESF对RSV感染小鼠的肺组织保护作用较好。

(3)体外抗EV71初步机理实验证明直接杀灭组的ESF抑毒指数为512,大于预防组(32)和治疗组(8);实时荧光定量显示ESF组的EV71基因表达丰度低;荧光显微镜观察发现GFP-EV71活性与ESF浓度成反比关系。基因芯片筛选出差异性

显著的通道与基因本体,既有上调,也有下调。

结论:羊栖菜对RSV及EV71有良好的抗病毒效用,ESF浓度越高对RSV肺炎小鼠的肺组织保护作用越好,而且ESF对EV71的直接灭活作用最强,在EV71侵染细胞前即能将其杀灭。对于治疗作用中ESF对宿主细胞的作用,基因芯片实验筛选出了一系列通道和基因,后续还需要进行一些实验如westernblot证明。