红外分光光度法SOP

1．目的

建立红外分光光度法的标准操作规程，使操作过程规范化。

2．职责

质量部负责本文件的起草，检验员严格按操作规程进行检验，质量部经理负责监督检查执行情况。

3．适用范围

适用于红外分光光度法测定。

4．内容

4.1.简述

分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的光吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

4.1.1.基本原理由光源发出的光，被分为能量均等对称的两束，一束为样品光通过样品，另一束为参考光作为基准。这两束光通过样品室进入光度计后，被扇形镜以一定的频率所调制，形成交变信号，然后两束光和为一束，并交替通过入射狭缝进入单色器中，经离轴抛物镜将光束平行地投射在光栅上，色散并通过出射狭缝之后，被滤光片滤除高级次光谱，再经椭球镜聚焦在探测器的接收面上。探测器将上述交变的信号转换为相应的电信号，经放大器进行电压放大后，转入A/D转换单位，计算机处理后得到从高波数到低波数的红外吸收光谱图。

4.1.2.常用波长范围为：（1）200～400nm的紫外光区；（2）400～760nm的可见光区；（3）760～2500nm的近红外光区；（4）2.5～25µm(按波数计为4000～400cm-1)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

4.2.仪器：

红外分光光度计通常由光源，单色器，探测器和计算机处理信息系统组成。根据分光装置的不同，分为色散型和干涉型。对色散型双光路光学零位平衡红外分光光度计而言，当样品吸收了一定频率的红外辐射后，分子的振动能级发生跃迁，透过的光束中相应频率的光被减弱，造成参比光路与样品光路相应辐射的强度差，从而得到所测样品的红外光谱。

可使用傅里叶变换红外光谱仪或色散型红外分光光度计。傅里叶变换红外光谱是利用迈克尔逊干涉仪将检测光(红外光)分成两束，在动镜和定镜上反射回分束器上，这两束光是宽带的相干光，会发生干涉。相干的红外光照射到样品上，经检测器采集，获得含有样品信息的红外干涉图数据，经过计算机对数据进行傅里叶变换后，得到样品的红外光谱图。傅里叶变换红外光谱具有扫描速率快，分辨率高，稳定的可重复性等特点，被广泛使用。[色散型红外分光光度计是利用分光镜将检测光(红外光)分成两束，一束作为参考光，一束作为探测光照射样品，再利用光栅和单色仪将红外光的波长分开，扫描并检测逐个波长的强度，最后整合成一张谱图。1]

4.3.仪器的校正

用聚苯乙烯薄膜(厚度约为0．04mm)校正仪器，绘制其光谱图，用3027cm-1，2851cm-1，l601cm-1，l028cm-1，907cm-1处的吸收峰对仪器的波数进行校正。傅里叶变换红外光谱仪在3000cm-1附近的波数误差应不大于±5cm-1，在l000cm-1附近的波数误差应不大于±1cm-1。

用聚苯乙烯薄膜校正时，仪器的分辨率要求在3110～2850 cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰，峰2851cm-1与谷2870cm-1之间的分辨深度不小于l8％透光率，蜂l583cm-1，与谷1589cm-1之间的分辨深度不小于l2％透光率。仪器的标称分辨率，除另有规定外，应不低于2cm-1。

4.4供试品的制备及测定

4.4.1．原料药鉴别除另有规定外，应按照中国兽药典委员会编订的《兽药红外光谱集》收载的各光谱图所规定的方法制备样品。具体操作技术参见《兽药红外光谱集》的说明。

采用固体制样技术时，最常碰到的问题是多晶现象，固体样品的晶型不同，其红外光谱往往也会产生差异。当供试品的实测光谱与《兽药红外光谱集》所收载的各标准光谱不一致时，在排除各种可能影响光谱的外在或人为因素后，应按该兽药光谱中备注的方法或各品种项下规定的方法进行预处理，再绘制光谱，比对。如未规定该品种供药的晶型或预处理方法，则可使用对照品，并采用适当的溶剂对供试品与对照品在相同的条件下同时进行重结晶，然后依法绘制光谱，比对。如已规定特定的药用晶型，则应采用相应晶型的对照品依法比对。

当采用固体制样技术不能满足鉴别需要时，可改用溶液法绘制光谱后比对。

4.4.2.制剂鉴别品种鉴别项下应明确规定制剂的前处理方法，通常采用溶剂提取法。提取时应选择适宜的溶剂，以尽可能减少辅料的干扰，并力求避免导致可能的晶型转变。提取的祥品再经适当干燥后依法进行红外光谱鉴别。

4.4.3.多组分原料药鉴别不能采用全光谱比对，可借鉴【注意事项】“(2) (3)”的方法，选择主要成分的若干个特征谱带，用于组成相对稳定的多组分原料药的鉴别。

4.4.4.晶型、异构体限度检查或含量测定供试品制备和具体测定方法均按各品种项下有关规定操作。

4.5注意事项

4.5.1各品种项下规定“应与对照的图谱一致”，系指《兽药红外光谱集》所载的图谱。

4.5.2药物制剂经提取处理并依法绘制光谱，比对时应注意以下四种情况：

4.5.2.1.辅料无干扰，待测成分的晶型不变化，此时可直接与原料药的标准光谱进行比对；

4.5.2.2.辅料无干扰，但待测成分的晶型有变化，此种情况可用对照品经同法处理后的光谱比对；

4.5.2.3.待测成分的晶型不变化，而辅料存在不同程度的干扰，此时可参照原料药的标准光谱，在指纹区内选择3～5个不受辅料干扰的待测成分的特征谱带作为鉴别的依据。鉴别时，实测谱带的波数误差应小于规定值的0.5％；

4.5.2.4.待测成分的晶型有变化，辅料也存在干扰，此种情况一般不宜采用红外光

谱鉴别。

4.5.3.由于各种型号的仪器性能不同，供试品制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光谱的形状。因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造成的影响。

5.编制依据：《中国兽药典》二0一0年版一部附录第28页。

《中国兽药典》二0一0年版二部附录第28页。