嗜酸乳杆菌细菌素的分离纯化及表面活性剂对其活性的影响

ｃ ｎ ｉ ｃ ｕ ｅ ｈ ｅ ｐ ｒ ｔｏ ｓ ｉ ｎ ｌ ｄ ｓ ｔ ｒ ｅ ｏ ｅ ａ ｉ ｎ ，ｗｈ ｃ ｅ ａ ａ ｅ ｙ ａ ｅ ａ ｉ ｈ ｓ ｐ ｒ ｔ ｌ ｒ ｍｍ ｏ ｉ ｍ ｕ ｆ ｔ ｒ ｃ ｐ ｔ ｔｏ ｎ ｕ ｓ ｌａ ｅ ｐ ｅ ｉ ｉａ ｉ ｎ，ｉ ｎ ｅ ｃ ａ ｇ ｈｒ ｍ ａ ｏ ｘ ｈ ｎ ｅｃ ｏ —
Ｐｕ ｉ ｃ ｉ ｎ ｏ ｈ ｃｅ ｉ ｃｎ Ｉｏ ａ ｅ ｒ ｍ ｃｏ ａ ｉｌ ｓａ ｉ ｏ ｈ ｌ ｓ ｒｆ ａｔ ｆ ｔ ｅ Ｂａ ｔｒｏ ｉ ｓ ｌ ｔｄ ｆｏ Ｌａ ｔ ｂ ｃ ｌ ｃｄ ｐ ｉ ｉ ｏ ｕ ｕ ａ ｄ Ｅｆｅ ｔｏ ｕ ｆ ｃ ａ ｔｏ ｈ ｔ ａ ｔｒａ ｔ ｉ ｆＢａ ｔ ｒｏ ｉ ｎ ｆ ｃ ｆＳ ｒ ａ ｔ ｎ ｎ ｔ ｅ Ａｎ ｉ ｃ ｅ ｉ ｌＡｃｉ ｔ ｏ ｃｅ ｉｃｎ ｂ ｖ ｙ
作 用 … 。通 过 对 嗜 酸 乳 杆 菌 中细 菌 素 的 分 离 纯 化 的研
究 ， 食 品 的保 鲜 材 料 提 供 物 质 基 础 。 为
ｌ 材 料 与 方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
随着 社 会 进 步 和全 民食 品健 康 、 全 意 识 的 增 强 ， 安
广 大 消 费 者 越 来 越 关 心 食 品 的 安 全 性 问 题 。在 欧 洲 、
１３ ３ 细 菌 素 的盐 析 分 离 ．．
第 ５期
本 研 究 使 用 的 冻 藏 菌 株 使 用 前 活 化 ２次 ， 用 使
ＭＲＳ肉汤 培 养 基 （ 种 量 ２ ） ３ ℃ 培 养 ２ ｈ 接 ，７ ４。
嗜酸乳杆菌在 ｐ ． Ｈ６ ０的 产 细 菌 素 培 养 基 中 恒 温 培 养 ， 心 分 离 细 胞 ， 清 液 在 ４ 下 用 新 华 一 号 滤 离 上 ℃
１ ３ 实 验 方 法 ．
１ ３ ４ 细 菌 素 的 纯化 ．． 采 用 ｃ ｒｏ ｙ ｔｙ Ｃ ）Ｓ ｐ ａｏｅ柱 （ ｃ × ａｂ ｘ ｍｅｈ ｌ（ Ｍ － ｅ ｈ ｒ ｓ ２ｍ ８ ５ｃ ， ０ ０ Ｍ Ｈ５ ０乙 酸 钠 缓 冲 液 平 衡 ， 衡 ． ｍ） 用 ． ５ ｐ ． 平
Ａｂ ｔａ ｔ Ｂａ ｔ ｒｏ ｉ ｉｈ ｉ ｉｄ ｏ ｒ ｔｉ ｔ ｎ ｉ ａ ｔ ｒａ ｃ ｉｉｙ ｉ ｒ ｄ ｃ ｄ ｆｏ Ｌａ ｔｂ ｃ ｌｕ ｓｒ ｃ ： ｃｅ ｉｃｎ ｗｈ ｃ ｓ ａ ｋｎ ｆｐ ｏ ｅｎ ｗｉｈ ａ ｔｂ ｃｅ ｉｌａ ｔ ｔ ｓｐ ｏ ｕ ｅ ｒ ｍ ｃｏ ａ ｉｌ ｓ ｖ
ａ ｉ ｐｈ ｌ ｓ，ａ ｄ ｔ ｅ ｓｒ ｉ ｓｉｏ ａ ｅ ｒ ｍ ｆｒｇｒ ｉ ｅ ｅ ｖ ｄ ｉ ｈ ａ ． Ｔｈ ｅ ａ ａ ｉｎ ｍ ｅ ｈ ｄａ ｏ ｔ ｃｄｏ ｉｕ ｎ ｈ ｔａｎ ｉ ｓ ｌｔ ｄ ｆｏ ｋｅｉ ａｎｐｒ ｓ ｒ ｅ ｎ ｔ ｅ ｌｂ ｅｓ ｐ ｒ ｔｏ ｔ ｏ ｂ ｕ ｂ ｃｅ ｉｃｎ ａ ｄ ｔ ｎ ｌ ｅ ｃ ｆｔ ｅ ｄｆｅ ｅ ｔｓ ｒａ ｔ ｎ ｓｏ ｈ ｎ ｉ ａ ｔ ｒａ ｃｉ ｉｙｏ ａ ｔ ｒｏ ｉ ｓｓ ｕ — ａ ｔ ｒｏ ｉ ｎ ｈｅｉ ｆｕ ｎ ｅｏ ｈ ｉｆ ｒ ｎ ｕ ｆ ｃａ ｔ ｎ ｔ ｅａ ｔｂ ｃｅ ｉ ｌ ｔｖｔ ｆｂ ｃｅ ｉ ｃｎ ｉ ｔ ｄ ａ
在 体 内蓄 积 而 引 起 不 良作 用 。而 且 其 具 有 热 稳 定 性 ，
嗜 酸 乳 杆 菌 （ ａ ｔｂ ｃｌｕ ｃｄ ｐ ｉｕ ） 天 然 存 Ｌ ｃｏ ａ ｉｌｓａ ｉ ｏ ｈ ｌｓ 是
在 于 人 和 动 物 的 胃肠 道 的 益 生 菌 ， 于 乳 杆 菌 科 乳 杆 属
ｉ ｄ Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗ ｈ ｔＬａｃ ｏ ａｃ ｌ ｕ ｃ ｄｏ ｈｉｕｓ ｉ ｕｌｕ ｅ ｎ Ｍ ＲＳ ｍ ｅ ｉ ｍ ｄ ｉ ｄ ｏ ｅ ｃ ａ ｉ ｆ ｅ ｅ ． ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｔ ａ ｔ ｂ ｉｌ ｓａ ｉ ｐ ｌ Ｓ ｃ ｔ ｒ ｄ ｉ ｄ ｕ ａ ｄ ｎ ｌ ｉ ｃ ｄ ａ ｔ ｒ
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１ ３ １ 嗜 酸 乳 杆 菌 的培 养 ．． １ ３ １ １ 生 长 曲线 与 细 菌 素 活 力 曲线 ． ．． 嗜 酸乳 杆 菌 （ Ｌ．ａ ｉ ｏ ｈ ｌｓ ｃｄ ｐ ｉ ）首 先被 活化 ２次 ， ｕ 然
液 流 速 １ ／ ｎ 待 组 分 Ｉ 上 样 后 ， ０ ７ Ｍ ｍＬ ｍｉ。 用 ．０ ３ ｐ ． Ｈ５ ０乙 酸 钠 缓 冲 液 洗 脱 ， 在 ２ ０ ｍ 波 长 处 无 吸 至 ８ｎ
第 ５期 （ 第 １ Ｏ期 ） 总 ２
２１ ０ ２年 １ ０月
中 国 林 副 特 产
Ｆｏ ｅ ｔＢｙ Ｐｒ ｕｃ ｎ ｒ ｓ — ｏｄ ｔａ ｄ Ｓｐｅ ｉｌｔ ｎ Ｃｈ ｎａ ｃａ ｉｙ ｉ ｉ
Ｎ Ｏ （ Ｓ （．１ Ｏ ．５ Ｇ Ｎ ） ２ ） Ｏ ｃ ．２ １ ｔ ０２
细 菌 素 分 离纯 化 研 究 包括 三 个步 骤 ： 酸 铵 沉 淀 、 硫 离子 交 换 色谱 （Ｅ 和 疏 水 作 用 色谱 （ Ｃ） Ｉ Ｃ） ＨＩ 。不 同 类
型 的 表 面活 性 剂 对 细 菌素 的 抑 菌活 性 具 有 不 同 的影 响 。
关 键 词 ： 菌 素 ； 酸 乳 杆 菌 ； 面活 性 剂 ； 茵 活 性 细 嗜 表 抑
日本 等 国 家 微 生 态 制 剂 ， 起 高 效 性 和 安 全 性 受 到 广 引
泛 瞩 目。科 学 工 作 者 已 就 细 菌 素 的稳 定 性 及 生 理 生 化
嗜酸 乳 杆 菌 （ ．ａ ｉ ｏ ｈ ｌｓ 分 离 自开 菲 尔粒 ） Ｌ ｃｄ ｐ ｉｕ ，
指 示 菌株 ： 氏乳 杆 菌 （ ．ｄ ｌｒ ｅｋｉ ｕ ｓ 德 Ｌ ｅｂ ｕ ｃ ｉ ｓｂｐ．１ｃ ａ一
１ ｕ ｔ ｒ ，ａ ｐ ａ ｆｔ ｅｂａ ｔ ｒｏ ｉ－ ｒ ｄｕ ｉｇ ｉ ｅ ｃ ｅ ．Ａ ｎ ｅ ｐ ｒｆｃ ｔｏ ｅ ｈ ｄ ａ ｕｔｂ ｃｅ ｉ — ｈ ｃ ｌｕ ｅ ｅ ｋ ｏ ｈ ｃ ｅ ｉｃｎ ｐ ｏ ｃｎ ｓｒ ａ ｈ ｄ ６ ｄ Ｔｈ ｕ ｉ ａ ｉｎ ｍ ｔ ｏ ｂｏ ａ ｔ ｒｏ ｉ
琼 脂 平板 培 养 基 ： 脂 粉 １ ５ （ ｖ 。 琼 ． ｗ／ ） 软琼 脂 培 养 基 ： 肉 汤 培 养 基 中 加 入 琼 脂 粉 向
０ ７ （ ｖ 。 ． ５ ｗ／ ）
纸过滤 ， 以使 油酸与细菌素 分离 。存在 于上 清液相 中
的 细 菌 素 采 用 硫 酸 铵 盐 析 法 （ ０ ｇ Ｌ 粗 分 离 ， 酸 铵 ４ ０／ ） 硫 与 上 清 液 混 合 物 在 ４ 下 冰 箱 内 静 置 过 夜 ， 心 ℃ 离 （ ０ ０×ｇ ３ ｒｉ） 离 沉 淀 物 。 收集 的 沉 淀 物 然 后 再 ８０ ，０ ｎ 分 ａ 复 溶 于 ０ ０ Ｍ 醋 酸 钠 缓 冲 液 （ Ｈ５ ０ 中 ， ＂ 用 截 ．５ ｐ ． ） ４Ｃ下 留分 子量 为 １ Ｄａ的 膜 对 相 同 的 缓 冲 液 透 析 过 夜 ， ｋ 得
组 分 Ｉ。
产 细 菌 素 培 养 基 ： Ｓ肉汤 培 养 基 配 方 中 用 油 酸 ＭＲ 替 代 Ｔｗｅｎ８ 油 酸用 量 为 ０ １ （ ／ ） ｅ Ｏ， ． ｖ ｖ 。
１ ２ 实 验 仪 器 ．
恒 温 培 养 箱 ， Ｌ磁 力 搅 拌 玻 璃 发 酵 罐 ， 容 量 低 １ 大 温 离 心 机 ， 析 柱 ，自 动 部 分 收 集 器 ， 外 检 测 器 ， 层 紫 ０４Ｆ ． ５ ｍ醋 酸 纤 维 素 滤 膜 。
收 稿 日期 ： Ｏ ２ ０ — １ ２１— ７ ６ １ 基金 项 目： 龙 江省 科 技 厅 科 技 攻 关计 划 重 大项 目（ ） 黑 ＧＡＯ Ｂ Ｏ — ） 助 ７ ４ １２ 资
１
２１ ０ ２血
ｔｓ ＤＳ ０ ６， ） ｉ， Ｍ ２ ０７ Ｓ
中 国 林 副 特 产
嗜 酸 乳 杆 菌 细 菌 素 的 分 离 纯 化
及 表 面活 性 剂 对 其 活 性 的影 响 ）
张 帅 ， 金 凤 ， 永 强 王 马
（ 尔 滨 商 业 大学 食 品 工 程 学 院 ， 哈 哈尔 滨 １ ０ ７ ） ５ ０ ６
摘 要 ： 本 研 究 室保 藏 的 一 株 来 自于 凯 菲 尔粒 的嗜 酸 乳 杆 菌培 养基 质 中 分 离 出具 有 抑 茵 活性 的 蛋 白 从
并 耐 酸 、 低 温 贮 藏 ； 食 品 的 口感 、 等 无 不 良影 耐 对 味 响 ； 的使 用 可 以 减 弱 杀 菌 强 度 ， 少 杀 菌 时 间 ， 利 它 减 有
于 保 持 食 品原 有 的 营养 价值 和 风 味 。
菌 属 （ ｎ 幻 ｃ “ ） 对 维 持 胃肠 道 的 生 理 功 能 有 重 要 Ｌｃ ，
Ｚｈ ｎ ｈ ａ Ｗ ａ ｇ Ｊｎｆｎ Ｍ ａ Ｙｏ ｇ ｉｎ ａ ｇ Ｓ ｕ ｉ， ｎ ｉ ｅ ｇ， ｎ ｑａ ｇ （ ｒ ｉ Ｈａ ｂｎ Ｕｎｉｅ ｓｔ ｆＣｏ ｍ ｅ ｃ ，Ｃｏ ｌｇ ｆＦｏ ｄ Ｅｎ ｉ ｅ ｒｎ ， Ｈａ ｂｎ ｌ ０ ７ ） ｅ
合 成 抑 菌 剂 的物 质 。
核 糖 体 合 成 机 制 产 生 的一 类 具 有 抑 菌 活性 的 多 肽 或 前 体 多 肽 ， 要 含 有 具 生 物 活 性 的蛋 白质 部 分 ， 同种 近 主 对 缘 菌株 呈 现狭 窄 的 活性 抑 制 谱 ］ 由 于 细 菌 素 可 被 人 。 体 消化 道 中 的一 些 蛋 白酶 （ 胰 蛋 白 酶 ） 降 解 ， 会 如 所 不
组 分 —— 细 菌 素 ， 该 嗜 酸 乳 杆 菌所 产 生 的 细 菌 素 的分 离 方 法 及 表 面 活 性 剂 对 其 抑 菌 活 性 的 影 响 作 用 对 进 行 了研 究。 结 果 表 明 ， 酸 乳 杆 菌在 添 加 了油 酸 的 ＭＲＳ培 养 基 中培 养 １ ｈ后 达 到 产 细 菌 素 高 峰 ； 嗜 ６ 对
细 菌 素 （ ａ ｔｒｏ ｉ） 由细 菌 在 代 谢 过 程 中通 过 ｂ ｃｅｉｃ 是 ｎ
等 方 面 进 行 了较 为 深 入 的 研 究 。研 究 结 果 显 示 ， 菌 细 素 不但 具 有抗 细 菌 、 真 菌 的作 用 ， 具 有 抗 寄 生 虫 等 抗 还 方面的功能 ， 在食 品保 鲜 方 面 ， 望 成 为 替 代 某 些 化 学 可