微生物纯培养的方法

一、固体培养基分离

1、稀释倒平板

特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。

2、涂布平板法

特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。

3、平板划线法

特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。

应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。

4、稀释摇管法

特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。

应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。

二、液体培养基分离

1、稀释法

特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。

应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。

2、富集培养

特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。

应用：

（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；

（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

三、显微操作

单细胞（孢子）挑取

特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。

应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。