大肠菌群检测方法中文翻译
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法大肠菌群检测是指对人体肠道内的微生物群落进行检测和分析，以了解肠道微生态环境的健康状况。
大肠菌群在人体健康中起着至关重要的作用，它与营养吸收、免疫调节、代谢调节等多个方面密切相关。
因此，对大肠菌群的检测方法的研究和应用具有重要的临床意义。
目前，常用的大肠菌群检测方法主要包括，16S rRNA 基因测序、荧光原位杂交技术（FISH）、实时荧光定量PCR技术、拟南芥芯片技术等。
其中，16S rRNA 基因测序是目前应用最为广泛的一种方法。
该方法通过对肠道微生物的16S rRNA基因进行测序和分析，可以准确地鉴定出肠道微生物的种类和数量，为进一步研究肠道微生物群落结构和功能提供了重要的数据支持。
荧光原位杂交技术（FISH）是一种通过用荧光标记的核酸探针对特定微生物进行检测和定量的技术。
该方法能够直接在样本中观察到目标微生物的分布和数量，具有较高的特异性和灵敏度，适用于对微生物的定量和形态特征进行研究。
实时荧光定量PCR技术是一种基于PCR扩增和荧光探针检测的方法，可以对微生物的数量进行快速、准确的定量分析。
该方法操作简便、灵敏度高，适用于临床样本的快速检测和定量分析。
拟南芥芯片技术是一种通过芯片上固定的核酸探针对微生物进行高通量检测和分析的方法。
该技术可以同时对多个微生物进行检测，具有高通量、高灵敏度的特点，适用于对微生物群落结构和功能进行整体性的研究。
总的来说，大肠菌群检测方法的选择应根据研究目的、样本特性、实验条件等因素进行综合考虑。
不同的检测方法各有优势和局限性，需要根据具体情况进行选择和应用。
随着技术的不断发展和进步，相信大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体肠道微生物群落的研究提供更加可靠的技术支持。
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。
本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。
一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。
在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。
1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。
缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。
2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。
该方法已被最可能数(MPN)法所替代。
3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。
在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。
三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。
一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。
2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。
例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。
3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。
mpn法检测大肠菌群的原理
mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家好，今天咱们聊聊MPN法，也就是最可能数法，这可是检测水中大肠菌群的“神器”呢！MPN法的英文全名是“Most Probable Number”，翻译过来就是“最可能数”。
听起来是不是很神秘？其实它就是一种通过统计学的方法来估算水里大肠菌群的数量，通俗点说，就是看水中藏着多少小“坏蛋”。
首先，MPN法听起来有点复杂，其实它的工作原理还挺简单的。
咱们可以把它理解成一种通过“打样”的方法来找出水中的大肠菌群到底有多少。
这就好比我们去商场逛街，看到一件漂亮的衣服，试穿了几件差不多款式的，最终决定了买哪一件。
MPN法也是这样，它通过一系列的实验，来估算大肠菌群的数量。
要知道，大肠菌群这家伙可是影响水质的重要因素，所以咱们得好好了解一下它们的情况。
2. MPN法的基本步骤2.1 采样和稀释说到MPN法，首先要做的就是采样。
就像咱们去商场挑衣服一样，第一步是挑选你想要的样品。
这里咱们的样品是水，特别是那些咱们平时喝的水，或者用来洗菜、做饭的水。
这些水可得小心处理，不然大肠菌群的数量会被弄得不准确。
采样之后，我们需要把水样进行稀释。
稀释的目的是为了减少水中大肠菌群的浓度，使得后续的实验更容易操作。
这个过程就像是调配饮料时，加水稀释一样。
稀释得越多，水样中的细菌浓度就越低。
这样做是为了确保在实验时，能准确地找出大肠菌群的数量。
2.2 培养和观察接下来，我们把稀释后的水样放到培养基里去培养。
培养基是一种特殊的营养液，可以让细菌在里面繁殖。
就像给植物提供土壤一样，培养基给细菌提供了生长的环境。
这个过程需要一点时间，一般来说，细菌在培养基里待24到48小时，就可以看到结果了。
观察结果的时候，我们需要注意培养基的变化。
如果水样中有大肠菌群，它们会在培养基中产生一些气体或者改变颜色，这就像是植物长出了新芽一样。
通过观察这些变化，我们可以判断水样中是否有大肠菌群存在。
如果培养基的颜色发生了变化，那就意味着水中有大肠菌群，咱们可以进一步计算它们的数量。
食品中大肠菌群检测及注意事项
食品中大肠菌群检测及注意事项大肠菌群(Coliform bacteria)是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中是否有污染肠道致病菌的可能。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界中广泛存在。
检测方法MPN检索表使用GB/T 4789.3-2023检索表中阳性管数是以1mL(g)×3、0.1mL(g)×3和0.01mL(g)×3的梯度进行表示，GB 4789.3-2023阳性管数是以0.10、0.01和0.001的梯度表示,均根据稀释倍数推算结果，结果相同。
推算方法以GB 4789.3-2023为例，改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)时，表内数字应相应降低10倍;如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)时,则表内数字应相应增高10倍,其余类推即可。
常用标准常见问题及解答1、如何选择检测方法？答：你要依据产品的执行标准去选择检测方法，不是说你喜爱那种就可以用那种。
2、03版的结果能不能和10版的结果进行换算和比较？答：其实换算是不行的，这个两个不同的标准。
假如只是进行比较两个结果是可以的，但是不建议。
3、同一批产品，检测的两份结果不一样，是不是那里出问题？答：其实不是出问题，这个是正常的，同一批产品不代表他们的微生物检测结果是一模一样的，假如是这样也没必要做五份去验证产品合格了吧？假如说同一份样品（制成一份样）消失结果差好远的话，这里就要去分析那里出问题。
样品采集怎样采样，才能使样品具有代表性？这里将样品分为两类：预包装食品和散装食品或现场制作食品1、对于预包装食品① 应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品，每件样品的采样量应满意微生物项目检验的要求。
② 独立包装小于、等于1000g 的固态食品或小于、等于1000mL 的液态食品，取相同批次的包装。
大肠菌群的测定(精)
大肠菌群的测定
－－注意事项
如何避免放小倒管时产生气泡（大肠菌群检测）？ 客户要求大肠菌群＜３／ml(g),请问如何检测和报 告？ 伊红美蓝是鉴别培养基，请问鉴别的原理是什么？
大肠菌群的测定
－－快速检测方法 LTSE快速检测法： 纸片快速法 TTC（氯化三苯四氮唑）显色快速法 DC（去氧胆酸钠）半固体试管快速法
大肠菌群的测定
大肠菌群的测定
－－基本概念
大肠菌群指一群37℃、24h能发酵乳糖，产酸，产气，需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，以此作为粪便污染指标来评价 食品的卫生质量。 大肠菌群包括大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴 沟肠杆菌等。大肠菌群的来源分粪便来源和非粪便来源，在44.5℃仍能生长的 大肠菌群，称为粪大肠菌群，粪大肠菌群又叫耐热大肠菌群，在人和动物粪便 中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群对粪便污染的 指示作用更为直接和贴切，主要就是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属，正是 由于包括了克雷伯氏菌属，使其与粪便污染的相关性受到了影响。 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌这三个指标在实际工作中都在应用，但用途 有所不同，一般认为大肠菌群是水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指 标，粪大肠菌群主要用于贝类和贝类养殖用水的卫生指标，大肠杆菌用于指示 食品受到近期粪便污染或不卫生加工。 大肠菌群表示方法：MPN（ most probable number） /100mL 。
大肠菌群的测定
－－乳糖发酵法（国标）
检验稀释 取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同。 乳糖发酵试验 根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳 糖胆盐发酵管。置36±1℃温箱内,培养24±2小时,如所有发酵管都不产气,则可报告为大 肠菌群阴性,如有产气者,则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。 分离培养 将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置 36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。 证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃ 温箱培养24±2小时,观察产气情况,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可 报告为大肠菌群阳性. 报告 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 结果
大肠菌群计数检验重点
第二法： 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。
A
一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。
B
从10-1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。
C
从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。
溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。
01
胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。
01
分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。
01
原理
1 产气 2 不产气
大肠菌群是指一群在37°C培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
01
作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义
食品中大肠菌群数系以每100g（或mL）检样内大肠菌群最可能数（the most probablenumber-简称MPN）表示。
03
大肠菌群计数检验
旧国家标准
第二天
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则(中英文对照版)
大肠杆菌的检测:大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料1.1 温箱:36±1℃。
1.2 冰箱:0~4℃。
1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3.1 检样稀释3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
日本大肠菌群的检测方法(中文)
第4章 E.coli（大肠杆菌）E.coli検査程序使用培養基的制作程序１）ＥＣ培養基（栄研器材，訂貨号：E-MB34）①培養基計量：ＥＣ培養基37g加純水1000ml的比率混合加温溶解。
②分注：中試管内分別注入合適的量（約10ml）、放入達拉哈姆管、蓋上PP蓋。
③滅菌：高温滅菌器滅菌（121℃,15分）后、流水急速冷却。
使用達拉哈姆管内無気泡的。
※中試管和達拉哈姆管不需要滅菌、但要使用洗浄并干燥過的。
※達拉哈姆管管必須開口向下放入試管。
※培養基作成后、可以在常温下保存約2周。
※毎個検体使用本培養基（10ml／1支試管）×6支試管＝60ml左右。
２）EMB寒天培養基（栄研器材，訂貨号：Ｅ－ＭＡ13）①培養基計量：EMB寒天培養基40g加純水1000ml的比率混合溶解。
②滅菌：高温滅菌器滅菌(121℃、15～20分)。
③分注：充分混合后、滅菌培養皿内分別注入約20ml、静置。
④干燥：使用之前在恒温箱内使培養基表面干燥。
予先多作成的場合、放于冷蔵庫保管、毎次使用要先使表面干燥。
３）乳糖肉湯培養基（BTB加乳糖肉湯培養基、栄研器材，訂貨号：E-MB67）①培養基計量：乳糖肉湯培養基18g加純水1000ml的比率混合加温溶解。
②分注：放入達拉哈姆管、中試管内分別注入合適的量（約10ml）。
③滅菌：高温滅菌器滅菌（121℃、15分）后、流水急速冷却。
使用達拉哈姆管管内無気泡的。
E.coli検査方法［EC培養基摂取］：滅菌袋内加入試料25g和225ml滅菌希釈液、用均質器処理60秒后、攪拌混合。
根据社内品質・衛生管理標準集Ⅰ的分類、按需要準備希釈的倍率。
明確標有「0/3 100倍」標準的場合、需準備10倍、100倍希釈液。
明確標有「0/3 10倍」標準的場合、需準備10倍希釈液。
：希釈液各取1ml接種到EC試管里（毎1希釈倍率3支）。
：44.5±0.2℃温度下培養24小時。
：有気体産生時（3支中1支以上）判断其呈陽性。
大肠菌群检验方法及操作方法
大肠菌群检验方法及操作方法1、什么是大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。
2、大肠菌群的组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
3、大肠菌群的测定意义◆粪便污染的指标菌：大肠菌群或粪大肠菌群◆以大肠菌群作为粪便指标菌原因：1)在粪便中数量最大；2)在外环境中存活的时间与致病菌大体相同；3)检测方法简便容易。
◆大肠菌群的测定意义：1)判断食品中否受到粪便污染。
2)有利于控制肠道传染病的发生和流行。
3)有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况。
4、大肠菌群的生物学特性1 形态与染色：革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌。
2 发酵乳糖产酸产气3 培养特性：在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；4 在麦康凯琼脂上的典型菌落：呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。
5、大肠菌群检验方法及操作方法◆国家标准：◆三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验)◆行业标准：◆两步法：推测试验→证实试验表1 大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征MPN法简介Most Probable Number Method最大可能数•对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
•MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
6、粪大肠菌群的检验•粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
•于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃24h产气的一群细菌；在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h 内产生吲哚的耐热大肠菌群。
检验方法：7、检验注意事项1）从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法
大肠菌群的定义大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。
大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。
与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
卫生学意义大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。
食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。
近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性基本形态：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。
约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。
多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
大肠菌群检验
第六页，共13页。
MUGal肉汤：
胰蛋白胨20g
氯化钠5g
无水磷酸氢二钾2.75g
无水磷酸二氢钾2.75g
月桂基硫酸钠0.1g
MUGal0.08g
水1000ml
加热使溶化，调Ph7.4，分 装试管，每管10ml，116℃ 高压灭菌10min。待培养基 冷却后，以无菌手续在每管 培养液内加入0.1mL经过滤 除菌的500ug/mL头孢磺啶稀 释液。
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶
茜素-β-D-半乳糖苷
茜素—Fe.NH4.Al.K（紫色和红色）
第十页，共13页。
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂（Alig-
gal琼脂）：
Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g
氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g
异丙基硫代半乳糖苷0.03g
硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g
琼脂15g
蒸馏水1000mL。
调Ph7.4
第十一页，共13页。
2、试验情况简介
• Aliz-gal检测食品中大肠菌群可在18-24h内显示出半乳糖苷
酶反应，在同类性质的酶底物中，Aliz-gal的用量较低， 做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明显。 • 由于采用测定β-半乳糖苷酶的方法易于检出迟缓发酵乳 糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌。所以，本试验与4-甲基 伞形酮-β-D-半乳糖苷试验所得阳性结果都比各自的对比 培养基的高。 • 试验证明用Aliz-gal作β-半乳糖苷酶底物以平板直接计数 检测食品中的大肠菌群，具有特异性强、速度快、准 确率高、结果稳定的特点，可作为标准方法加以应用。
快速。
➢ 测定ß-半乳糖酶常用的底物有4-甲基伞形酮-ß-D半乳糖苷（MUGal）、5溴-4氯-3-吲哚-ß-D-半乳糖苷（X-gal）、3，4-环已酮-ß-D-半乳糖苷和 8-羟基喹啉-ß-D-半乳糖苷等。
水的大肠菌群检测方法
水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。
然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。
其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。
高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。
因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。
以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。
该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。
这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。
2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。
该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。
这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。
3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。
该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。
最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。
PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。
同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。
4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。
大肠菌群的检验方法
大肠菌群的检验方法
大肠菌群是指人体肠道内的一类细菌群落，对人体健康有着重要的影响。
检验大肠菌群的方法主要包括以下几种：
1. 粪便培养法，通过采集患者的粪便样本，将其培养在含有特定营养物质的培养基上，利用培养基的选择性和差异培养特性，可以筛选出大肠菌群中的细菌，并对其进行鉴定和计数。
2. 分子生物学方法，包括PCR（聚合酶链式反应）、16S rRNA 基因测序等技术，通过检测特定基因序列或者DNA指纹图谱来确定大肠菌群的成分和数量。
3. 生化检测法，通过测定粪便中的各种生化指标，如pH值、氨氮含量等，来间接反映大肠菌群的代谢活动和数量。
4. 荧光原位杂交技术（FISH），利用荧光探针对大肠菌群中的特定细菌进行染色和检测，可以直观地观察其在肠道内的分布和数量。
5. 免疫学检测法，通过检测粪便中的特定抗原或抗体水平，来
间接反映大肠菌群的情况，如检测肠道病原菌的抗原或特定免疫球蛋白的水平。
总的来说，不同的检测方法各有优势，可以综合应用以获得更全面和准确的大肠菌群信息。
这些方法可以帮助医生评估肠道菌群的健康状况，指导治疗和调整饮食，对于维护肠道健康和预防疾病具有重要意义。
FDA方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法（中文）
FDA方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法(海博译)大肠杆菌和大肠菌群计数方法Enumeration of Escherichia coli and the coliform章节内容：•传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法•LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）•瓶装水检测方法•贝类和贝类肉制品检测方法•柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法•大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法•参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。
大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。
虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。
某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。
1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。
由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。
再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。
与已知的非产气致病菌容易区别开来。
因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。
肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂。
于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。
1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。
虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。
于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。
首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。
大肠菌群检测(MPN法)
接种到BGLB肉汤
结果报告
根据大肠菌群阳性管数, 查MPN检索表，报告每 g (mL)样品中大肠菌群的MPN值。
根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表
MPN：MPN（最可能数）是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的 估算值，并不是样品中活菌数的真值。
阳性管数
粪大肠菌群计数MPN法
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍稀释
不产气
选择3个连续稀释度样品匀液接种LST
36℃±1℃
48±2h
产气
根据阳性管数, 查 MPN检索表，同大肠 菌群。
EC肉汤 45℃±0.2℃ 24±2h
不产气
产气
粪大肠菌群阳性管
查MPN表，报告结果
不产气
大肠杆菌计数MPN法
培养基主要成分作用
归纳总结
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。 ②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。 ③乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌 群和肠道致病菌。 ④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所 产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀 。
粪大肠菌群 （Fecal colifoms）
指在44.5℃培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏 阴性无芽孢杆菌。
北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA；而欧洲使用 “耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”，如NMKL。
与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不 代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关 的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
食品中大肠菌群的检验
食品中大肠菌群的检验简介大肠菌群是指含有大肠菌属（Escherichia coli）和奇异变形杆菌属（Coliform bacteria）的细菌群体。
它们存在于人和动物的肠道中，也可以存在于环境中，如土壤、水体和食品中。
食品中的大肠菌群是导致食品中毒的主要病原体之一。
因此，对食品中大肠菌群的检验非常重要，以确保食品的卫生和安全。
本文将介绍食品中大肠菌群的检验方法和操作流程。
方法和步骤1. 样品采集样品采集是食品中大肠菌群检验的第一步。
根据需要检验的食品种类，选择合适的采样方法。
常见的食品样品包括水果、蔬菜、肉类和乳制品等。
采集样品时，应使用干净无菌的容器，并避免污染。
确保样品的代表性，避免极端状况下的取样，如选择已烂的水果或有明显变质的食品。
2. 样品处理样品处理是为了提取样品中的菌群以进行后续的检测。
处理过程应在无菌条件下进行，以避免外部的污染。
常见的样品处理方法包括：•加入盐水：将样品加入含有氯化钠的缓冲液中，以便菌群的释放。
•搅拌和均质：使用搅拌器或者均质器将样品搅拌均匀，以确保菌群的均匀分布。
•过滤：通过滤膜将样品过滤，以分离固体物质和悬浮物。
3. 培养基选择选择适当的培养基是进行大肠菌群检验的关键。
常用的培养基包括马铃薯葡萄糖琼脂（Plate Count Agar，PCA）、大肠杆菌选择琼脂（MacConkey Agar）、经典蓝琼脂（Eosin Methylene Blue Agar）等。
不同的培养基适用于不同目的的检验。
PCA适用于总菌群计数，MacConkey Agar适用于大肠菌群的选择性检测，Eosin Methylene Blue Agar适用于大肠杆菌的计数和鉴别。
4. 培养和孵育将样品处理后的培养基平板进行孵育。
孵育的时间和温度根据菌群的生长特性而定。
一般情况下，孵育时间为24小时，温度为37摄氏度。
培养过程中，需要注意避免交叉污染。
每个样品应使用独立的培养基平板进行孵育，且标记清楚以区分不同样品。
大肠菌群计数检验
检样稀释：同上。 检样稀释：同上。 平板计数： 平板计数： 1、每个稀释度接种 个无菌平皿，每皿 个无菌平皿， 、每个稀释度接种2个无菌平皿 每皿1mL稀 稀 释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空 释样品，另外一个平皿加 生理盐水作空 白对照。 白对照。 2、及时将 、及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆 （ 盐琼脂）倾注每个平皿中。 盐琼脂）倾注每个平皿中。 3、待琼脂凝固后，再加 、待琼脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆盖表 覆盖表 翻转平板培养。 层。翻转平板培养。
旧国家标准
大肠菌群MPN 计数法 第一法 大肠菌群
第二法 大肠菌群平板计数法
第一天
小组： 使用第一法（附带做第二法中， 第1、3、5、7小组： 使用第一法（附带做第二法中， 、 、 、 小组 两个平板接种），以自来水为样品。 两个平板接种），以自来水为样品。 ），以自来水为样品
小组： 第2、4、6小组： 、 、 小组
大肠菌群计数检验
大肠菌群是指一群在37°C培养 小时能分解乳糖 大肠菌群是指一群在 ° 培养24小时能分解乳糖 培养 产酸产气、 产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆 菌。 作为粪便污染指标， 作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义 食品中大肠菌群数系以每100g（或mL）检样内大 （ 食品中大肠菌群数系以每 ） 肠菌群最可能数（ 肠菌群最可能数（the most probablenumber-简 简 称MPN）表示。 ）表示。
一般样品25ML（克）+225ML生理盐水 ：10，从 一般样品 （ 生理盐水=1： ， 生理盐水 10-1取样 取样1ML，接种到 管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白 ，接种到3管 （ 胨肉汤） 胨肉汤）中。 取样1ML+9 ML生理盐水 ：100，从10-2取样 生理盐水=1： 从10-1取样 生理盐水 ， 1ML，接种到3管LST中。 ，接种到 管 中 取样1ML+9 ML生理盐水 ：1000，从10-3取 生理盐水=1： 从10-2取样 生理盐水 ， 样1ML，接种到 管LST中。 ，接种到3管 中
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法大肠菌群检测是指对人体肠道内的大肠菌群进行检测，以了解肠道内微生物的种类和数量，从而评估肠道健康状况，并为相关疾病的预防和治疗提供参考依据。
目前，常见的大肠菌群检测方法主要包括DNA测序技术、16S rRNA基因测序技术、荧光原位杂交技术等。
本文将对这些大肠菌群检测方法进行介绍和分析，以便读者更好地了解大肠菌群检测的原理和应用。
DNA测序技术是一种通过对肠道微生物DNA进行测序，来获取肠道微生物组成和功能信息的方法。
这种方法可以全面地了解肠道微生物的种类和数量，但是需要较长的测序时间和较高的成本。
16S rRNA基因测序技术是一种通过对16S rRNA基因进行测序，来鉴定和分类细菌的方法。
这种方法可以快速地了解肠道微生物的种类和数量，但是对微生物的数量和功能信息了解较少。
荧光原位杂交技术是一种通过将荧光标记的探针与肠道微生物的特定序列结合，来观察和鉴定微生物的方法。
这种方法可以直接在样本中观察微生物的分布和数量，但是对微生物的种类了解较少。
综合比较这三种大肠菌群检测方法，可以发现它们各自有着优缺点。
DNA测序技术能够全面了解肠道微生物的种类和数量，但是成本较高；16S rRNA基因测序技术能够快速了解肠道微生物的种类和数量，但是了解微生物的数量和功能信息较少；荧光原位杂交技术能够直接观察微生物的分布和数量，但是了解微生物的种类较少。
因此，在选择大肠菌群检测方法时，需要根据具体情况综合考虑各种因素，选择最适合的方法。
总之，大肠菌群检测是一项重要的检测方法，可以为肠道健康状况的评估和相关疾病的预防和治疗提供参考依据。
在选择大肠菌群检测方法时，需要根据实际需求和条件选择最适合的方法，以便更好地了解肠道微生物的种类和数量，从而指导相关的临床实践和科研工作。
希望本文对大肠菌群检测方法的介绍和分析能够对读者有所帮助。
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大肠菌群检测方法
中文翻译
3 定义和简介
3.1 定义
所有的大肠菌群均是发酵乳糖，革兰氏阴性，无牙孢的杆菌。
官方的对大肠菌群的定义可能以培养温度（30、32、35、37）不同作评价；或以确定是否发酵乳糖产气作为定义的一个特征.大多数ISO和其它官方标准是利用发酵乳糖产气作为一个定义特征。
而在ISO 4832 中则利用了在VRBL上的菌落大小作为其唯一的定义特征。
鉴于这些定义的不同，建议实验室根据相关定义用相应的适当方法。
●国际标准：样品分析是否符合国际交易规范
●官方主市场调整定义：样品分析是否符合地方标准
●一般定义：样品分析是否符合一般规范。
任何必要方法的调改必须经过市场实验室质量确认中心和雀巢研究中心食品安全微生物组的协助。
以下为一些官方定义例子：
*ISO 4831大肠菌群是经过其在选择性肉汤上的生长和发酵乳糖产气能力来定义
*AOAC INTERNATIONAL, APHA/FDA定义大肠菌是指发酵乳糖产酸产气（T=32或35度）革兰氏阴性杆菌
*ISO 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。
(T=30或35或37℃)
3．1．1 液体培养基中
ISO 4831 大肠菌群是根据其在选择性肉汤中生长能力和发酵乳糖产气情况来定义.(T=30或35或37℃)
AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。
（T=32或35℃）
由LI第一章概述，大肠菌群是指发酵乳糖气微生物群。
3．1．2 固体培养基中
IOS 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。
(T=30或35或37℃) AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。
基于以上定义可知大肠菌群在VRBL培养基上会形成5mm以上直径的红色菌落且在确认试验中发酵乳糖产气
由LI第二章概述，大肠菌群是指在VRBL琼脂培养基上会形成特征性菌落且在确认试验中发酵乳糖产气微生物群。
3．2 简注
BGLB：亮绿乳糖胆盐培养基肉汤
LST：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤
MPN：最可能数
VRBL：紫红胆汁琼脂
4 安全防范
大肠菌群不表现为无害，注意实验室的良好操作。
5 参考资料
5．1 LIs中提到的及其它心要文件
LI-00．700
LI-00．702
LI-00．743-2
5．2 参考书目
*美国公共健康协会(1985).日用品检验标准，华盛顿。
DC
*Bruchez N (1996).Research Note QS-TN960017: Detection of coliforms-lnprovement of LST
*Colwell N.D.and M.D. Microbiological techniques-Some statistical aspects.J.Sci.Fd.Agric_20(1969)573-579
*ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms-Most probable number technique.
* ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms -Colony count technique.
*Merck Microbiology Manual
*U.S.FDA(1995).Bacteriological Analytical Manual,8th Ed AOAC international, Gaitheresburg,MD,pp 4.01-4.29
6 前面说法之修正
完整修订本额外细节在大肠菌群计数、定义和分离改编中提供。
7方法认可
8 附
1安全说明
2
概述
大肠菌群的研究与举例
第一章
液体培养基中的生长研究
1方法原理
接种至原倍或稀释后的选择性培养基中，30℃培养24-48小时，再经过转接阳性管进确认。
摘要
根据大肠菌群相应用的不同定义选用不同的培养温度（30℃/32℃/35℃/37℃）(查阅定义)
2 培养基的准备
在使用化学药品前查阅Sigma/Aldrich化学药品安全指南或其它相应手册或地方权威提供的安全数据表。
认真阅读附1中的安全说明。
更多的安全信息可从NEC/QS中获得。
2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）
根据制造商说明配制培养基，如是非成品干粉则可按以下方法配备（g/L）
单倍料（g）双倍料(g)。