免疫胶体金技术及其应用

第26卷第3期 河 南 林 业 科 技 Vol. 26 No. 3 2 0 0 6年9月 Journal of Henan Forestry Science and Technology Sep. 2 0 0 6

收稿日期：2006-07-20

作者简介：曾辉（1982-），男，信阳人，在读硕士研究生.

免疫胶体金技术及其应用

曾辉 1，翟晓巧2，刘艳萍1，张国俊3，李晓梦

4

（1.河南农业大学，郑州 450002；2. 河南省林业科学研究院；

3.禹州市林业技术推广中心；

4.镇平县林业局）

摘 要：免疫胶体金技术是继三大标记技术后对免疫标记技术的又一大贡献，近年来发展迅速，应用范围极广。综述了免疫胶体金技术的原理、特点和应用，并分析了存在的问题，针对其存在问题提出展望。 关键词：免疫胶体金技术；应用

中图分类号：S482.8 文献标识码：B 文章编号： 1003-2630（2006）03-0037-02

Immune colloidal gold technique and its application

ZENG Hui ,ZHAI Xiao-qiao ,LIU Yan-ping

（1. Henan Agriculture University,Zheng zhou 450002,China

2.Henan Forestry Research Institute, Zhengzhou 450008,China)

Abstract: Immune colloidal gold technique has great contribution to immunal labeling technique ,it develops quickly and applies comprehensively in recent years.The paper summaries the principle 、advantage and application of immune colloidal gold technique , meanwhile analyses the problem , then puts forward prospect.

Key words: Immune colloidal gold technique ; application

免疫胶体金技术(ICG)是以胶体金为标记物，利用特异性抗原抗体反应，在光镜电镜下对抗原或抗体物质进行定位、定性乃至定量研究的标记技术。1962年Feldherr第一次介绍了胶体金可作为一种电子显微镜水平的示踪标记物。1971年，Faulk 和Taylor [1]首次用免疫金标技术研究沙门氏菌壁细胞抗原成分，将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。这一年被公认为免疫胶体金技术诞生年。近年来，研究人员根据胶体金的物化性质进一步拓展了基于胶体金标记的生物检测技术及胶体金在其他生物学方面的应用。

1免疫胶体金技术的基本原理

氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小

的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

2免疫胶体金技术的特点

免疫胶体金技术是继三大标记技术（荧光素、放射性同位素和酶）后发展起来的固相标记免疫测定技术，与现有其它标记方法和标记物相比，有以下特点：（1）胶体金制备容易，价格低廉；（2）免疫胶体金对组织细胞的非特异性吸附作用小，几乎不出现非特异性吸附；（3）金颗粒大小可以控制，颗粒均匀，可进行双重和多重标记，即用不同大小的金颗粒分别标记不同的抗体，实现在同一张切片上观察

两种以上的抗原，也可以和其他标记物配合进行双重或多重标记；（4）既可用于光镜，又可用于电镜；既可用于透射电镜，又可用于扫描电镜；（5）可以标记多种生物大分子物质，如抗体葡萄球菌蛋白A（SPA）、凝集素、多糖、多肽及其它蛋白质而不影响其生物活性；（6）由于胶体金本身有鲜艳的橘红色，可用光镜或肉眼观察实验结果，也可用分光光度计测定光吸收，进行定量分析。可在切片不同视野中根据金颗粒的数目来半定量抗原；（7）灵敏度高，染色简便，不影响原有超微结构的观察，显色结果可长期保存等。

3免疫胶体金技术的应用

胶体金标记技术由于标记物的制备简便，方法敏感、特异，不需要使用放射性同位素，或有潜在致癌物质的酶显色底物，也不要荧光显微镜，所以它的应用范围极广。 3.1在免疫学检验中的应用

Leuvering [2]于1980年最早报道了用胶体金检测人绒毛膜促性腺激素(hCG)的凝集试验，1985年起有商品试剂盒供应，从此胶体金成为免疫学测定方法研究开发的新热点，新的方法和试剂盒层出不穷。

3.1.1 凝集试验 单分散的免疫金溶胶呈清澈透明的溶液，其颜色随溶胶颗粒大小而变化，当与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒极度增大，光散射随之发生变化，颗粒也会沉降，溶液的颜色变淡甚至变成无色，这一原理可定性或定量地应用于免疫反应。

3.1.2 蛋白质印迹技术 除用胶体金结合物替代传统蛋白印迹法中的酶或放射性同位素等作标记物外，其原理和操作基本同传统法，但有以下优点：（1） 信号本底比大；(2) 无处理放射性同位素的麻烦；(3) 结果可长期保存；(4) 可采用银放大技术，灵敏度至少可提高10倍。 3.2应用于流式细胞仪中

应用荧光素标记的抗体，通过流式细胞仪计数分析细胞