控制菌检查方法验证操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置：用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源：用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。
微生物限度检查法(2).控制菌检查方法验证讲义
5.联合使用
适用于抑菌作用较强的中西药制剂。 如：①复方洗必泰栓（水溶性基质）金黄 色葡萄球菌的检验—用1%吐温-80稀释液制 备供试液＋膜法过滤＋滤膜置含5%吐温-80 的硫乙醇酸盐增菌液中→（+）；②生白安 片（含盐酸小檗胺）大肠杆菌检验—低速 离心＋薄膜过滤法→（+）。
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3.薄膜过滤法
本法适用于有抑菌作用的液体制剂。 如：葡萄糖酸洗必泰含漱剂，氯霉素滴眼 剂等。 注意：供试液应加入较多量的稀释液稀释 后，再注入滤器中。
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4.中和法
①磺胺类可加对氨基苯甲酸（100ml增菌培养基 中含1%对氨基苯甲酸0.5-1.0ml）如：复方新诺明 片 ②含重金属盐类可用含巯基化合物（硫乙醇酸钠， L-胱氨酸）的培养基作增菌培养液。如：磺胺嘧 啶银软膏-金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌的检验 ③脂溶性药物用表面活性剂中和。如：复方痔疮 栓（含洗必泰）中的绿脓杆菌的检验，仅用吐温80制备供试液即可
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2.离心沉淀集菌法
低速离心（500转/分5分钟）取上清液（弃取抑菌 成分的固体微粒） 高速离心（3000-3500转/分30分钟）弃去上层抑 菌的液体部分，留管底2ml。 本法适用于抑菌作用不强的中西药品，如：平喘 胺片 、速效感冒片（先低速，后高速）；小儿惊 风散（低速离心）。本法操作较烦琐，药品中污 染的微生物有一定的损失。
方法:1.培养基稀释法 2.离心沉淀集菌法 3.薄膜过滤法 4.中和法 5.联合使用
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1.培养基稀释法
供试品加稀释剂稀释到一定倍数后进行检 验（虽然供试品中污染的菌也稀释，但由 于检验结果规定是不得检出，因而有些品 种用稀释法可检出目的菌）。 如百喘朋片[1：10 稀释液3ml 结果（＋） 试验菌28-96个] 。 本法适用于一般抑菌作 用不强的中西药品。
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。
5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。
5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。
5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。
5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。
5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。
5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。
微生物限度检查方法验证方案
微生物实验室检测设备配置方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录XI J微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.1.1试验前的准备：4.1.1.1试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃,灭菌30 min,在3天内使用。
4.1.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制微生物实验室检测设备配置方案说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃, 灭菌15 min，在3周内使用。
4.1.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
控制菌检查法标准操作规程
控制菌检查法标准操作规程1. 目的建立控制菌检查法标准操作规程，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于控制菌检查的检验操作。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5.程序控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
供试液制备及实验环境要求同"非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法( 通则1105) "。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus) [CMCC (B) 26003]铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa )104]大肠埃希菌( Escherichia coli ) [CMCC (B) 44 102]乙型副伤寒沙门菌( Salmonella paratyphi B ) [CMCC (B )50 094]白色念珠菌( Candida albicans) [CMCC (F) 98 001]生孢梭菌( Clostridium sporogenes) [CMCC (B) 64 941]菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30~35°C培养18~24小时;将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20~25°C培养2~3天;将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30~35°C培养24~48小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30~35°C培养18 ～24小时。
控制菌检查——精选推荐
控制菌检查1 方法的验证在建立供试品的控制菌检查法或原检查法的检验条件发生改变可能影响检验结果的准确性时，应对供试品的抑菌活性及检查法的可靠性进行验证。
验证时，按各供试品微生物限度项下的规定（给药途径）选择相应的菌株，并按供试液的制备和控制菌检查法所规定的方法进行。
2 仪器、设备及用具见各控制菌检查项下。
3 试液、指示液见各控制菌检查项下。
5 验证用菌株及菌液制备5.1 菌种大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]。
乙型副伤寒沙门菌（Salmonellaparatyphi-B）[CMCC（B）50094]。
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]。
生孢梭菌（Clostridiumsporogenoes）[CMCC（B）64941]。
5.2 菌液制备分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的营养琼脂斜面培养物少许，各接种至5ml营养肉汤培养基内，置36℃±1℃培养18～24h，取均匀培养物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液稀释制成每1ml含菌10～100cfu的菌悬液，其菌数在做对照试验的同时用营养琼脂注皿或平板涂布，经培养后计数确定。
生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18～24小时。
用0.9%无菌氯化钠溶液制成1ml含10～100cfu的菌液。
6 供试液的制备[见细菌、霉菌和酵母菌计数7]。
7 验证方法7.1 试验组取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。
验证大肠菌群检查法时，应采用大肠埃希菌作为试验菌。
当采用薄膜过滤法时，试验菌应加在最后一次冲洗液中，冲洗后，取出滤膜接种到增菌培养基中。
7.2 阴性对照组设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的特异性，方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌：验证铜绿单胞菌、金黄色葡萄球菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。
微生物控制菌检查方法验证方案
微生物控制菌检查方法验证方案一、背景介绍在制药、食品、医疗器械等行业中，微生物控制是非常重要的环节之一。
为了确保产品的安全性和合规性，对微生物的检查方法进行验证就显得尤为重要。
本文旨在提出一种可行的微生物控制菌检查方法验证方案。
二、方法验证目的本方案的目的是验证微生物控制菌检查方法的准确性、重复性、中间值和检测限度等关键指标，以确保该方法在实际应用中的可靠性。
三、验证方案1. 选择验证样品- 针对待验证的微生物控制菌检查方法，选择适当的微生物控制菌株作为验证样品。
验证样品应包含革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌等常见微生物类型。
- 确保验证样品的纯度和活性，并按照国际、行业规定的标准方法进行检测。
2. 实验设计- 确定验证实验的设计方案，包括样品分组、样品数量、重复次数等。
- 考虑到实验条件对验证结果的影响，应合理设置对照组和正试验组。
3. 数据采集与处理- 在验证实验中，记录样品的检测结果、测试方法和环境因素等重要信息。
- 利用统计学方法对验证结果进行分析，计算实验数据的平均值、标准差、变异系数等，并进行显著性分析。
4. 验证指标- 准确性：评估该微生物控制菌检查方法的准确性，即其与已知标准方法结果的一致性。
- 重复性：通过对同一样品在相同条件下进行多次测试来评估方法的重复性，计算重复测定之间的变异程度。
- 中间值：通过对同一样品在不同批次进行测试来评估方法的中间值，计算不同批次之间的变异程度。
- 检测限度：确定该方法能够可靠地检测到微生物的最低浓度水平。
五、验证结果分析根据数据采集和处理的结果，对所验证的微生物控制菌检查方法进行评估，如准确性、重复性等指标是否符合要求。
若验证结果不符合要求，则需对该方法进行优化或调整，重新进行验证。
六、验证报告根据验证结果编写验证报告，并包括实验设计、数据采集与处理、验证结果分析等内容。
报告应具备准确性、完整性和清晰度，以便他人能够理解和复现验证过程。
七、验证结果的应用验证结果应用于实际微生物控制菌检查方法的应用中，作为判定产品合格与否的依据。
控制菌检验方法验证
（七）控制菌检验方法验证当建立药品的微生物限度检查时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的控制菌检查方法测定。
若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检验方法应该进行重新验证。
验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。
1.验证用菌株大肠埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B)44102】、验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌珠的生物学特性。
2.菌液制备接种大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35-37℃培养18~24小时;分别取培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5~10-7，制成每1ml含菌数10~100cfu的菌悬液。
2.1阴性菌对照组设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。
方法同试验组，验证大肠埃希菌的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。
阴性对照菌不得检出。
2.2常规法大肠埃希菌取相当于1g木香顺气丸的供试液至100ml胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入大肠埃希菌10~100cfu，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌10~100cfu，35~37℃培养18~24小时，取出培养物按《微生物限度检查SOP》大肠埃希菌项下规定检查。
2.3进行3次独立平行试验。
回收率阳性菌培养时间菌液组菌数试验组菌数供试品对照组菌数大肠埃希菌结果判断：以上试验菌回收不低于70%，则可按常规法进行控制菌检查。
结论：本品按中国药典2010版微生物限度检查，经方法适用性验证试验，结果可用平皿法进行细菌计数方法检验，用平皿法进行霉菌和酵母菌计数方法检验，用常规法进行控制菌检查。
检验者：校对者：。
控制菌检查方法验证操作规程
GMP管理文件一、目的：为使控制菌检查的操作规范化、制度化，故建立此规程二、适用范围：控制菌检查必须按本规程执行。
三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。
四、正文：1、控制菌检查方法适应性试验1、1 供试液的制备取样品10g，用胰酪大豆胨液体培养基（TSB），作为稀释液制成1：10供试液，混匀，在20～25℃培养,培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2小时）。
试验菌大肠埃希菌和铜绿假单胞菌适用性试验取相当于1mL供试品的上述预培养物及不大于100cfu的大肠埃希菌和铜绿假单胞菌分别接种至适宜体积肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18小时。
应能分别检出所加大肠埃希菌和铜绿假单胞菌相应的反应特征.结果判断上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查；若未检出试验菌，应消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法适用性试验。
耐胆盐革兰氏阴性菌的检查供试液的制备和预培养：取样品10g，用胰酪大豆胨肉汤琼培养基（TSB），作为稀释液制成1：10供试液，混匀，在20～25℃培养,培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2小时）定性试验：除另有规定外，取相当于1g或ml供试品的预培养物接种至适应体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液培养基中，30～35℃培养24～48小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，30～35℃培养18～24小时。
判断结果：如果平板上无菌生长，判供试品未检出耐胆盐革兰氏阴性菌。
定量检查：选择和分离培养：取相当于、和（或、、）供试品的预培养物或其稀释剂分别接种至适应体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时后，上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，30～35℃培养18～24小时。
判断结果：若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。
非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
2020版药典非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所釆用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（B）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24小时。
简述控制菌检查的一般流程
简述控制菌检查的一般流程
控制菌检查的一般流程包括以下步骤：
1. 选择检测样本：根据需要控制的菌种和检测要求，选择合适的样本进行检测，例如食品样品、环境样品或临床样品。
2. 样品采集：采集样品时要注意遵守卫生规范和正确的采样方法，以确保采集到的样品能够准确反映现场情况。
3. 样品处理：对样品进行处理，如加入适当的缓冲液、消化液或稀释液，以便在后续步骤中进行菌落计数或鉴定。
4. 菌落计数：将处理后的样品转移到培养基上，培养并进行菌落计数。
菌落计数可以使用传统的平板计数法或现代的自动计数仪器。
5. 鉴定分析：根据需要，通过生化反应、免疫学方法或分子生物学方法对菌落进行鉴定。
鉴定可以确定菌种的名称和特征。
6. 数据分析：对检测结果进行统计和分析，根据规定的标准和指标，判断样品中是否存在超标菌群，并进行评估。
7. 结果报告：根据分析结果，编制检测报告，说明检测样品的菌群状况，包括菌种类型、数量和可能的风险。
8. 结果解读与控制：根据检测结果和评估，制定相应的控制措施，如改进生产工艺、加强卫生管理等，以控制菌群在环境中
的扩散和传播。
总之，控制菌检查的一般流程是从样品采集到数据分析、结果报告和风险评估，再到制定控制措施，以保证菌群在所控制的范围内。
控制菌检查法
液体培养基促生长能力检查 分别接种不大于 100cfu 的试验菌（见表 1）于
被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的
最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
固体培养基促生长能力检查 用涂布法分别接种不大于 100cfu 的试验菌（见
表 1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及
梭菌增菌培养基
促生长能力
生孢梭菌
哥伦比亚琼脂培养基 促生长能力
生孢梭菌
白色念珠菌 沙 氏 葡 萄 糖 液 体 培 养 促生长能力
白色念珠菌
基
沙 氏 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 促 生 长 能 力 + 指 示 白色念珠菌
基
特性
念珠菌显色培养基 促 生 长 能 力 + 指 示 白色念珠菌
能力
抑制能力
大肠埃希菌
时。
结果判断 若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管
为阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，从表 2 查 1g 或 1ml 供试品中含
有耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数。
表 2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数（N）
各供试品量的检查结果
0.1g 或 0.1ml 0.01g 或
0.001g 或
小时）。
定性试验
除另有规定外，取相当于 1g 或 1mL 供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经
方法适用性试验确定）肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养 24～48 小时后，
划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养 18～24 小时。如
果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
微生物检验方法验证
3.防腐剂抑菌效力测定
三、验证概述
微生物学检验的影响因素：
1.药品本身的抑菌性 2.药品中防腐剂的抑菌性 3.培养基的促菌生长能力 4.培养条件（温度、湿度及需氧或厌氧） 5.过滤系统的材质
三、验证概述
消除抑菌性的方法: 一、化学中和法
用化学中和剂中和抑菌剂，消除抑菌作用。 二、稀释法
重点议题
一、法规要求 二、验证目的 三、检验概述 四、总菌落数检查方法验证 五、控制菌检查方法验证 六、无菌检查方法验证
一、法规要求
第二百二十六条 试剂、试液、培养基和当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应 商进行评估；
（二） 应当有接收试剂、试液、培养基的记录，必要时，应当在试剂、 试液、 培养基的容器上标注接收日期；
酵母菌计数
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基
四、总菌落数检查方法验证
培养基适用性检查 被检培养基
培养结果
试验菌 50~100cfu
50~100cfu
试验菌
.. .. ..
适
..
宜
.. ..
培
养
条
.. ..
件
..
.. .. ..
被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基上的菌落平均数的70% 菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致
降低抑菌剂的浓度以消除抑菌性。 三、薄膜过滤法
抑菌性产品通过滤膜时，微生物被截留在膜上，检品被过滤掉。 ——微生物检查法准确与否的核心是对抑菌性的有效消除
四、总菌落数检查方法验证
环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域
培养基种类：
细菌计数
营养琼脂培养基
霉菌和酵母菌计数
玫瑰红钠琼脂培养基
（三）应当按照相关规定或使用说明配制、贮存和使用试剂、试液和 培养基。 特殊情况下，在接收或使用前，还应当对试剂进行鉴别或其 他检验；
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告验证方案：1.确定验证目标：纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
2.确定验证方法：选取一批纯化水样品进行验证，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行测定。
3.确定验证指标：验证指标包括检出限、准确度和重复性。
-检出限：比较两种方法在检测纯化水样品中的最低检出限。
-准确度：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的准确性。
-重复性：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的重复性。
4.验证步骤：a.准备样品：准备一批代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取一种已经被广泛认可的纯化水控制菌检查方法作为参比方法进行测定，记录结果。
d.分析比较：比较两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
5.验证报告：根据验证结果编写验证报告，包括验证目标、验证方法、验证过程、比较结果和结论等内容。
验证报告：验证目标：本次验证旨在验证纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
验证方法：本次验证选取了一批代表性的纯化水样品，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行检测。
验证指标：本次验证的指标包括检出限、准确度和重复性。
验证步骤：a.准备样品：准备了10个代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取了参比方法A进行纯化水样品的检测，记录结果。
d.分析比较：比较了两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
比较结果：1.检出限：纯化水控制菌检查方法的检出限为10CFU/mL，参比方法A的检出限为5CFU/mL。
2.准确度：在10个样品中，纯化水控制菌检查方法的准确度为90%，参比方法A的准确度为95%。
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1.目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。
2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。
3.责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
微生物控制菌检查方法验证方案
微生物控制菌检查方法验证方案4.验证方案批准微生物控制菌检查方法片验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的本实验是关于片的微生物控制菌检查试验的验证。
验证结果应显示对片的微生物控制菌试验方法，对检品中可能存在的微生物没有抑制作用，符合验证要求。
1.2原理按照已建立的药品微生物控制菌检查方法，通过已知菌数试液的对照菌的培训对照，验证其操作方法适合该药品的微生物控制菌的检测的正确性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备：将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应选择相应的阴性对照菌。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品按照微生物控制菌检测方法进行平行试验，通过观测是否长菌来判断。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“片”的微生物控制菌检查试验对检品中微生物的抑菌性。
试验结果应显示；阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组应检出试验菌。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于5pa。
3.1.3试验样品：片批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌培养皿（直径90mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1试验菌种的制备和稀释接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至相应的营养肉汤或BL增菌液10ml中,3实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
控制菌检验操作规程(3篇)
第1篇1. 引言控制菌检验是微生物实验室对样品进行质量评估的重要环节，旨在确保产品中不含有危害人体健康的致病菌。
本规程规定了控制菌检验的操作步骤、注意事项和质量控制要求。
2. 适用范围本规程适用于所有需要进行控制菌检验的样品，包括但不限于药品、食品、化妆品、水质、土壤等。
3. 术语和定义- 控制菌：指样品中可能存在的致病菌，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
- 增菌培养：将样品中的微生物进行繁殖，以便进行后续的分离和鉴定。
- 选择和分离培养：通过特定的培养基和培养条件，选择并分离目标微生物。
4. 操作步骤4.1 样品准备1. 样品采集：按照样品采集规范进行，确保样品的代表性。
2. 样品处理：根据样品性质，进行适当的预处理，如溶解、稀释等。
4.2 增菌培养1. 取适量样品加入适宜的增菌培养基中，进行增菌培养。
2. 培养温度和时间根据增菌培养基和目标微生物的要求进行设定。
4.3 选择和分离培养1. 将增菌培养后的样品接种到选择和分离培养基上。
2. 根据目标微生物的特性，选择合适的培养基和培养条件。
3. 培养温度和时间根据培养基和目标微生物的要求进行设定。
4.4 观察和记录1. 定期观察培养基上的菌落生长情况，记录菌落特征。
2. 对疑似控制菌进行进一步鉴定。
4.5 鉴定1. 对疑似控制菌进行生化试验、血清学试验等鉴定方法。
2. 确认目标微生物后，记录鉴定结果。
5. 质量控制5.1 人员培训1. 对参与控制菌检验的人员进行专业培训，确保其掌握操作规程。
2. 定期对人员进行考核，确保其操作技能符合要求。
5.2 仪器设备1. 定期对仪器设备进行校准和维护，确保其正常运行。
2. 对仪器设备进行清洁和消毒，防止交叉污染。
5.3 培养基和试剂1. 使用合格、有效的培养基和试剂。
2. 定期检查培养基和试剂的保质期，确保其新鲜。
6. 记录和报告1. 对检验过程进行详细记录，包括样品信息、操作步骤、结果等。
2. 检验报告应包含样品名称、检验方法、结果、结论等信息。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。