总丹参酮提取与纯化工艺研究
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(2007 - 06 - 26收稿 )
·制剂与质量 ·
总丹参酮提取与纯化工艺研究
张霄翔 1, 2 ,陈少兵 1 ,王艳萍 1 (合肥工业大学 11制药工程系 ; 21生物化工教育部重点实验室 ,安徽合肥 230009)
摘要 目的 :研究从丹参中提取和纯化总丹参酮的最佳工艺条件 。方法 :采用 L9 (34 )正交设计 ,以总丹参酮和 丹参酮 ⅡA的提取率为考察指标 ,优化提取总丹参酮的工艺条件 ;以总丹参酮的含量为考察指标 ,优选纯化总丹参 酮粗提物的工艺条件 。结果 :总丹参酮的最佳提取条件为加 7倍量的 90%乙醇 ,回流提取 3次 ,每次提取 115 h;最 佳纯化工艺条件为加 15倍量的 8%碳酸钠溶液 ,洗涤 5次 ,每次搅拌 5 m in。结论 :纯化工艺条件能使总丹参酮粗 提物的含量由 18123%上升至 57129% ,达到了新药申报规定的要求 。该提取和纯化总丹参酮的最佳工艺条件简便 易行 ,适用于工业化生产 。
010848C + 010182,相关系数 r = 019997。表明丹参 酮 ⅡA 在 2152～8182μg /m l浓度范围内 ,吸收度与 浓度呈现良好的线性关系 。 212 样品溶液的制备 称取丹参粉末 (过三号筛 ) 约 013 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 50 m l,密塞 ,称定重量 ,加热回流 1 h,放冷 ,再称定 重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤 液 ,即得 。 213 样品含量测定 21311 HPLC法测定样品中丹参酮 ⅡA 的含量 :精 密量取 212项下方法制备的样品溶液 10μl,注入液 相色谱仪 ,记录色谱峰面积 ,代入标准曲线计算含 量 。计算结果表明丹参药材中丹参酮 ⅡA 的含量为 01255% ( n = 3) 。 21312 紫外分光光度法测定样品中丹参酮的含 量 :精密移取 212项下方法制备的样品溶液 2 m l,水 浴上蒸干 ,残渣用 20 m l氯仿分次溶解并定量转移 至分液漏斗中 ,继用 5%碳酸钠溶液萃取 3 次 ( 10、 10、10 m l) ,合并碱液 ,用 15 m l氯仿萃取碱液 , 分 离 ,合并前后两次氯仿层 ,用 10 m l水洗涤一次 ,弃 去水液 ,氯仿层于 60℃水浴上蒸干 ,残渣用适量氯 仿溶解并转移至 25 m l量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,摇 匀 ,即得供试品溶液 。于 271 nm 处测定供试品溶液 的吸收度 ,代入标准曲线计算含量 。计算结果表明 丹参药材中总丹参酮的含量为 01739% ( n = 3) 。 214 正交实验考察指标和实验方案设计 21411 提取工艺考察 :以醇提液中丹参酮 ⅡA 得 率和总丹参酮得率为考察指标 。提取率分别按下式 计算 :
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·432·
中药材 Journal of Chinese M edicinal M aterials 第 31卷第 3期 2008年 3月
规定的要求 (有效部位含量应占提取物的 50%以 上 ) 。因此 ,探寻一种高效简便的分离纯化总丹参 酮的方法 ,对促进总丹参酮药理作用的深入研究和 工业化生产 ,具有一定的应用价值 。本文以总丹参 酮和丹参酮 ⅡA 的提取率为指标 ,采用正交实验法 优选总丹参酮的最佳提取工艺 ,然后采用碱洗法对 总丹参酮粗提物进行纯化 ,以期获得符合新药申报 规定要求的总丹参酮提取物 。
[ 2 ] 李曼 ,郑辉 1几种常用中草药配伍抗菌作用的研究 1江 西中医学院学报 , 1999, 11 (3) : 1111
[ 3 ] 蔡笃运 ,贾杰 ,苏林光 ,等 1 200株肺炎克雷伯杆菌耐药
性分析 1 海南医学 , 2002, 13 (10) : 71 [ 4 ] Pena C, PujolM , A rdanuy C, et al1 An outbreak of hosp i2
Abstract Objective: To op tim ize technical p rocesses for extraction and purification of total tanshinones from Radix Salviae M ilti2 orrhizae1 M ethods: U sing orthogonal design, and taking the extraction percentage of total tanshinones and tanshinoneⅡA as indexes, the extraction conditions of total tanshinones from Radix Salviae M iltiorrhizae and the purification conditions of total tanshinones from crude extract were op tim ized respectively1 Results: The op timal technical p rocess for extraction of total tanshinones was as follow s: added 7 volumes of 90% aqueous ethanol, extracted three times and each time for 115 hours1 The op timal technical p rocess for purifi2 cation of total tanshinones was as follow s: 15 volumes of 8% sodium carbonate solution, washing 5 times and each time stirring for 5 m inutes1 Conclusion: The content of total tanshinones in crude extract increased from 18123% to 57129% by purification1 The op timal technical p rocesses for extraction and purification of total tanshinones are p ractical in industrial p roduction1
关键词 丹参 ;总丹参酮 ;正交设计 ;提取 ;纯化 中图分类号 : R28412 文献标识码 : A 文章编号 : 100124454 (2008) 0320431204
Study on Techn ica l Processes for Extraction and Pur if ica tion of Tota l Tan sh inones ZHANG Xiao2xiang1, 2 , CHEN Shao2bing1 , WANG Yan2p ing1
中药材 Journal of Chinese M edicinal M aterials 第 31卷第 3期 2008年 3月
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和肺炎克雷伯杆菌有很强的抑制作用 ,提示余甘子 叶有很好的开发前景 ,至于其抗菌作用是抑制作用 还是杀灭作用有待进一步深入研究 。
参考文献
[ 1 ] 李宗友 1 余甘子叶提取物的抗炎作用 1 国外医学中医 中药分册 , 1998, 20 (4) : 521
21112 供总丹参酮测定用标准曲线的制备 :参照 文献报道的方法 ,以丹参酮 ⅡA 为对照品 ,采用紫外 分光光度法测定样品中总丹参酮的含量〔5〕。
精密 称 取 干 燥 至 恒 重 的 丹 参 酮 ⅡA 对 照 品 3155 mg,置 10 m l量瓶中 ,加适量氯仿使溶解并稀 释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 5 m l,置 100 m l量瓶中 , 加氯仿至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 210、310、410、510、 610、710 m l,分别置 10 m l量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,摇 匀 ,于 271 nm 处测定吸收度 。以吸收度 (A )对浓度 (C) 进行一元线性回归 , 得回归方程为: A =
tal2acquired Klebsiella pneumoniae bacteraem ia, including strains, p roducing extended2spectrum beta2lactam se1 J Hosp Infect, 2001, 47 (1) : 531 [ 5 ] Yan JJ, Ko W C, Tsai SH , et al1 Outbreak of infection w ith multidrug2resistant Klebsiella pneumoniae carrying bla ( IM P28) in a university medical center in Taiwan1 Clin M icrobiol, 2001, 39 (12) : 44331
色谱条件 :以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以甲醇 2水 (75 ∶25)为流动相 ; 检测波长为 270 nm; 流速为 110 m l/m in。理论塔板数按丹参酮 ⅡA 峰计 算应不低于 2500。
精密称取丹参酮 ⅡA 对照品 7193 mg,置 25 m l 量瓶中 ,加适量甲醇使溶解并稀稀至刻度 ,摇匀 ,作 为对照 品 溶 液 。精 密 量 取 对 照 品 溶 液 015、110、 115、210、215 m l,分别置 5 m l量瓶中 ,加甲醇稀释至 刻度 ,摇匀 ;分别精密吸取 10 μl,注入液相色谱仪 , 记录色谱峰面积 。以峰面积值 ( Y)对浓度 ( X)进行 一元 线 性 回 归 , 得 回 归 方 程 为 : Y = 207239X 73865,相关 系数 r = 019995。表明 丹 参 酮 ⅡA 在 6110～30150 μg /m l浓度范围内 ,峰面积与浓度呈 现良好的线性关系 。
( 11Department of Pharmaceutical Engineering; 21Key Laboratory of B io2p rocess ofM inistry of Education, Hefei University of Technol2 ogy, Hefei 230009, China)
1 材料 111 药品 丹参购自亳州中药材市场 ,经安徽中 医学院王德群教授鉴定系唇形科植物丹参 S a lvia m iltiorrh iza B ge1 的干燥根及根茎 ;丹参酮 ⅡA 对照 品购自中国药品生物制品检定所 。
112 仪器和试剂 W aters 2487高效液相色谱仪 ; UV 2V isW FZ23B 分光光度计 (日本岛津 ) ; LGJ218冷 冻干燥机 (宁波新芝生物科技有限公司 ) ;磁力搅拌 器 。甲醇为色谱纯 ;其他试剂均为分析纯 。 2 方法 211 标准曲线制备 21111 供 HPLC测定用标准曲线的制备 : 参照中 国药典 2005版附录 ⅥD 方法 。
等作用〔2、3〕,已引起人们的高度重视 。总丹参酮的 提取 、分离纯化工艺虽有大量文献报道 ,但总丹参酮 的含量不高 ,通常在 30%以下〔4〕,达不到新药申报
作者简介 :张霄翔 ,男 ,副教授 ,研究方向 :中药制剂与药理 ; Tel: 13866709437, E2mail: zxxwyfzsy@ sina1com。
Key words Radix Salviae M iltiorrhizae; Total tanshinones; O rthogonal design; Extraction; Purification
丹 参 主 要 成 分 分 为 水 溶 性 成 分 和 脂 溶 性 成 分〔1〕。其脂溶性成分为菲醌类衍生物 ,称之为总丹 参酮 。总丹参酮具有抗肿瘤 、抗肝纤维化 、扩张血管
·制剂与质量 ·
总丹参酮提取与纯化工艺研究
张霄翔 1, 2 ,陈少兵 1 ,王艳萍 1 (合肥工业大学 11制药工程系 ; 21生物化工教育部重点实验室 ,安徽合肥 230009)
摘要 目的 :研究从丹参中提取和纯化总丹参酮的最佳工艺条件 。方法 :采用 L9 (34 )正交设计 ,以总丹参酮和 丹参酮 ⅡA的提取率为考察指标 ,优化提取总丹参酮的工艺条件 ;以总丹参酮的含量为考察指标 ,优选纯化总丹参 酮粗提物的工艺条件 。结果 :总丹参酮的最佳提取条件为加 7倍量的 90%乙醇 ,回流提取 3次 ,每次提取 115 h;最 佳纯化工艺条件为加 15倍量的 8%碳酸钠溶液 ,洗涤 5次 ,每次搅拌 5 m in。结论 :纯化工艺条件能使总丹参酮粗 提物的含量由 18123%上升至 57129% ,达到了新药申报规定的要求 。该提取和纯化总丹参酮的最佳工艺条件简便 易行 ,适用于工业化生产 。
010848C + 010182,相关系数 r = 019997。表明丹参 酮 ⅡA 在 2152～8182μg /m l浓度范围内 ,吸收度与 浓度呈现良好的线性关系 。 212 样品溶液的制备 称取丹参粉末 (过三号筛 ) 约 013 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 50 m l,密塞 ,称定重量 ,加热回流 1 h,放冷 ,再称定 重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤 液 ,即得 。 213 样品含量测定 21311 HPLC法测定样品中丹参酮 ⅡA 的含量 :精 密量取 212项下方法制备的样品溶液 10μl,注入液 相色谱仪 ,记录色谱峰面积 ,代入标准曲线计算含 量 。计算结果表明丹参药材中丹参酮 ⅡA 的含量为 01255% ( n = 3) 。 21312 紫外分光光度法测定样品中丹参酮的含 量 :精密移取 212项下方法制备的样品溶液 2 m l,水 浴上蒸干 ,残渣用 20 m l氯仿分次溶解并定量转移 至分液漏斗中 ,继用 5%碳酸钠溶液萃取 3 次 ( 10、 10、10 m l) ,合并碱液 ,用 15 m l氯仿萃取碱液 , 分 离 ,合并前后两次氯仿层 ,用 10 m l水洗涤一次 ,弃 去水液 ,氯仿层于 60℃水浴上蒸干 ,残渣用适量氯 仿溶解并转移至 25 m l量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,摇 匀 ,即得供试品溶液 。于 271 nm 处测定供试品溶液 的吸收度 ,代入标准曲线计算含量 。计算结果表明 丹参药材中总丹参酮的含量为 01739% ( n = 3) 。 214 正交实验考察指标和实验方案设计 21411 提取工艺考察 :以醇提液中丹参酮 ⅡA 得 率和总丹参酮得率为考察指标 。提取率分别按下式 计算 :
wk.baidu.com
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中药材 Journal of Chinese M edicinal M aterials 第 31卷第 3期 2008年 3月
规定的要求 (有效部位含量应占提取物的 50%以 上 ) 。因此 ,探寻一种高效简便的分离纯化总丹参 酮的方法 ,对促进总丹参酮药理作用的深入研究和 工业化生产 ,具有一定的应用价值 。本文以总丹参 酮和丹参酮 ⅡA 的提取率为指标 ,采用正交实验法 优选总丹参酮的最佳提取工艺 ,然后采用碱洗法对 总丹参酮粗提物进行纯化 ,以期获得符合新药申报 规定要求的总丹参酮提取物 。
[ 2 ] 李曼 ,郑辉 1几种常用中草药配伍抗菌作用的研究 1江 西中医学院学报 , 1999, 11 (3) : 1111
[ 3 ] 蔡笃运 ,贾杰 ,苏林光 ,等 1 200株肺炎克雷伯杆菌耐药
性分析 1 海南医学 , 2002, 13 (10) : 71 [ 4 ] Pena C, PujolM , A rdanuy C, et al1 An outbreak of hosp i2
Abstract Objective: To op tim ize technical p rocesses for extraction and purification of total tanshinones from Radix Salviae M ilti2 orrhizae1 M ethods: U sing orthogonal design, and taking the extraction percentage of total tanshinones and tanshinoneⅡA as indexes, the extraction conditions of total tanshinones from Radix Salviae M iltiorrhizae and the purification conditions of total tanshinones from crude extract were op tim ized respectively1 Results: The op timal technical p rocess for extraction of total tanshinones was as follow s: added 7 volumes of 90% aqueous ethanol, extracted three times and each time for 115 hours1 The op timal technical p rocess for purifi2 cation of total tanshinones was as follow s: 15 volumes of 8% sodium carbonate solution, washing 5 times and each time stirring for 5 m inutes1 Conclusion: The content of total tanshinones in crude extract increased from 18123% to 57129% by purification1 The op timal technical p rocesses for extraction and purification of total tanshinones are p ractical in industrial p roduction1
关键词 丹参 ;总丹参酮 ;正交设计 ;提取 ;纯化 中图分类号 : R28412 文献标识码 : A 文章编号 : 100124454 (2008) 0320431204
Study on Techn ica l Processes for Extraction and Pur if ica tion of Tota l Tan sh inones ZHANG Xiao2xiang1, 2 , CHEN Shao2bing1 , WANG Yan2p ing1
中药材 Journal of Chinese M edicinal M aterials 第 31卷第 3期 2008年 3月
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和肺炎克雷伯杆菌有很强的抑制作用 ,提示余甘子 叶有很好的开发前景 ,至于其抗菌作用是抑制作用 还是杀灭作用有待进一步深入研究 。
参考文献
[ 1 ] 李宗友 1 余甘子叶提取物的抗炎作用 1 国外医学中医 中药分册 , 1998, 20 (4) : 521
21112 供总丹参酮测定用标准曲线的制备 :参照 文献报道的方法 ,以丹参酮 ⅡA 为对照品 ,采用紫外 分光光度法测定样品中总丹参酮的含量〔5〕。
精密 称 取 干 燥 至 恒 重 的 丹 参 酮 ⅡA 对 照 品 3155 mg,置 10 m l量瓶中 ,加适量氯仿使溶解并稀 释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 5 m l,置 100 m l量瓶中 , 加氯仿至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 210、310、410、510、 610、710 m l,分别置 10 m l量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,摇 匀 ,于 271 nm 处测定吸收度 。以吸收度 (A )对浓度 (C) 进行一元线性回归 , 得回归方程为: A =
tal2acquired Klebsiella pneumoniae bacteraem ia, including strains, p roducing extended2spectrum beta2lactam se1 J Hosp Infect, 2001, 47 (1) : 531 [ 5 ] Yan JJ, Ko W C, Tsai SH , et al1 Outbreak of infection w ith multidrug2resistant Klebsiella pneumoniae carrying bla ( IM P28) in a university medical center in Taiwan1 Clin M icrobiol, 2001, 39 (12) : 44331
色谱条件 :以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以甲醇 2水 (75 ∶25)为流动相 ; 检测波长为 270 nm; 流速为 110 m l/m in。理论塔板数按丹参酮 ⅡA 峰计 算应不低于 2500。
精密称取丹参酮 ⅡA 对照品 7193 mg,置 25 m l 量瓶中 ,加适量甲醇使溶解并稀稀至刻度 ,摇匀 ,作 为对照 品 溶 液 。精 密 量 取 对 照 品 溶 液 015、110、 115、210、215 m l,分别置 5 m l量瓶中 ,加甲醇稀释至 刻度 ,摇匀 ;分别精密吸取 10 μl,注入液相色谱仪 , 记录色谱峰面积 。以峰面积值 ( Y)对浓度 ( X)进行 一元 线 性 回 归 , 得 回 归 方 程 为 : Y = 207239X 73865,相关 系数 r = 019995。表明 丹 参 酮 ⅡA 在 6110～30150 μg /m l浓度范围内 ,峰面积与浓度呈 现良好的线性关系 。
( 11Department of Pharmaceutical Engineering; 21Key Laboratory of B io2p rocess ofM inistry of Education, Hefei University of Technol2 ogy, Hefei 230009, China)
1 材料 111 药品 丹参购自亳州中药材市场 ,经安徽中 医学院王德群教授鉴定系唇形科植物丹参 S a lvia m iltiorrh iza B ge1 的干燥根及根茎 ;丹参酮 ⅡA 对照 品购自中国药品生物制品检定所 。
112 仪器和试剂 W aters 2487高效液相色谱仪 ; UV 2V isW FZ23B 分光光度计 (日本岛津 ) ; LGJ218冷 冻干燥机 (宁波新芝生物科技有限公司 ) ;磁力搅拌 器 。甲醇为色谱纯 ;其他试剂均为分析纯 。 2 方法 211 标准曲线制备 21111 供 HPLC测定用标准曲线的制备 : 参照中 国药典 2005版附录 ⅥD 方法 。
等作用〔2、3〕,已引起人们的高度重视 。总丹参酮的 提取 、分离纯化工艺虽有大量文献报道 ,但总丹参酮 的含量不高 ,通常在 30%以下〔4〕,达不到新药申报
作者简介 :张霄翔 ,男 ,副教授 ,研究方向 :中药制剂与药理 ; Tel: 13866709437, E2mail: zxxwyfzsy@ sina1com。
Key words Radix Salviae M iltiorrhizae; Total tanshinones; O rthogonal design; Extraction; Purification
丹 参 主 要 成 分 分 为 水 溶 性 成 分 和 脂 溶 性 成 分〔1〕。其脂溶性成分为菲醌类衍生物 ,称之为总丹 参酮 。总丹参酮具有抗肿瘤 、抗肝纤维化 、扩张血管