电泳配方
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制在生物化学和分子生物学的研究领域中，SDSPAGE 电泳是一种常用的技术手段，用于分离和分析蛋白质。
而要成功进行 SDSPAGE 电泳实验，准确配制各种试剂是至关重要的一步。
接下来，让我们详细了解一下 SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来谈谈分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液通常使用TrisHCl 缓冲液，其 pH 值一般在 88 左右。
配制时，我们需要称取一定量的 Tris 碱，然后加入适量的浓盐酸进行调节 pH 值。
这个过程需要用到 pH 计来精确测量，以确保 pH 值的准确性。
一般来说，每升分离胶缓冲液中，Tris 的用量约为 1815g，而浓盐酸的用量则需要根据实际测量的 pH 值进行调整。
接下来是浓缩胶缓冲液的配制。
浓缩胶缓冲液的 pH 值通常为 68，同样使用 TrisHCl 缓冲液。
配制方法与分离胶缓冲液类似，但 Tris 的用量和浓盐酸的用量有所不同。
每升浓缩胶缓冲液中，Tris 的用量约为 606g，浓盐酸的用量也需要根据实际 pH 值测量结果进行微调。
然后是 30%丙烯酰胺溶液的配制。
这是 SDSPAGE 电泳中的关键试剂之一。
丙烯酰胺是一种有毒物质，在配制过程中需要特别小心。
我们将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺按照 29:1 的比例混合。
称取 29g 丙烯酰胺和 1g 甲叉双丙烯酰胺，加入适量的去离子水，搅拌溶解后，定容至 100ml。
需要注意的是，丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套在通风橱中进行。
SDS 溶液的配制也不能马虎。
SDS 即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去污剂。
称取 10g SDS，加入适量的去离子水，加热搅拌溶解后，定容至 100ml。
10%过硫酸铵溶液是引发丙烯酰胺聚合的重要试剂。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
因为过硫酸铵溶液不稳定，容易分解，所以不宜长时间保存。
电泳缓冲液也是必不可少的。
电泳液等试剂的配方
1.电泳液配方：5×（使用时稀释1×使用）Tris/Triz：7.55g（红）Gly（甘氨酸）：47g（蓝）SDS:2.5g（绿）蒸馏水：500ml2.TBST：(500ml，5×）稀释1×使用NaCl：22g1M Tris-HCl（PH=8.0):50ml水：400mlTween（吐温）20：1.25ml定容：500ml或TBSB 10×（50ml+450ml蒸馏水定容至500ml）3.转膜液：（1×，1L)半干转Gri：2.9gSDS:0.37g湿转：Gly：Yriz：SDS:*封闭液：TBSBorine serum Album in 0.9g+TBST 1×30ml（两个，离心管，混匀）1.2gBSA+TBST 1×40ml4.完全培养基制备：2管血清FBS (15％）2％双抗600ul/500ul两性（配置100pg/ml）以上于（F-12）培养基中*60ml 1ng/ml 加入54你ml完全培养基中100pg/ml×（X+完全培养基）=100pg/ml×XX=完全培养基量/9Xml＞500+X X：500=1：9成纤维细胞；前14天用全加，接板后用含TGF-β全加巨噬细胞：第1天用不含，第2-6天用含95％酒精转75％酒精：V（95％）=15/19V（75％）V（75％）=19/15V（95％）5.MH平板配方：200ml水4.2gMH（高压灭菌锅灭菌）3g琼脂6.LB培养基：胰蛋白胨：1g酵母提取物：0.5gNaCl：1g蒸馏水：100ml7.TG3％（促进小鼠巨噬细胞分化转化溶液）：TG（BD)1.5g+蒸馏水50ml（瓶子别扭太紧，防止爆裂）0.6g 20ml 121℃15min （0.6g+20ml蒸馏水）8.50％甘油200ml=100ml丙三醇+100ml蒸馏水（121℃15min ）9.乳酸菌培养基：1.8284g：35ml水。
琼脂糖凝胶电泳 配方与步骤
�RNA琼脂糖凝胶电泳：配制：1.0.5M EDTA（pH=8.0）：100ml：称取18.61g Na2EDTA·2H2O（分子量372.24），加80ml ddH2O剧烈搅拌，用NaOH调节PH值至8.0（约需2g NaOH）.高压灭菌，室温保存。
2.50×TAE loading buffer:（Tris acetate-EDTA buffer）电泳缓冲液组分：2M Tris-乙酸；100mM EDTA（pH=8.0）500mL:称121.1g Trisbase（分子量121.14），加800ml ddH2O溶解，加57.1ml乙酸和50ml0.5M EDTA溶液（pH=8.0），搅拌，ddH2O定容至500mL.室温保存。
3.1×TAE loading buffer:取20ml50×TAE，ddH2O定容至1L.室温保存。
4.100×Sybergreen：500ul：取495ul1×TAE于1.5ml离心管，加入5ul Sybergreen原液混匀，4℃锡纸避光保存。
注意：Sybergreen原液需稀释10000倍；6×DNA loading buffer上样缓冲液需稀释六倍，最终稀释倍数应不小于1×。
步骤：1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml，我们用30ml):称0.3g琼脂糖置于100ml锥形瓶中，加入30ml1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2.胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3.加样:样品制备：（10ul体系/样品槽）于0.25ml离心管中样品RNA（最后加）:2ul/3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen：0.1ulDEPC水：至10ul(注意:加样前要先记下加样的顺序).分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个枪头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.4.电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.5.电泳完毕后,取出凝胶,利用科212凝胶成像系统,在紫外灯（trans UV）下观察拍照保存.DNA存在则显示出红色荧光条带.RNA完美提出应该是三条带：28，18,5.8。
电泳步骤-配方
1 SDS-PAGE电泳试剂配制30% Acr/Bis：Acr 29.2 g，Bis 0.8 g，混匀后加蒸馏水，37℃溶解，定容至0.1 L，棕色瓶存于4℃。
1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）：Tris base 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调pH至8.0，定容至0.1 L，4℃保存。
1M Tris-HCl（pH 6.8）：Tris base 12.11g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8，定容至0.1 L，4℃保存。
10% SDS：电泳级10 g加蒸馏水68℃助溶，浓盐酸调至pH 7.2，定容至0.1 L。
10% APS：1 g过硫酸铵加蒸馏水至10 mL。
电泳缓冲液（pH 8.3）：Tris 3.02 g，Gly 18.8 g，10% SDS 10 mL加蒸馏水溶解，定容至1 L。
电泳上样缓冲液Loading Buffer：1M Tris-HCl（pH 6.8）1 mL， -巯基乙醇1 mL，SDS 0.4 g，甘油2.0 mL，0.1% 溴酚蓝1.0 mL，蒸馏水5.0 mL。
考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝R250 0.15 g，甲醇45 mL，冰醋酸10 mL，ddH2O 45 mL。
脱色液：甲醇45 mL，冰醋酸10 mL，蒸馏水45 mL。
15%分离胶配方：蒸馏水2.3 mL，30% Acr/Bis 5.0 mL，1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）2.5 mL，10% SDS 0.1mL，10% 0.1 mL，TEMED 4 uL。
5%浓缩胶配方：蒸馏水3.3 mL，30% Acr/Bis 4.0 mL，1.0 M Tris-HCl（pH 6.8）0.38 mL，10% SDS 0.03 mL，10% AP 0.03 mL，TEMED 3.0 uL。
2 SDS检测原核蛋白的表达（1）组装胶架：玻璃板对齐后放入夹中卡紧。
然后垂直卡在架子上准备灌胶。
（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。
sds-page配方
SDS-PAGE 电泳8%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 2300（微升，下面都一样）3450 460030%Acrylamide 1300 2025 27001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 3 4.5 612%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 1600 2475 330030%Acrylamide 2000 3000 40001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 2 3 4浓缩胶5ml 7.5mlH2O 1700 340030%Acrylamide 415 8301.5M Tris-HCl (Ph8.8) 315 63010%SDS 25 5010%过硫酸铵25 50TEMED 2.5 51.将以上溶液混合均匀，用1ml枪吹打几下2.现配分离胶，将配制好的胶慢慢打入，胶里不能有气泡。
3.分离胶加入到2/3处，再加入去离子水，压胶，保持分离胶水平4.待分离胶凝固后，将水倒出来，用滤纸吸干，差不多就可以~5.配制浓缩胶，插梳子（用蒸馏水洗干净）6加入电泳缓冲液，倒个一半左右？7点样的时候慢慢点，因为点样速度快了，容易冒出来8跑胶的时候，先用80V跑，等样品跑完浓缩胶，就换电压，换到120V得跑个2h左右吧~ （不用那么仔细，你配的胶你估摸着差不多就行）,跑完浓缩胶，蛋白和marker都是呈一条细线这时候你就可以换电压了~9跑完的胶，拿出来用蒸馏水冲几次，放入平皿，加染色液，能覆盖胶就行，摇7,8h，摇完了把染色液倒出来（可以回收，但是效果不怎么好），用蒸馏水冲几次，加入脱色液，再摇摇到你能看见条带，目的蛋白就可以~要是你闲时间太长，加染色液放微波炉，打个两三分钟，脱色的时候加脱色液放微波炉，打2,3分钟，据说这个方法也可以，但是效果不好，而且我没有试过，要不你试试？建议你买个SDS-PAGE的试剂盒吧，要不然配试剂得配个一天。
双向电泳实验过程及相关溶液配置
双向电泳实验过程及相关溶液配置一、实验过程1、蛋白质干粉的制备（酚抽法）约1g材料置于液氮中研磨，向研钵中加入4ml提取液，待其熔化后，继续研磨数分钟，转移至离心管中（离心管容量依具体情况而定），加入等体积的pH8.0Tris-饱和酚，涡旋，离心（10000r/min，4℃）10min。
取酚层，加入6倍体积0.1mol/L乙酸铵甲醇溶液，－20℃沉淀2h以上。
离心（15000r/min，4）20min，弃上清液，沉淀用－20℃预冷甲醇洗涤1次，再以丙酮（含2％β－巯基乙醇，－20℃预冷）洗涤2次，－20度干燥，所得干粉置－20度保存待用。
2、样品的溶解取蛋白干粉10mg于1.5ml的离心管中，加入200－250ml裂解液（先加100-200ul左右，用小棒研磨后，再逐次加入余量裂解液，冲洗小棒），振荡1min左右，于35℃水浴2.5小时，15000rpm离心15min，取上清液作为实验备用。
3、Bradford法测蛋白含量1)、将牛血清白蛋白(BSA)配成1mg/ml的溶液贮存于4℃冰箱2)、设7个浓度梯度制作标准曲线，每个梯度设3个重复，依下表加入1mg/ml BSA、Lysis buffer、ddHO。
(均使用10ml离心管)2管号 1 2 3 4 5 6 71mg/ml BSA(ul) 0 10 20 30 40 50 60 Lysis buffer(ul) 20 20 20 20 20 20 20 ddHO(ul) 980 970 960 950 940 930 920 2BSA含量(ug) 0 10 20 30 40 50 603)、每管加入5ml Bradford工作液，摇匀，5min后测波长595nm下的吸光值。
测定过程中，每测完1管，比色皿用95%乙醇冲洗后再用蒸馏水冲洗3次，然后取少量下1管的溶液润洗比色皿2次。
关系的标准曲线方程式：4)、制作BSA含量与OD595Y= aX+b.其中Y为 OD值，X为蛋白含量。
电泳试剂配方
各类试剂DNA extration buffer(1000ml)：1M Tris-HCl（PH8.0） 100ml0.5M EDTA 40ml5 M NaCl 100ml10%SDS 150mlDH2O 6100.5M EDTA(pH8.0)：46.53g(EDTA含2份结晶水，fw＝372.2)溶至200ml，加入4gNaOH调PH=8.0,最后调至250ml；0.5M EDTA(pH8.0)：46.53g(EDTA含2份结晶水，fw＝372.2)溶至200ml加入5gNaOH调PH=8.0,最后定容至250ml5×TBE（1L）: 54g Tris,27.5g硼酸；20ml 0.5M EDTA(pH8.0)1×TBE:（5×TBE稀释5倍）NaOH溶液(400ML):6g NaOH;0.076g四硼酸钠；NaOH溶液(20L): 300g NaOH;3.8g四硼酸钠；40％page：Acrylamide 38g；N-N-Methylenehisacny lamide 2g；ddH2O定容100ml。
APS: 4克过硫酸氨配成40ml固定液中甲醛加入量：400ml NaOH溶液加1.6ml染色液：AgNO3 0.05%--0.1%固定液： NaOH 15g/l甲醛 4ml/l硼砂 0.2g/l6%非变性PAGE胶配制如下（1块胶）：5×TBE 5ml40%PAGE 3.75mlH2O 16mlAPS 200-250ulTEMED 12 ulDNA提取1. 在50 ml带盖离心管中加入10~15 ml抽提液(100 mmol/L Tris-HCL pH8.0，20mmol/L EDTA，500 mmol/l NaCl，1.5% SDS)，在66°C水浴中预热；2. 取剪小的水稻叶片放在研钵内，倒入液氮，磨成细粉，迅速转入经预热的抽提液中，混匀；66°C水浴30 min，保温期间搅动几次；3. 放在摇床上缓慢振荡（60 rpm）10~20 min；4. 加入10~15 ml氯仿，内含4%（V/V）异戊醇，10~20%（V/V）乙醇，混匀，继续缓慢振荡20 min；5. 在室温下离心（3000rpm）20 min；6. 将上清液倒入50 ml离心管，加入0.8至1倍经4°C预冷的异丙醇，混匀，在室温下放置片刻，出现纤维状沉淀；7. 在室温下离心（3000rpm）10 min；8. 弃上清液，然后加入75%乙醇震荡洗涤；9.在室温下离心（3000rpm）10 min；10. 弃乙醇，倒置晾干；11. 加入1 ml 1×TE并溶解，溶解后转移入1.5ml 离心管中，贮藏于-20°C待用.取各单株的1个分蘖提取DNA。
SDSPAGE所有详细试剂配方
SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。
该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。
下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。
一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。
搅拌溶解直至均匀。
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。
2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。
-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。
二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。
-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。
-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。
2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。
-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。
-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。
五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。
SDS电泳溶液的配置
1、5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
试剂
浓度
称重
备注
Tris
0.125 M
15.1g
加入800 ml的双蒸水溶解，
定容至1 L，室温保存
甘氨酸（Glycine）
1.25 M
94g
SDS
0.5%（W/V）
5g
2、染色液
试剂
浓度
称重
备注
乙醇
25%（V/V）
250 mL
双蒸水溶解，定容至1 L，滤纸过滤后，室温保存
冰醋酸
8%（V/V）
80 mL
考马斯亮蓝
0.25%
2.5g
3、脱色液
试剂
浓度
称重
备注
乙醇
25%（V/V）
250 mL
定容至1 L，室温保存
冰醋酸
8%（V/V）
80 mL
4、30%丙烯酰胺混合液（29：1）
试剂
浓度
称重
备注
丙烯酰胺
29%（W/V）
29g
加热溶于60 ml双蒸水中，定容至100ml，滤纸过滤，棕色瓶室温保存
9、浓缩胶缓冲液（pH6.8）－0.5mol/L Tris－HCl
试剂
浓度
称重
备注
Tris
0.5mol/L
6.06g
调pH6.8，定容至100ml，
滤纸过滤，室温保存
1mol/L HCl
48%V/V）
48 ml
注：或先加水至80ml,用浓HCl调pH，再定容至100ml.
10、5×上样缓冲液
试剂
浓度
称重
备注
0.5mol/LTris－HCl（pH6.8）
wb实验中电泳液配制方法
wb实验中电泳液配制方法
电泳液是用于电泳分析的胶状物质，一般由缓冲液和胶液组成。
下面是一种常见的电泳液配制方法：
1. 缓冲液配制：
- 加入适量的Tris缓冲液粉末到去离子水中，充分搅拌溶解。
- 调整pH值至所需的范围，一般为pH 7-8。
- 可根据需要添加其他试剂，如EDTA、糖等。
2. 胶液配制：
- 将适量的聚丙烯酰胺（polyacrylamide）粉末加入去离子水中，用搅拌器搅拌溶解。
- 如果需要制备原位聚丙烯酰胺凝胶，可添加适量的过硫酸铵（APS）和N,N,N",N"-四甲基乙二胺（TEMED），以促进聚合反应。
- 根据需要调整胶液浓度，一般为5-20%。
3. 最后将缓冲液和胶液按照所需比例混合即可得到电泳液。
需要注意的是，不同实验目的和样品特性可能需要不同的电泳液配方和浓度，具体配制方法可根据实验要求进行调整。
同时，制备电泳液时需要注意操作规范，避免对人体和环境造成危害。
pcr电泳配置
电泳
1、凝胶制备：根据样品数量，配置相应孔数的凝胶，一般浓度为1-2％。
①配置1×TAE：1ml50×TAE + 49ml双蒸水，摇匀，备用。
②配胶：0.3-0.45g琼脂糖+30ml 1×TAE，0.5-0.75g琼脂糖+50ml 1×
TAE,1.0-1.5g琼脂糖+100ml 1×TAE，以此类推。
③熔化：微波炉熔化至液体完全透明。
④冷却：熔化的琼脂糖冷却（可用自来水冲洗三角瓶）到60～70℃时，加入EB 替代物
(30ml琼脂糖+1.8-2ul; 50ml琼脂糖+2.5-3ul;100ml琼脂糖+5-6ul)轻轻混匀。
2、铺胶：将冷却致60℃左右的凝胶倒入准备好的胶床内，插上梳子。
凝胶厚度3～5mm。
3、室温下静置1小时左右，凝胶固化。
拔下梳子，将凝胶置于电泳槽中，并使
样品孔位于电场负极。
4、向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液:越过凝胶表面即可。
原梳齿处(样品孔)即被缓冲液充满，如发现有气泡，应设法去除。
5、上样：用10ul移液枪吸取5ul PCR产物，轻轻的加入到凝胶的样品孔中，然后吸取5ul Marker到样品孔中。
6、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳：开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。
电泳条件：电压120v；时间0.5小时左右。
7、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。
8、电泳结果分析：
①用凝胶成像系统观察条带。
②保存图片。
琼脂糖凝胶电泳配方与步骤(精)
� RNA 琼脂糖凝胶电泳:配制:1. 0.5M EDTA(pH=8.0 :100ml :称取 18.61g Na 2EDTA ·2H 2O (分子量 372.24 ,加 80ml ddH 2O 剧烈搅拌, 用 NaOH 调节 PH 值至 8.0(约需 2g NaOH . 高压灭菌,室温保存。
2. 50×TAEloading buffer:(Tris acetate-EDTA buffer 电泳缓冲液组分:2MTris-乙酸;100mM EDTA(pH=8.0500mL:称 121.1g Trisbase(分子量 121.14 ,加 800ml ddH 2O 溶解,加 57.1ml 乙酸和 50ml 0.5M EDTA 溶液(pH=8.0 ,搅拌, ddH 2O 定容至 500mL . 室温保存。
3. 1×TAEloading buffer:取 20ml 50×TAE, ddH 2O 定容至 1L. 室温保存。
4. 100×Sybergreen :500ul :取 495ul 1×TAE于 1.5ml 离心管,加入 5ul Sybergreen 原液混匀,4℃锡纸避光保存。
注意:Sybergreen 原液需稀释 10000倍;6×DNAloading buffer 上样缓冲液需稀释六倍,最终稀释倍数应不小于 1×。
步骤:1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml ,我们用 30ml:称 0.3g 琼脂糖置于 100ml 锥形瓶中,加入 30ml 1×TAE ,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸 3次,至琼脂糖全部融化,摇匀,即成 1.0%琼脂糖凝胶液。
2. 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并放好梳子 .将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢展开 , 直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳子 , 取下胶带 , 将凝胶及内槽放入电泳槽中 . 添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 3. 加样 :样品制备:(10ul 体系 /样品槽于 0.25ml 离心管中样品 RNA (最后加 :2ul /3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen :0.1ulDEPC 水:至 10ul(注意 :加样前要先记下加样的顺序 . 分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 , 应更换一个枪头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面 .4. 电泳 :加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V , 样品由负极 (黑色向正极(红色方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时 , 停止电泳 .5. 电泳完毕后 , 取出凝胶 , 利用科 212凝胶成像系统 , 在紫外灯(trans UV 下观察拍照保存 .DNA 存在则显示出红色荧光条带 . RNA 完美提出应该是三条带:28, 18, 5.8。
电泳相关信息和配方
（1）Acr-Bis液（丙烯酰胺溶液）500 mL：于800 mL洁净的烧杯中，依次称取双丙烯酰胺4 g，丙烯酰胺146 g，缓慢倒入双蒸水约350 mL，以玻璃棒缓慢搅拌促进溶解。
注意，双丙烯酰胺粉末易漂浮在空气中，所以要称重时注意周围空气流速，称取丙烯酰胺时可以将烧杯中的双丙烯酰胺掩盖。
玻璃棒搅动幅度不要太大以免溶液底部的双丙烯酰胺浮起并扩散到空气中。
完全溶解的溶液应清澈无色透明。
待溶解完全后补加双蒸水至500 mL，倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱可保存10个月。
（2）4×分离胶缓冲液，500 mL：于500 mL洁净的量筒中，依次加入375 mL 2 M Tris-HCl (实测pH 8.9±0.1，25℃)，100 g/L SDS 溶液（冰箱取出后可微波加热促进储存液的溶化）20 mL，最后加入适量双蒸水至500 mL。
倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱最少可保存12个月。
有时冰箱温度过低会使储存液混浊，微波略微加热使其澄清后即可使用。
（3）100 g/L 过硫酸铵溶液(ammonium persulfate, AP)20 mL：2g过硫酸铵加20 mL 双蒸水，倒入无色塑料试剂瓶中，4℃冰箱最少可保存10个月。
注意配胶时不要交叉污染TEMED，可以以5 mL分装到4个无色塑料试剂瓶中分别保存。
（4）TEMED 成品液：购买后分装成2或5 mL小管装使用可避免母液受到污染。
（5）5×样品缓冲液，100 mL：依次加入50 mL 75%（v/v）甘油，20 mL 100 g/L SDS 溶液，10 mL 10 g/L 溴酚蓝溶液，5 mL 2 M Tris-HCl (实测pH8.9±0.1，25℃)，5 mL巯基乙醇，9 mL 双蒸水。
混合母液倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱至少可保存12个月。
可分装成10 mL 使用，不会使母液受到蛋白污染。
（6）10×电泳缓冲液，1000 mL：称取10 g SDS，30 g Tris base，144g 甘氨酸（事先要明确甘氨酸溶液的颜色，选用溶解后澄清无色的产品）于1000 mL的烧杯中，加水约700 mL 溶解，可微波炉加热（< 80℃）以促进溶解，注意不要使其沸腾，加热至烧杯烫手即可，间歇用玻璃棒搅拌。
wb实验中电泳液配制方法
wb实验中电泳液配制方法导言在分子生物学研究中，常常需要进行核酸电泳实验来分析和比较DNA或RNA片段的大小和纯度。
为了保证电泳实验的准确性和可重复性，我们需要正确配制电泳液。
本文将详细介绍wb实验中电泳液的配制方法，包括所需试剂、具体操作步骤以及常见问题和注意事项。
试剂准备1. 缓冲液•Tris缓冲液–Tris-HCl (pH 8.0) 1 M– 1 M Tris-HCl (pH 8.0) 用于配制1× Tris缓冲液•TAE缓冲液–50× TAE缓冲液：242 g Tris base、57.1 ml 0.5 M EDTA、114.1 ml 10% 醋酸溶液 (pH 8.0)，用去离子水加至1 L–1× TAE缓冲液：将50× TAE缓冲液按需稀释至所需体积•TBE缓冲液–10× TBE缓冲液：108 g Tris base、55 g Boric acid、40 ml 0.5 M EDTA，用去离子水加至1 L–1× TBE缓冲液：将10× TBE缓冲液按需稀释至所需体积2. 电泳液•TAE电泳液：1× TAE缓冲液中加入适量的琼脂糖 (通常为0.8-1.0%)•TBE电泳液：1× TBE缓冲液中加入适量的琼脂糖 (通常为0.8-1.0%)3. 变性载体•DNA标记物 (e.g. DNA分子量标记物)•RNA标记物 (e.g. RNA分子量标记物)4. 负载缓冲液•6×蓝酶载体缓冲液：300 μl 10% SDS、60 μl Bromophenol Blue、9 ml 水，加Tris缓冲液至15 ml•6×酚红载体缓冲液：300 μl 10% SDS、60 μl Phenol Red、9 ml 水，加Tris缓冲液至15 ml操作步骤1. 缓冲液配制1.根据所需实验类型选择合适的缓冲液 (TAE或TBE)2.准备所需量的缓冲液配方中的试剂3.按照配方比例将试剂溶解在去离子水中4.使用溶液计准确计量，搅拌均匀直至完全溶解5.调整pH值 (如有需要) 并使用其他试剂完全溶解2. 电泳液配制1.根据所需实验类型选择合适的电泳液 (TAE或TBE)2.按照所需体积计算电泳液的配方3.加入适量的琼脂糖，通常为0.8-1.0%4.搅拌均匀直至琼脂糖完全溶解5.如有需要，使用滤纸过滤液体以去除悬浮物3. 变性载体准备1.准备所需的DNA或RNA标记物2.根据标记物浓度和所需载体浓度计算添加的体积3.加入足够的载体缓冲液，使标记物达到所需浓度4.混合均匀，避免气泡形成5.如有必要，对混合物进行热变性4. 负载缓冲液配制1.准备所需量的蓝酶载体缓冲液和酚红载体缓冲液2.按照配方比例将试剂溶解在去离子水中3.使用溶液计准确计量，搅拌均匀直至完全溶解4.负载缓冲液可根据实验需要在电泳液中稀释或直接加入样品中常见问题和注意事项1. 缓冲液配制•注意使用正确的配方和试剂•确保所有试剂充分溶解•如需调整pH值，使用相应的酸碱溶液•配制过的缓冲液应在适当的条件下存储，以避免降解2. 电泳液配制•确保琼脂糖完全溶解，避免悬浮物对电泳结果的影响•如有必要，使用滤纸过滤液体以去除悬浮物•配制完的电泳液应密封保存，以免蒸发和污染3. 变性载体准备•根据实验需要选择合适的标记物和浓度•混合均匀以避免标记物不均匀的现象•如有必要，对混合物进行热变性以解离DNA或RNA结构并提高显色效果4. 负载缓冲液配制•准确计量缓冲液配方中的试剂，避免剂量误差•混合均匀以确保样品均匀负载•如需稀释，使用相应的电泳液进行稀释总结配制wb实验中的电泳液是准确和稳定进行核酸电泳实验的重要步骤。
常用电泳试剂配制方法
常用电泳试剂配制方法电泳试剂是在蛋白质或核酸电泳实验中使用的一系列化学试剂。
常用的电泳试剂包括缓冲液、凝胶、加载缓冲液、电泳盐溶液等。
以下是常用电泳试剂的配制方法。
一、缓冲液的配制方法：1.TAE缓冲液TAE缓冲液配方：0.04M缩醛酸，0.001M乙酸，0.001MEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，加入乙酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
2.TBE缓冲液TBE缓冲液配方：0.089M缩醛酸，0.089M硼酸，0.002MEDTA，pH8.3配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.3，加入硼酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
3. Tris-EDTA缓冲液 (TE缓冲液)TE缓冲液配方：10mM缩醛酸，1mMEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，然后加入EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
二、凝胶的配制方法：1.聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶配方：30%丙烯酰胺，0.8%季铵盐，1M缓冲液，10%过硫酸铵。
配制方法：将丙烯酰胺溶解在适量的蒸馏水中，加入季铵盐，搅拌均匀后加入缓冲液，最后加入过硫酸铵，混合均匀后注射到凝胶板中，等待凝固。
2.熔融琼脂糖凝胶熔融琼脂糖凝胶配方：1%琼脂糖，1×TAE缓冲液。
配制方法：将琼脂糖溶解在适量的蒸馏水中，加热至完全融化，冷却至60-70°C后加入TAE缓冲液，混合均匀后倒入凝胶板中，等待凝固。
三、加载缓冲液的配制方法：1.6×加载缓冲液6×加载缓冲液配方：40%甘露醇，0.25%溴酚蓝，一定量的TAE或TBE缓冲液。
配制方法：先将甘露醇溶解在适量的蒸馏水中，加入溴酚蓝，搅拌均匀后加入适量的TAE或TBE缓冲液，混合均匀后即可。
四、电泳盐溶液的配制方法：1.DNA电泳盐溶液DNA电泳盐溶液配方：1×TAE缓冲液。
SDS-PAGE电泳相关溶液的配置
电泳相关溶液的配置：1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml）：称取29g丙稀酰胺和1g bis丙稀酰胺，用水溶解定容到100ml，过滤，4摄氏度保存一个月。
2、5×SDS电极缓冲液：称取Tris base15.1g，甘氨酸94.g，SDS 5.g 加dH2O定容至1000ml。
3、2×样品缓冲液（10ml）：甘油2ml，溴酚蓝0.0202g，1MTris·Cl （pH6.8）1ml巯基乙醇0.14ml，10%SDS 4ml。
4、染色液的配制（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸；在电子天平上称取0.125%考马斯亮蓝R250 1.25g，再将其一一加到1000ml锥形瓶中，用蒸馏水加以补足至1000ml。
加入的先后顺序为：考马斯亮蓝R250，甲醇或者乙醇，蒸馏水，乙酸。
充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。
当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。
5、脱色液（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸、670ml蒸馏水加入烧杯中，待溶液混和均匀后加入盛脱色液的广口瓶；备用。
收集液的SDS-PAGE分析：1、取20ul收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
分离胶配方Resolving Gel (10ml)6%8%10%12%15%H2O 5.4 4.7 4.1 3.4 2.430% acrylamide mix 2.0 2.7 3.3454x resolving-gel buffer 2.5 2.5 2.5 2.5 2.520% SDS0.050.050.050.050.0520% APS0.050.050.050.050.05TEMED0.0080.0060.0040.0040.004浓缩胶配方（10ml）H2O 6.9 ml30% acrylamide mix 1.7 ml8x stacking-gel buffer1.25 ml20% SDS0.05 ml20% APS0.05 mlTEMED0.01 ml2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
蛋白质电泳试剂配制
1 蛋白质电泳试剂配制1）2M Tris-HCl(pH=8.8) 100ml称24.2gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=8.8（约4ml），加ddH2O 定容至100ml。
2）1M Tris-HCl(pH=6.8) 100ml称12.1gTris-base 加50ml ddH2O,加浓HCl至pH=6.8（约8ml），加ddH2O 定容至100ml。
3）10%（W/V）SDS 100ml称SDS10g，加ddH2O定容至100ml。
4）50%（V/V）甘油100ml量取50ml100%甘油，加ddH2O定容至100ml。
5）4×分离胶缓冲液100ml（B液）75ml 2M Tris-HCl(pH=8.8) 1.5M4ml 10%SDS 0.4%21ml ddH2O4℃保存6）4×堆积胶缓冲液100ml（C液）50ml 1M Tris-HCl(pH=6.8) 0.5M4ml 10%SDS 0.4%46ml ddH2O4℃保存7) 丙烯酰胺储存液100ml（A液）30%（W/V）丙烯酰胺29.2g0.8% 甲叉双丙烯酰胺0.8g加ddH2O40ml缓慢搅拌至粉末完全溶解，定容至100ml，过滤，4℃保存。
8）5×样品缓冲液10ml600ul 1M Tris-HCl(pH=6.8) 60mM（5×）12mM（1×）5ml 50%甘油25% （5×）5%（1×）2ml 10%SDS 2%（5×）0.4%（1×）500ul(0.775g) 2-巯基乙醇（DTT）14.4 mM（5×） 2.88mM（1×）1ml(0.1g) 10%溴酚兰900ul ddH2O4℃保存9）10%过硫酸铵（APS）10mL称1g ddH2O溶解，400uL每管分装于-20℃保存。
10）10×电泳缓冲液Tris-base 30g 25 mM （1×）甘氨酸188g 192 mM（1×）SDS 10g 0.1% （1×）加ddH2O至1L，pH=8.3左右，室温长期保存。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。