自体血注入大鼠脑出血模型的造模体会

自体血注入大鼠脑出血模型的造模体会

目的应用立体定位仪通过抽取自体鼠尾血回注大鼠大脑的方法造大鼠脑卒中的模型，研究和掌握造出血性脑卒中动物模型的方式和方法。方法SD雌性大鼠90只，在立体定位仪的辅助定位下，抽取鼠尾动脉血50 μL注入大鼠左侧尾状核，应用Longa 五级评分法对大鼠行为学观察评分，对大鼠脑出血模型进行评价。结果对90只SD大鼠制作脑出血模型，86只存活大鼠均有神经功能缺损。结论应用自体鼠尾血回注大脑的方法可构建稳定的出血性脑卒中动物模型。

标签：自体血注入法；脑出血；模型；大鼠

出血性脑卒中是原发于脑实质内的非外伤性出血，致残及致死率高较高，该病严重危害着人类的健康。对脑出血的实验研究一直受到广泛重视，脑出血造模的稳定性、同患者发病表现的接近性直接关系到实验研究的科学性和实用性。本实验研究通过鼠尾动脉血分次回注自体大鼠脑组织内，建立脑出血的大树模型。

1资料与方法

1.1实验仪器脑立体定向仪（日本）；100 μL微量注射器，涡轮牙钻机；手术相关器械

1.2一般资料近交成年雌性SD大鼠90只，体重（300±20）g。由河北医科大学实验动物中心提供，标准普通饲料喂养和自由饮水，昼夜自然节律，饲养环境为河北大学医学部动物实验中心多层层流架。

1.3方法大鼠脑出血模型的制备：应用10%水合氯醛对大鼠腹腔注射量为300 mg/Kg进行麻醉，头部备皮并应用碘伏常规消毒后，俯卧位固定于定向仪上，前囟抬高1 mm，取长度约为2 cm正中纵形切口，小型扩皮器牵开切口，取前囟点中线右侧旁开3.0 mm，沿矢状面向后1.5 mm，牙钻钻透颅骨，深及骨膜。在消毒后在鼠尾腹侧正中做一纵行切口，抽取尾动脉不加抗凝剂的动脉血液约60～70 μL。将针头垂直于颅骨骨孔的方向，进针约6 mm，缓慢注入50 μL自体动脉血液，注血时间以两分钟为宜，为防止鼠血反流，将针留置10 min。缓慢退针，骨蜡封闭颅骨骨孔，缝合手术创口。

1.4行为学的分级评估参照Longa 五级评分法[1]，对大鼠进行神经功能缺损评分：0级：无体征，记0分；Ⅰ级：动物不能完全伸直其前肢，记1分；Ⅱ级：动物一侧肢体瘫痪，有追尾现象，记2分；Ⅲ级：动物不能站立/ 打滚，记3分；Ⅳ级：无自发性活动，有意识障碍，记4分。

2结果

大鼠实验脑出血造成后，进行行为学评分，每只大鼠均采用Longa方法，反应其行为学变化。根据对实验动物的观察，在大鼠大脑注射自体鼠尾动脉血液后，

动物迅速出现行为和神经功能异常，大鼠反应迟钝、皮毛无光泽、精神萎缩、进食下降，对侧肢体出现瘫痪，行走追尾，严重者动物不能站立/打滚，个别大鼠呈现意识障碍，昏迷等表现，其功能异常程度与出血的严重程度相关。脑组织标本可见明显的血肿占位，结合对大鼠造模3 d后进行行为学评分，评分2～3分得提示模型建立成功。评分1分的4只，2分的34只，3分46只，4分的6只。造模成功80只，成功率88.9%。

3讨论

脑出血动物模型的制备成为了研究脑血管病不可或缺的基础，而好动物脑出血模型是接近于人类脑出血的血肿、水肿、缺血缺氧等病生理變化，符合疾病的发展规律的，并且动物模型具有较好的稳定性、可重复性。

动物模型的应用，使脑出血过程的神经生物学基础研究得到较大进展。在过去几十年里有很多方法造脑出血的动物模型，用于模仿脑出血的发病机制，其原理各不相同，效果也不尽相同，模型的选择至关重要。常用的方法有以下几种：①胶原酶诱导脑出血模型，应用胶原酶向脑组织中注入，胶原酶刺激破坏脑内组织，破坏血管而渗血形成血肿[1]。②微球囊充胀脑出血模型，在大鼠大脑尾状核包埋微小气囊，充盈气囊造模，产生占位效应脑部伤害一致，可重复性好，但同颅内血肿产生的其他病生理改变不同。③自发性脑出血模型，用遗传方式筛选出自发性高血压大鼠，待出现高血压严重并发症脑出血后提示造模成功，本模型能够较准确的模拟高血压脑出血等病理生理变化，存在的问题是获得脑出血模型的时间不能把握，出血部位及大小各异，各模型间对比性差；④凝固自体动脉血注入脑出血模型，抽取大鼠股动脉血，静置5 min待动脉血凝固后后脑内注射。此方式可控制鲜血沿针道返流问题，但同时存在血液凝固后血肿在脑内塑形困难[2]。⑤应用立体定位技术取自体血注血脑出血模型，即本研究采用造模方法，新抽取鲜鼠尾动脉血，应用立体定位仪固定微量注射器，精确定位于尾状核，穿刺并脑内注血，注血量50 μL血相当与人35 mL的血肿，应用非肝素化自体动脉血，更接近接近人类自发性出血性卒中，适合研究脑出血病理生理特点，能够观察各种因子在血液凝固过程中对脑血流及脑组织细胞代谢的影响，本研究取SD 大鼠脑内最大的核团--尾状核，是高血压脑出血最好发部位，对脑出血的研究提供可靠的依据[3]。

根据对实验动物的观察，其功能异常程度与病变严重程度一致。脑组织标本在尾状核部位可见明显的血肿形成，提示模型建立成功，本组大鼠造模成功率88.9%，本造模方式是能够较好的模拟脑出血的病理生理的改变，应用此方法保证了在对脑出血的研究过程中确保实验数据的真实性和可靠性。

参考文献：

[1]倪厚杰，刘娜，陈娟，等.神经损伤与功能重建[J].2012，7（06）：411-412.

[2]吕田明，陆兵勋.大鼠尾状核注射凝固自体动脉血脑出血模型[J].中风与神经疾病杂志，2006，23（1）：88-90.

[3]张祥建，刘春燕，祝春华，等.大鼠自体动脉血脑出血动物模型的建立[J].脑与神经疾病杂志，2003，11（06）：341-344.