胰蛋白酶分离纯化与动力学研究

实验论文

胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究学院：化工与材料学院

专业：姓名：班级：

生物工程

学号：

指导老师：

中国·珠海

二○一六年四月

诚信承诺书

本人郑重承诺：本人承诺呈交的毕业设计《胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究》是在指导教师的指导下，独立开展研究取得的成果，文中引用他人的观点和材料，均在文后按顺序列出其参考文献，设计使用的数据真实可靠。

本人签名：

日期：年月日

胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究

摘要

本实验通过用有机溶剂沉淀法和离心法提取胰蛋白酶的专一性抑制剂-鸡卵类粘蛋白（CHOM）作为亲和配基，运用了Bradford法定量测定蛋白质浓度再利用亲和层析法对胰蛋白酶进行分离纯化，然后通过用抑制剂对酶反应速度的影响来了解酶促反应，掌握其规律，为了最大限度地实现酶促反应的高效率、寻找最有利的反应条件以及了解酶在代谢中的作用和某些药物的作用机理等，都需要掌握酶促反应速度的规律。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行酶纯度检验以及其相对分子量的测定。

关键词：胰蛋白酶；鸡卵粘蛋白；亲和层析法；米氏常数；酶促反应动力；

聚丙烯酰胺凝胶电泳

Trypsin of isolation and purification and dynamic research

Abstract

This experiment through with organic solvent precipitation method and centrifugal method extraction trypsin of specific sex inhibitors-chicken eggs class stick protein (CHOM) as Affinity distribution base, using has Bradford method quantitative determination protein concentration again using affinity chromatography method on trypsin for separation purification, then through with inhibitors on enzyme reaction speed of effect to understand enzyme promoting reaction, master its law, to maximum to achieved enzyme promoting reaction of efficient, and To find the most favorable conditions and the role of the enzyme in the metabolic mechanism and effect of certain drugs, needs to master the law of speed of enzymatic reactions. Finally, polyacrylamide gel electrophoresis of enzyme purity test and the determination of its molecular weight.Key words: trypsin; egg protein; affinity chromatography;-Menten constant; enzymatic reaction force; Polyacrylamide gel electrophoresis

目录

摘要 ........................................................................................................................................... II Abstract .................................................................................................................................... I III 目录 ...................................................................................................................................... I IIIII 1前言 (11)

1.1研究背景 (11)

1.2胰蛋白酶简要介绍 (11)

1.3蛋白分离纯化方法综述 (11)

1.3.1沉淀法 (11)

1.3.1.1盐析法 ................................... 错误!未定义书签。错误!未定义书签。

1.3.1.2有机溶剂沉淀法 (22)

1.3.1.3蛋白质沉淀剂 ....................... 错误!未定义书签。错误!未定义书签。

1.3.1.4聚乙二醇沉淀作用 (22)

1.3.1.5选择性沉淀法 (22)

1.3.2吸附层析 (22)

1.3.

2.1吸附柱层析 ........................... 错误!未定义书签。错误!未定义书签。

1.3.

2.2薄层层析 ............................... 错误!未定义书签。错误!未定义书签。

1.3.

2.3聚酰胺薄膜层析 ................... 错误!未定义书签。错误!未定义书签。

1.3.3离子交换层析 (33)

1.3.4凝胶过滤 (33)

1.3.5亲和层析 (33)

1.3.6聚焦层析 (44)

1.3.7气相色谱 (44)

1.3.8高效液相色谱 (44)

1.4胰蛋白酶研究进展 (44)

2实验原理 (66)

2.1胰蛋白酶的亲和配基-鸡卵粘蛋白的分离与定量 (66)

2.1.1蛋白质沉淀 (66)

2.1.1.1盐析 (66)

2.1.2蛋白质定量 (66)

2.2亲和层析法分离纯化胰蛋白酶 (66)

2.2.1亲和层析法的各项要素 (66)

2.2.2亲和层析法介绍 (77)

2.2.3胰蛋白酶活性测定 (77)

2.3酶动力学研究 (88)

2.3.1米氏方程 (88)

2.3.2抑制动力学 (88)

2.4聚丙烯酰氨凝胶电泳 (88)

2.4.1 PAGE 凝胶的组成 (88)

2.4.2电泳的浓缩作用 (88)

2.4.3 PAGE 染色及干燥 (99)

3实验材料（设备） (1010)

3.1实验材料 (1010)