高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

实验室应用案例高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量
2018年3月
版权所有© sainaer Corporation
保留所有权利
1摘要
本文建立了一种根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片黄芪中黄芪甲苷苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.17%，峰面积RSD%为1.64%。

关键词：中药饮片黄芪黄芪甲苷 E800型蒸发光散射检测器高效液相色谱黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。

黄芪甲苷能增强
机体免疫力、提高机体的抗病能力。

黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。

黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。

其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。

黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。

由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。

图1 黄芪甲苷结构式
2检测部分
2.1仪器
本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。

具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。

2.2 分析条件
色谱柱：岛津WondaSil C18 Superb 5um
流动相：乙腈：水=32:68（V/V）
流速：1ml/min
柱温：35℃
气体流量：2.8L/min
蒸发温度：75℃
进样量：10μL
等度洗脱
2.3 标准品溶液的配制和样品处理
标准品品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

样品溶液的制备取干燥的黄芪切片，粉碎后，取中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄芪样品溶液。

3结果
3.1 标样的色谱图
图2 0.5mg/ml标准品色谱图
3.2 线性关系
将配制浓度为0.5mg/ml的标准溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5μL、5μL、10μL、15μL、20μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积对数为横坐标，已进样量对数为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。

标准品的浓度及峰
面积的结果见表1。

图3 黄芪甲苷的标准曲线表1 黄芪甲苷进样量及峰面积
3.3 精密度试验
50mg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果
如表2所示：
序号保留峰面积
1 11.591 142152
2 11.542 145212
3 11.458 144879
4 11.523 148721
5 11.542 148524
6 11.554 144258
平均11.535 145624
RSD% 0.381 1.750
表2 黄芪甲苷重复性数据（n=6）
3.4 样品测试
使用2.3配制好的黄芪甲苷样品溶液得出图4图谱：
图4 黄芪样品图谱
表3 黄芪中黄芪甲苷测定结果
4结论
经方法有效性测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。

数据重现性好，保留时间RSD%=0.38%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.75%（n=6），小于国家要求2.0%以内。

并且峰形完好，拖尾因子为1.02。

说明此方法适用于检测黄芪中黄芪甲苷的含量。

5客户现场照片。