叶绿素a与叶绿素b含量的测定
光合作用色素含量测定
• 实验步骤： 实验步骤： • 1、色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并 剪成碎块，称取0.5 g放入研钵中加纯丙酮5 mL， 加适量石英砂及少许碳酸钙，研磨成匀浆，再加 80％丙酮5 mL，将匀浆转入离心管，并用适量80 ％丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉 淀，上清液用80％丙酮定容至20 mL。 • 2、测定光密度：取上述色素提取液1 mL，加80 ％丙酮4 mL稀释后转入比色杯中，以80％丙酮为 对照，分别测定663 nm、645 nm处的光密度值。 • 3、按公式计算叶绿素a，b及总叶绿素含量。再 根据喜事倍数分别计算每克鲜重叶片中色素含量。
?实验步骤?1色素的提取取新鲜叶片剪去粗大的叶脉并剪成碎块称取05g放入研钵中加纯丙酮5ml加适量石英砂及少许碳酸钙研磨成匀浆再加80丙酮5ml将匀浆转入离心管并用适量80丙酮洗涤研钵一并转入离心管离心后弃沉淀上清液用80丙酮定容至20ml
叶绿素含量测定
• 实验目的：掌握未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿 实验目的：掌握 素a，b含量的方法及其计算。 • 试验原理：混合液中两种组分存在时，可通过测定吸光 试验原理： 度，根据Lambert－Beer定律计算二者含量。叶绿素a 的最大吸收峰在663 nm，叶绿素b最大吸收峰在645 nm。根据Lambert－Beer定律，两种组分的混合液，二 组分的浓度C与光密度OD之间的关系如下： • OD663＝Ca·Ka663＋Cb·Kb663 • OD645=Ca·Ka645+Cb·Kb645 • 从文献中查得Ka663为82.04，Kb663为9.27；Ka645为 16.75，Kb645为45.60. • 通过代数推算，得 • Ca＝12.7·OD663－2.69·OD645 • Cb＝22.9·OD645－4.68·OD663 • CT＝Ca＋Cb＝8.02·OD663＋20.21·OD645 • 式中单位为mg L－1。
不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较(分光光度法测定)
一、实验课题名称不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较（分光光度法测定）二、文献综述1.叶绿素a的生物合成过程起始物是谷氨酸，之后为5-氨基酮戊酸，两分子的ALA缩合形成胆色素原(PBG),4分子PBG相互连结形成原中卟啉IX.原卟啉IX与Mg结合形成Mg-原卟啉原IX，光下E环的环化形成，D环的还原作用和叶绿醇尾部的连接完成了整个合成过程，合成过程中的许多步骤在图中已省略2.影响叶绿素形成的条件（1）光光是影响叶绿素形成的主要条件。
从原叶绿素酸酯转变为叶绿酸酯需要光，而光过强，叶绿素又会受光氧化而破坏。
黑暗中生长的幼苗呈黄白色，遮光或埋在土中的茎叶也呈黄白色。
这种因缺乏某些条件而影响叶绿素形成，使叶子发黄的现象，称为黄化现象(etiolation)。
也有例外情况，例如藻类、苔藓、蕨类和松柏科植物在黑暗中可合成叶绿素，其数量当然不如在光下形成的多；柑橘种子的子叶及莲子的胚芽在无光照的条件下也能形成叶绿素，推测这些植物中存在可代替可见光促进叶绿素合成的生物物质。
(2)温度叶绿素的生物合成是一系列酶促反应，受温度影响。
叶绿素形成的最低温度约2℃，最适温度约30℃,最高温度约40℃。
秋天叶子变黄和早春寒潮过后秧苗变白，都与低温抑制叶绿素形成有关。
高温下叶绿素分解大于合成，因而夏天绿叶蔬菜存放不到一天就变黄；相反，温度较低时，叶绿素解体慢，这也是低温保鲜的原因之一。
(3)营养元素叶绿素的形成必须有一定的营养元素。
氮和镁是叶绿素的组成成分，铁、锰、铜、锌等则在叶绿素的生物合成过程中有催化功能或其它间接作用。
因此，缺少这些元素时都会引起缺绿症(chlorosis)，其中尤以氮的影响最大，因而叶色的深浅可作为衡量植株体内氮素水平高低的标志。
(4)氧缺氧能引起Mg-原卟啉IX或Mg-原卟啉甲酯的积累，影响叶绿素的合成。
(5)水缺水不但影响叶绿素生物合成，而且还促使原有叶绿素加速分解，所以干旱时叶片呈黄褐色。
通过对室外旱池处理条件下的甘薯叶片叶绿素含量变化的研究，结果表明，水分胁迫下甘薯品种叶片中叶绿素a、b及总叶绿素含量比对照均有所下降，叶绿素a/b比值比对照也有所下降，且叶绿素a/b比值占对照百分率与品种抗旱性呈极显著负相关。
实验四叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定
实验四：叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定实验目的1、了解叶绿素分离与提取的原理和方法2、了解它们的光学特性和理化性质3、了解叶绿素a、b含量测定的方法。
实验原理1.脂溶性叶绿体色素提取：可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
2.分离：（1）叶绿体色素的分离＜纸层析法＞因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
纸层析是以滤纸纤维为固定相，而以有机溶剂作为流动相。
由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。
（2）叶绿素与类胡萝卜素的分离<皂化反应>叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇与叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
3.叶绿素a、b含量的测定：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其溶液浓度c和液层厚度L成正比，即：A=φCL(φ为吸光系数) 因此，根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，用公式即可计算出提取液中各色素含量。
测定663nm 和645nm两个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b在对应波长下的吸光系数即可求出叶绿素a、b含量。
其校正过的公式为：Ca＝12.7A663－2.69A645 Ca:叶绿素a浓度,mg/LCb＝22.9A645－4.68A663 Cb:叶绿素b浓度,mg/LCT＝Ca + Cb CT:叶绿素总浓度,mg/L实验器材：1、仪器：剪刀、漏斗、烧杯、分光光度计、分液漏斗、铁架台、移液管、吸耳球、试管、毛细管、平底大试管、天平、研钵、滤纸2、试剂：石英砂、碳酸钙、丙酮、乙醚、四氯化碳、无水硫酸钠、30%KOH-甲醇溶液3、材料：菠菜实验步骤：1、叶绿素的提取称取去中脉叶片2g左右，剪碎放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成浆，再加入丙酮10ml，用漏斗过滤即为色素提取液，暗处备用。
叶绿体色素的提取、分离及含量测定
叶绿体色素的提取、分离及含量测定实验目的叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。
叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)，因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关，在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加而升高。
另外，叶绿素的含量是植物生长状态的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的含量与组成，并因之影响植物的光合速率。
因此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的光合生理与逆境生理具有重要意义。
实验原理从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
纸层析是其中最简单的一种。
当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相(即流动相和固定相)间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。
强光可以破坏离体的叶绿素，因为植物体内本来有还原酶，可以破坏光产生的强氧化物质。
而离体的叶绿素提取液中不含有还原酶，光产生的强氧化物质会破坏叶绿素。
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b，二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度。
A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素b浓度（单位为g/L），82.04和9.27分别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。
植物体叶绿素含量的测定实验报告
实验报告植物体叶绿素含量的测定摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。
根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a 、叶绿素b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验材料：生物材料：菠菜叶片0.25g ，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g ，缺磷番茄苗叶片0.2g ；试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml量筒、50ml 容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。
实验步骤：1.叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.25g ，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCO 3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇10ml ，静置10min ，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50ml 。
2.吸光度的测定取光径1cm 比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm 下测定吸光度。
3.结果计算依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a 、B 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
C a （叶绿素a ）=13.95A 665 – 6.8A 649C b （叶绿素b ）=24.96A 649 – 7.32A 665C T （叶绿素）=C a +C b =18.16A 649 + 6.63A 665C x.c （类胡萝卜素）=(1000A 470 – 2.05C a -114.8C b )/248叶绿体色素含量 = ）样品鲜重（稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（g /mg ⨯⨯L L实验结果：菠菜叶片提取液吸光值：1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。
实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定
C—叶绿素的浓度（mg/L)；v—提取液体积(ml)； n—稀释倍数；m—样品鲜重（g)
作业：
比较阳生植物和阴生植物的叶绿素有何不 同？
下周实验：植株磷素的测定(钼蓝法)
三、实验器料
1、材料： 菠菜或其它绿色植物叶片
2、试剂： 80% 丙 酮 或 96% 乙 醇 ； 石 英 砂 ；
CaCO3； 3、仪器：分光光度计（分光光度计
的使用）、高速离心机
四的植物叶片，称取0.2g剪碎后置 于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和 石英 砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙 酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定 容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80% 丙酮 定容至25ml。
2. 测定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙 酮
作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸
光度。 3.计算：
把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶 绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。 根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：
实验六 叶绿素含量的测定
一、实验目的
1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶 液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素 的方法及计算；
2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量 的意义。
二、实验原理
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和 类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又 存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同 时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度， 可分别测定在663nm、645nm、470 nm （分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红 光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素 a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量的测定(分光光度法)
实验步骤
4. 称重比较：将叶片对应部位重叠在一起，用 打孔器均匀打相同数目的孔（50），分别置 于光照及黑暗的两个称量皿中，80-90℃下 烘干至恒重，在分析天平上称重比较。
实验原理
改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取 下置于暗处，另一部分则留在光下进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位取同 等面积，分别烘干称重。因为对称叶片的两对应 部位的等面积的干重，开始时被视为相等，照光 后叶片重量超过暗中的叶重，超过部分即为光合 作用产物的量，并通过一定的计算可得到光合作 用强度。
结果分析
1. 仔细观察和记录实验结果。 2. 计算出Ca、Cb及总Ct的质量浓度。 3. 计算今天菠菜中Ca、Cb及总Ct的含量。 叶绿素a的含量（mg/g鲜重）= 叶绿素b含量（mg/g鲜重）= 叶绿素c含量（mg/g鲜重）=
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验六 植物光合强度的测定 （改良半叶法）
叶绿素叶绿素aa的含量的含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素bb含量含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素cc含量含量mggmgg鲜重鲜重韩山师范学院生物系韩山师范学院生物系植物生理学实验植物生理学实验改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同等面积分别烘干称重
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量 的测定（分光光度法）
叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定
叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定目录一、内容概括 (2)1. 叶绿素简介 (2)2. 叶绿素a与叶绿素b的重要性 (3)二、实验原理 (4)1. 叶绿素a与叶绿素b的光谱特性 (5)2. 鉴定原理 (5)三、材料与方法 (6)1. 实验材料 (7)样品来源 (8)样品处理 (8)2. 实验仪器与试剂 (9)萃光仪 (10)分光光度计 (10)缓冲液 (11)3. 实验步骤 (12)样品提取 (12)测定波长 (13)重复测定 (14)四、结果分析 (15)1. 叶绿素a与叶绿素b的吸收光谱图 (16)2. 数据处理与结果解读 (17)3. 结果讨论 (18)五、结论 (20)1. 快速鉴定叶绿素a与叶绿素b的效果 (21)2. 实验的局限性及改进方向 (21)一、内容概括本文档旨在介绍叶绿素a和叶绿素b的快速鉴定方法。
内容将涵盖叶绿素a和叶绿素b的基本性质、特点及其在生物体系中的重要性。
本文还将详细阐述快速鉴定叶绿素a和叶绿素b的流程和步骤，包括实验前的准备、实验操作的具体步骤以及结果的解析。
还将提及一些可能出现的问题以及解决策略，以确保实验的准确性和可靠性。
本文档旨在为研究人员、学生及叶绿素相关领域的从业者提供一种便捷、高效的鉴定方法，以推动相关领域的研究进展。
1. 叶绿素简介又称植物色素，是植物中一类重要的绿色色素，广泛存在于高等植物、藻类和某些微生物中。
它们是植物进行光合作用的关键色素，通过吸收和转化光能，将二氧化碳和水转化为有机物质，并释放氧气。
叶绿素的结构中包含一个镁原子，其骨架由两个吡咯环和一个碳链组成，这使得叶绿素具有特定的光谱特性，能够在特定波长下吸收光。
叶绿素a和叶绿素b是叶绿素中最主要的两种类型，它们在结构上有所不同。
叶绿素a的分子结构中除了镁原子外，还包含一个长链的碳链和一个醛基，这使得它呈现出蓝绿色的特征。
而叶绿素b的分子结构中则不含醛基，因此它呈现出黄绿色。
尽管这两种叶绿素在颜色上有所差异，但它们在光合作用中的作用却是相同的。
叶绿素a和b含量的测定
实验14叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm,同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：D665=83.31Ca+18.60C b ........................................................................... .(1)Du9=24.54Ca+44.24 C b .......................................................................... .(2)⑴（2）式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。
为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。
解方程式⑴(2)，则得：C A=13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B=25.8 D 649——7.6 D 665 (4)G=C+C B=6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G为总叶绿素浓度，C A、C B为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1. 称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml。
2. 取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。
叶绿素a、b含量的测定(分光光度计法和SPAD叶绿素仪法)
实验四叶绿素a、b含量的测定（分光光度计法和SPAD叶绿素仪法）植物叶面积的测定（仪器法、画纸称重法）一、实验目的：1.掌握叶绿素的提取方法及叶绿素含量测定的两种方法；2.学会使用VIS-723G和723N（new)的分光光度计的比色杯较正和定波长的两个程序；仪器法、复印称重法测定植物叶面积3.学会SPAD叶绿素仪和AM-300手持式叶面积仪的使用4.了解CB-1102便携式光合蒸腾测定仪二、实验原理：略、三、实验步骤：1.叶绿素a、b含量的测定（分光光度计法）P373人一组，实验材料为大红花成熟叶和嫩叶a)叶绿体色素的提取（0.5g叶片剪碎，加少量石英砂和碳酸钙用95%乙醇研磨，提取定容至25mL）b)稀释至5倍后测A665nm和A649nmc)计算(请列出计算公式）•更正：• 1.请用95%乙醇取代丙酮提取叶绿素。
• 2. 仍用书本上所列的公式。
2.叶绿素a、b含量的测定（SPAD叶绿素仪法）3人一组，实验材料为灰莉叶片实验原理：1.SPAD-502 叶绿素仪通过测量叶片在两种波长光学浓度差方式650nm 和940nm来确定叶片当前叶绿素的相对数量。
2.测量值是通过对在二个不同波长区域，叶片传输光的数量进行计算，在这二个区域叶绿素对光吸收不相同的。
这二个区域是红光区(对光有较高的吸收且不受胡萝卜素影响)和红外线区(对光的吸收极低)。
SPAD—502叶绿素仪使用说明一）电池安装1、按照电池盒上面的箭头标定方向旋转，打开电池盒盖。
2、放入盒内两节AA号码电池，并确信是按照指示放入电池。
3、必须是碱性或是碳—锌电池。
不要混淆电池型号和新旧电池。
4、把电池盒盖按照上面箭头方向旋转，直到盖子和仪器比较适当为止，不能太紧。
5、当电源开关打到ON的位置时，如果电源符号出现在显示屏上，表示电池已经耗尽，应该更换电池了。
如果电源符号没有出现，检查一下电池是否正确地插入或是否有电。
二）调零无论什么时候关闭电源之后需要在打开时，都需要调零。
叶绿体色素含量的测定 ----分光光度法
依据下列乙醇提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶 绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
计算公式
95%乙醇提取液中色素浓度的计算
Ca（叶绿素a）=13.95A665 – 6.8A649 Cb（叶绿素b）=24.96A649 – 7.32A665 CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 – 2.05Ca-114.8Cb)/248
叶绿体色素含量= 色素浓度（mg.L1） 提取液体积（L） 稀释倍数 样品鲜重（或干重、面积，g或m2）
实验结果
（1）菠菜吸光值
波长（nm） 665 649 470
1 0.249 0.111 0.278
2 0.234 0.104 0.262
3 0.238 0.105 0.268
平均 0.241 0.107 0.269
类胡萝卜素总含量=0.52mg/g
实验结果
（2）全素培养番茄
波长/组别 1
2
3
平均
665nm 0.302 0.306 0.300 0.303
649nm 0.132 0.132 0.131 0.132
470nm 0.359 0.358 0.352 0.356
各色素含量 Ca（叶绿素a）=13.95A665 – 6.8A649=3.33mg/l Cb（叶绿素b）=24.96A649 – 7.32A665 =1.08mg/l CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665=4.41mg/l Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 – 2.05Ca114.8Cb)/248=0.91mg/l 叶绿素总含量=11.025mg/g 类胡萝卜素总含量=2.275mg/g
水稻叶绿素含量的测定改良版
水稻叶绿素含量的测定实验原理：根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在特定波长下测定叶绿素提取物的吸光值，然后利用公式计算出样品中叶绿素的含量。
实验目的：可以检测水稻叶片中叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。
试剂：国药试剂（分析纯）抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮：H2O =4.5：4.5：1仪器：分析天平(Adventurer，USA)分光光度计DU640 (Backman，USA)离心机(Backman, USA)磨样机玻璃珠直径6mm 精密型淘宝网购买操作步骤：1. 取新鲜水稻叶片，擦干后去中脉。
2. 用分析天平称取0.02-0.035g的叶片到2ml离心管中，加一个直径6mm的玻璃珠，盖紧盖子。
3. 在液氮中冻10min左右，装入液氮预冷的金属底座中，用磨样机打碎，55hzfor 30s。
（此磨样机磨样的方法可以用到很多的实验当中，具体参数自己摸索一下就可以了）4. 从金属底座中取出样品，立即开盖放掉气化液氮，否则液氮受热会把离心管炸开，毁掉样品。
5. 每管加入抽提Buffer 1.8ml，室温下避光摇15min。
6. 6000rpm离心30s。
7. 以抽提Buffer为空白，使用紫外分光光度计DU640在波长645和663下测定叶绿素提取物的吸光值，DU640测量吸光值的量程在0.2-0.8之间，如果样品太浓，可以稀释。
4. 结果分析：根据Arnon（1949）法的公式加以修正计算叶绿素含量：叶绿素a=(12.72A663-2.59A645)×v/w×1000叶绿素b=(22.88A645-4.67A663)×v/w×1000叶绿素总含量=(20.29A645+8.05A663)×v/w×1000注意事项：1. 为避免叶绿素见光分解，操作时尽量在弱光下进行，速度要快。
2. 样品不宜太多，否则加入抽提Buffer后，2ml离心管会装不下。
叶绿素a与叶绿素b含量的测定
将上式整理，可以得到下式： Ca=0.0127A663-0.00269A645 （3） Cb=0.0229A645-0.00468A663 （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为： Ca=12.7A663-2.69A645 （5） Cb=22.9A645-4.68A663 （6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7） CT为叶绿素的总浓度
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b二者的吸收光谱虽有不同但又存在着明显的重叠在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度可分别测定在663nm和645nm分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰的光吸收然后根据lambertbeer定律计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度
实验原理
• 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 • A663=82.04Ca+9.27Cb （1） • A645=16.75Ca+45.60Cb （2）
实验仪器及材料
• 实验材料 实验材料：
– 菠菜或其它绿色植物
• 实验仪器及试剂： 实验仪器及试剂
– UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；
实验步骤
1. 提取叶绿素
选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀浆，用 滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。
光合色素测定实验报告计算过程
光合色素测定实验报告计算过程实验目的：本实验旨在通过测定叶绿素a和叶绿素b的吸收光谱，计算出叶绿素a/b的比值，从而了解叶绿素的组成和光合作用的效率。
实验原理：光合作用是植物通过吸收光能转化为化学能的重要过程。
光合色素是参与光合作用的关键物质，其中叶绿素是最主要的光合色素。
叶绿素可分为叶绿素a和叶绿素b两种类型，它们在吸收光的波长范围上略有差异。
实验步骤：1. 提取叶绿素溶液：取新鲜的植物叶片，用酒精和醋酸乙酯的混合溶液将叶绿素溶解出来，制备成一定浓度的叶绿素溶液。
2. 测定吸收光谱：使用分光光度计，将叶绿素溶液放入光池中，扫描波长范围为400-700nm，记录每个波长下的吸光度值。
3. 计算叶绿素a/b的比值：根据吸光度值计算叶绿素a和叶绿素b 的吸收峰值，并计算它们的比值。
计算过程：1. 根据测定的吸光度值绘制吸收光谱曲线。
2. 在吸收光谱曲线上找到叶绿素a和叶绿素b的吸收峰值所对应的波长。
3. 记录叶绿素a的吸光度值为Aa，叶绿素b的吸光度值为Ab。
4. 计算叶绿素a/b的比值：a/b = (Aa / 12.7) / (Ab / 21.5)。
实验结果和讨论：根据实验测得的数据，计算得到叶绿素a/b的比值。
该比值反映了叶绿素a和叶绿素b的相对含量，可以反映植物光合作用的效率。
通常情况下，叶绿素a/b的比值在1.5-3.5之间，数值越大表示叶绿素a的相对含量越高，说明植物对光的吸收更为高效。
然而，需要注意的是，叶绿素a/b的比值并不能完全代表植物的光合作用效率。
因为光合作用的效率还受到其他因素的影响，如光照强度、温度等。
因此，只通过叶绿素a/b的比值来评估光合作用的效率是不全面的，还需要综合考虑其他因素。
实验中提取叶绿素溶液的过程需要注意保持环境的暗处和低温，以避免叶绿素的降解和光敏化反应的发生。
实验中使用的溶剂也要保持纯净，以免对实验结果产生干扰。
结论：通过光合色素测定实验，我们可以得到叶绿素a/b的比值，从而了解植物叶绿素的组成和光合作用的效率。
测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法
植物叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，能够在吸收光子的过程中将光能转化为化学能。
因此，测定植物叶绿素含量是衡量植物光合作用效率的重要指标之一。
1. 乙醇提取法
将待测叶片粉碎后加入适量的95%乙醇中，放置于暗处浸泡数小时或过夜，然后离心收集上清液。
测定上清液吸光度，通过比较不同波长下的吸光度值，可计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量。
将待测叶片粉碎后加入1.5mL 80%乙醇和0.5mL 1mol/L HCl的混合液中，振荡10分钟后加入玻璃珠摇匀，含有叶绿素的乙醇溶液将变为红褐色。
用0.22µm微孔滤纸过滤，取上清液，用分光光度计测定吸光度值后计算叶绿素含量。
3. 醋酸铜法
将待测叶片加入0.05%醋酸铜溶液中，用滚轴摇匀10分钟后过滤，取上清液后测定吸光度并计算叶绿素含量。
4. 液相色谱法
将待测叶片加入甲醇或乙腈中，使用高效液相色谱仪分析样品中的叶绿素和类胡萝卜素含量。
这种方法需要更为精确的仪器和技术，但可以同时测定多种色素。
无论使用哪种方法测定植物叶绿素含量，都需要注意以下几点：
1. 样品采集应在相同的时间、地点和光照条件下进行，以保证结果可比性。
2. 需要控制乙醇、醋酸铜等试剂用量、摇匀时间和过滤条件等因素，以获得准确的结果。
3. 对于不同种类和部位的植物，可能需要针对性地选择不同的测定方法，并对结果进行修正和比较。
实验七叶绿素ab含量的测定及植物光合强度的测定
3. 溶解 应在烧杯中溶解，不能在容量瓶中溶解。
思考：若量取的是浓硫酸需要稀释，应如何操作才 是正确的？
4. 转移 由于容量瓶瓶颈较细，为避免液体洒在外面，应用玻璃棒引流。
提问：将烧杯中的氯化钠溶液转移到容量瓶中，此时溶质是否完 全被转移到容量瓶中？应如何处理？
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg / L)
叶绿素a、b含量：
C×提取液体积（20ml）×稀释倍数（10） (mg / g)
样品的重量（1g）
二、 植物光合强度的测定
光能
CO2+ H2O 叶绿体 (CH2O)+O2
测定干物质的积累 测定CO2的吸收 测定O2的释放
半叶法 红外气体分析仪法
演示LCPRO+光合作用仪
实验操作 分光光度法测叶绿素a、b含量
实验基本技能（二）
试剂的配制及化学试剂的规格
溶液配制的一般步骤：
计 称 溶 转洗定摇 装
算 量解
移涤容匀
瓶 贴
签
1. 计算
如：配制500mL 0.4mol/L NaCl溶液
需要称量的氯化钠的质量： n = cV = 0.4mol/L × 0.5L = 0.2mol m = nM = 0.2mol ×58.5g/mol = 11.7g
进气 泵
IARGA
Ce
参比室 排气
叶室
Co
光合速率：f （Ce –Co）/S
20世纪50年代国外设计制造出红外线C02气体分析仪
20世纪70年代我国制造出了红外线C02气体分析仪
美国LI-COR生产的LI-6400便携式光合作用仪 英国ADC公司生产LCPRO+ 便携式光合作用仪
叶绿素a和b含量的测定(分光光度法)
实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。
为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。
2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。
计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
2020年国家开放大学电大《植物生理学》网络核心课形考网考作业及答案
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形考作业1一、选择填空题题目11．植物散失水分的主要方式是[蒸腾]。
2．植物细胞吸收矿质元素的方式主要有三种类型：[被动吸收]、主动吸收和胞饮作用。
3．根部矿质元素主要是通过[木质部]向地上部运输，也可以横向运输到韧皮部。
4．整个光合作用根据能量转换过程可分为三个阶段：原始反应、电子传递与光合磷酸化、[碳同化]。
5．生活细胞内的有机物，在酶的催化下，逐步氧化分解并释放能量的过程，称为[呼吸作用]。
二、选择题题目2以下植物含水量最高的部位是（）。
选择一项：A. 茎杆B. 嫩梢C. 休眠芽D. 风干种子题目3细胞吸水的主要方式是（）。
选择一项：A. 渗透B. 扩散C. 集流D. 结冰题目4下列无法利用质壁分离现象判断的是（）。
选择一项：A. 观测物质透过原生质体的难易程度B. 测定细胞的渗透势C. 判断细胞的死活D. 测定细胞的水势题目5水分在根内吸水的途径有3条，不包括下列选项中的（）。
选择一项：A. 质外体途径B. 跨膜途径C. 共质体途径D. 细胞间途径题目6矿质元素主要是由根系从（）中吸收。
选择一项：A. 空气B. 营养液C. 水分D. 土壤题目7以下哪条不符合确定植物必需元素的标准（）。
选择一项：A. 缺乏该元素，植物生长发育受阻，不能完成其生活史B. 缺乏该元素，可以用其他元素替代C. 该元素的生理效应或功能必须是直接的D. 缺乏该元素，植物表现出专一的缺乏症题目8植物必需矿质元素的一般生理作用有（）。
叶绿素a、b含量测定
叶绿素a、b含量测定【实验原理】如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。
叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b在645nm，吸收曲线彼此又有重叠。
根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系：OD1=C a·k a1+C b·k b1（1）OD2=C a·k a2+C b·k b2（2）式中：C a为组分a的浓度，g/L；C b 为组分b的浓度，g/L；OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值；OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值；k a1为组分a的比吸收系数，即组分a当浓度为1g/L时，于波长λ1时的光密度OD值；k a2为组分a（浓度为1g/L），于波长λ2时的光密度OD值；k b1为组分b（浓度为1g/L），于波长λ1时的光密度OD值；k b2为组分b的比吸收系数，即组分b当浓度为1g/L时，于波长λ2时的光密度OD值；从文献中可以查到叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下：波长（nm）叶绿素a叶绿素b66382.049.2764516.7545.60将表中数值代入上式（1）、（2），则得：OD663=82.04×C a+9.27×C bOD645=16.75×C a+45.60×C b经过整理之后，即得到下式：C a=0.0127 OD663-0.00269 OD645C b=0.0229 OD645-0.00468 OD663如果把C a，C b的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：C a=12.7 OD663-2.69 OD645（3）C b=22.9 OD645-4.68 OD663（4）C T= C a+ C b=8.02 OD663+20.21 OD645（5）（5）式中C T为总叶绿素浓度，单位为mg/L。
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实验目的和意义
叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)， 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。
将上式整理，可以得到下式： Ca=0.0127A663-0.00269A645 （3） Cb=0.0229A645-0.00468A663 （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为： Ca=12.7A663-2.69A645 （5） Cb=22.9A645-4.68A663 （6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7） CT为叶绿素的总浓度
实验仪器及材料
实验材料 实验材料：
– 菠菜或其它绿色植物
实验仪器及试剂： 实验仪器及试剂
– UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；
实验步骤
1. 提取叶绿素
选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀浆，用 滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。
2. 测量光吸收
利用722分光光度计或UV1700分光光度计，分 别测定叶绿素提取液在645nm和663nm下的 吸光度。
结果分析
将测得的数值代入到公式（5）（6）（7） 中，计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿 素的浓度。最后要计算出单位叶片鲜重 中叶绿素的含量：
叶绿素 a 含量 (mg/g 鲜重 ) ＝ Ca×50ml（总体积 数）×1ml/1000ml/L ÷0.5g=0.1Ca 叶绿素b含量(mg/g鲜重)＝0.1Cb 总叶绿素含量(mg/g鲜重)＝0.1CT
Hale Waihona Puke 实验原理叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.75Ca+45.60Cb （2）
讨论： 讨论
1． 叶绿素在兰光区的吸收峰高于红光区 的吸收峰，为何不用兰光区的光吸收来 测定叶绿素的含量。 2． 计算叶绿素a与叶绿素b含量的比值， 2 a b 可以得到什么结论？ 3． 比较阳生植物和阴生植物的叶绿素a和 叶绿素b的含量以及比例，可以得到什么 结论？
公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素 b浓度（单位为g/L），82.04和9.27 分 别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸 收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时 的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿 素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。 即混合液在某一波长下的光吸收等于各 组分在此波长下的光吸收之和。