(完整版)岛津液相色谱维护

8 检测器
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废液瓶
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3.高压梯度系统
1 储液瓶 2 脱气机 3 泵单元
4 混合器
5 自动进样器 6 色谱柱
7 检测器
8 废液瓶
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垫圈 不锈钢接头
PEEK接头
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死体积
• 死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题.
公螺母 死体积
管线
好的连接
差的连接
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液相系统维护流程图
线路过滤器
单向阀
柱塞密封圈
吸滤头
色谱柱
检测器
手动进样器
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一、输液部分
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如果有压力但是压力比正常时低： 漏液 单向阀堵塞
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压力波动
压力在短时间内剧烈波动。 泵头中有气泡 单向阀脏 柱塞密封圈漏液
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岛津液相色谱维护培训
岛津国际贸易（上海）有限公司
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流动相
水 / 甲醇梯度 ODS 柱
1ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for15 mins.
鬼峰
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流动相
• 水的等级 – 纯化水 – 蒸馏水 – 去离子水
压力
压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注 压力的变化。
保留时间的变化经常是由于压力问题引起的。 不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力 也是不同的。
记下仪器正常状态时，在一定条件下（流速、 温度）的压力显示值。
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经常漏液的部件
泵： 柱塞密封圈 排液阀
手动进样器：转子密封圈磨损 检测器： 流通池窗口（垫片损坏、透镜破碎） 接头处漏液：（接头松动，接头脏，接头磨损，
部件不匹配）
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保留时间不稳定
吸滤头脏 泵输液不正常（压力波动、气泡等） 流动相组分变化 流动相缓冲能力不够 色谱柱平衡时间不够 柱温的变化 柱子问题
平常保养
-做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率 -做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命
常做的保养
—保持仪器的环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘） —泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不长期保 存在泵里）
—进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路 —尽量进行样品前处理 —色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命 —系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所 有部分全部更换为70％以上的甲醇，避免细菌的滋生及盐 的析出。
液相色谱故障排除经验
• 故障的确定 —至少要重复出现两次以上
• 初步判断故障引起的原因 —方法或硬件
• 由经验或平时的积累确定故障原因 —平时做好观察和记录
• 当不能确认故障原因时 —采用排除法逐一考察可能引起故障的因素
• 确定故障能否自行处理 —不要贸然拆卸不熟悉的部件
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LC-20A Prominence
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液相色谱简易流程图
溶剂
进样器 输液泵
色谱柱
柱温箱
检测器 数据处理
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流动相
选择原则 • 采用 “HPLC” 级溶剂 • 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 • 对试样有适宜的溶解度 • 溶剂粘度要小 • 与检测器相匹配
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流动相
• 溶剂的等级 – HPLC级 – 优级纯 – 分析纯
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒） 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂
HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质
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鬼峰的出现
鬼峰
流动相被污染 进样阀残余峰 样品中未知物 色谱柱中的污染物
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第二部分
日常使用注意点 硬件基础知识 容易出故障的部件及常见故障的排除
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接头
➢ 不锈钢接头 / 垫圈 主要用于输液泵、进样器的连接 –能承受 400 kgf/cm2压力 –一旦固定，垫圈不可再动
➢ PEEK接头 主要用于色谱柱、检测器的连接 –易于安装 –能承受 250 kgf/cm2压力 –容易产生死体积
常见故障因素
• 仪器环境： —实验室的温度、湿度、酸度等 —实验室震动、灰尘等问题 —电源及地线问题
• 使用条件： —流动相（pH值、均匀度、气泡等） —样品（样品分解、氧化、样品溶剂等） —色谱柱（污染、堵塞、塌陷等）
• 硬件问题： —输液泵 —进样器 —检测器
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噪音大
流动相污染、变质或由低质溶剂配成
有地方漏液
流动相、泵、检测器流通池内有气泡
流动相各溶剂不相溶或混和不均匀
检测池能量不足
流通池被污染
温度影响（检测器和柱温差别太大）
其他电子设备的影响
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液相色谱常见问题
压力异常（偏高、波动） 漏液 保留时间漂移 基线问题（漂移、噪声） 峰形异常
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压力高时
首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞 色谱柱堵时：确认可能造成堵塞的样品的性质， 相应选择合适的清洗溶剂。 系统堵塞，首先应确认是那一部份堵塞，依据情 况排除。
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容易发生堵塞的部件
管线材料
➢ 不锈钢 (可用于所有连接) – 能承受几千 kgf/cm2 压力 – 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
➢ PEEK (可用于所有连接) – 能承受高达 250 kgf/cm2压力 – 可在整个PH范围(pH 1-14)内使用 – 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
➢ Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管) – 化学惰性大 – 能承受 5 kgf/cm2 压力
➢ 保护柱及色谱柱 ➢ 线路过滤器 ➢ 管路连接处 ➢ 进样器 ➢ 检测器流通池
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压力低
如果压力为零： 泵头中没有液体，而是充满了气泡 单向阀完全堵死 柱塞杆折断 压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)
峰形问题
死体积太大 柱子被污染或堵塞 色谱柱塌陷 色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应） 色谱柱被重金属污染 流动相缓冲不足或不合适 样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大 样品过载（浓度或体积） 柱温过低
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（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收
（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）
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流动相
代表性弱酸的pKa
醋酸 柠檬酸
磷酸Βιβλιοθήκη pK1 4.87 3.13 2.16
pK2
4.76 7.21
pK3
6.40 12.32
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流动相
缓冲液的使用
使用前必须过滤
1.（简单）等度系统
1 储液瓶
2 脱气机
3 泵单元
4 手动进样器
5 色谱柱
6 检测器
7 废液瓶
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2.低压梯度系统
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储液瓶
2 脱气机
3 低压梯度单元
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泵单元
5 混合器
6 自动进样器
7 色谱柱
第一部分
液相色谱故障排除经验 液相色谱常见问题
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LC 10Avp
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基线漂移
流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂) 温度波动 柱子平衡时间不够 流通池被污染或有气泡 流通池窗口破裂
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管线选择
➢ 材料
不锈钢 Teflon PEEK (聚醚醚酮)
➢ 尺寸
0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.
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吸
去离子水
光
率 纯化水
波长 (nm)
因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高
纯化水中去除了无机和有机的污染物
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流动相
• 选择缓冲液的步骤
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液