大学仪器分析实验高效液相色谱法

二、色谱实验条件
A组：Waters HPLC仪
色谱柱：Nova Pak C18 (3.9×150mm, 4μm) 流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v) 流速：0.8 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：20μL
B组：TSP HPLC仪
色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0×200mm, 5μm) 流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v) 流速：0.8 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：20μL
建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进 一步巩固和提高所学知识和实验技能。
一、色谱分离原理
色谱法是一类高效分离方法。 ➢ 色谱分离原理是什么？ ➢ HPLC和GC仪器的分离部件是什么？ 它们有什么不同？ ➢ HPLC和GC的主要差别？
二、色谱分析技术
色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特 点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样 品或多组分样品分析。 ➢ 常见的色谱定性方法？ ➢ 色谱定量分析的依据？ ➢ 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有 何特点？ ➢ HPLC和GC的应用特点
六、实验部分
一、溶液配制 1 配制标准系列溶液
三组分混标液：每mL溶液分别含1.00mg苯、甲苯 和乙苯。 分别准确移取0.40、0.80、1.20、1.60和2.00mL 三组分混标液于10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。
2 流动相的配制、过滤和除气。
五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 标准苯测试液。 未知样品1号、2号和3号。
三、 HPLC仪器和实验技术
➢ HPLC仪器的基本组分？ ➢ 主要部件的工作原理？ ➢ HPLC和GC仪器的比较 ➢ HPLC和GC实验技术的比较 ➢ 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一 针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病 人打过针？为什么没有？
四、高效液相色谱仪的基本组成
分几个系统？ 和GC有何不同？
三、实验内容与主要步骤
1 更换流动相。 2 开动仪器，让色谱柱平衡。 3 设置色谱工作站参数。 4 进样、采集色谱图。 1）五组分混标液 2）标准溶液系列 3）未知样品 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。 7 关闭仪器。
高压泵工作原理？ GC是如何进样的？ 记录系统和GC一样 吗？
高压泵工作原理（单向阀）
➢ 高压液体有危险吗？ ➢ 高压泵如何改变流速？
高压泵工作原理（单向阀） 六通阀工作原理（流路切换）
➢ HPLC进样针与GC有何不同？ ➢ 为什么HPLC与GC进样要求不同？
五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理
➢ 什么是正相色谱？什么是反相色谱？ ➢ 什么是键合固定相？ ➢ 预测一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留 顺序？ ➢ 什么是反相色谱疏水机理？ ➢ 本实验的主要色谱分析条件有那些？ ➢ 流动相组成对保留时间有何影响？举例说 明？ ➢ 改变检测波长对色谱图有何影响？
HPLC的溶剂选择
➢ 本实验采用什么流动相？ ➢ 什么是HPLC级甲醇、乙腈溶剂？ ➢ 如何获得超纯水？ ➢ 本实验所用的流动相如何配制？ ➢ 流动相为什么要除气？如何除气？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ实验目的
➢ 了解HPLC仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使 用方法；
➢ 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件 的选择；
➢ 掌握液相色谱定性定量分析技术。
实验内容
反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物
实验讲解要点
一、色谱分离原理 二、色谱分析技术 三、 HPLC仪器和使用方法 四、 HPLC和GC的比较 五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理