【CN110201418A】一种基于固定化SNAPtag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910385025.0
(22)申请日 2019.05.09
(71)申请人 西安交通大学
地址 710049 陕西省西安市咸宁西路28号
(72)发明人 贺浪冲　韩省力　付佳　张涛　
贺怀贞　林园园　吕艳妮　
(74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任
公司 61200
代理人 徐文权
(51)Int.Cl.
B01D 15/10(2006.01)
B01D 15/22(2006.01)
B01J 20/281(2006.01)
B01J 20/286(2006.01)
B01J 20/30(2006.01)
C12N 11/14(2006.01)G01N 30/02(2006.01)G01N 30/60(2006.01)
(54)发明名称一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种基于固定化SNAP -tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法，属于细胞膜色谱柱制备技术领域。

该方法首先将苯甲基鸟嘌呤键合到硅胶上，然后利用SNAP -tag与其底物苯甲基鸟嘌呤的高特异性识别和稳定共价结合使细胞膜固定苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶固定相表面，即得细胞膜色谱固定相，最后将混合固定相湿法装柱，构成基于固定化SNAP -tag融合蛋白的细胞膜色谱柱。

本发明制备的基于固定化SNAP -tag融合蛋白的细胞膜色谱柱延长细胞膜色谱柱的柱寿命，提高其稳定性。

解决了现有的细胞膜色谱柱存在特异性较差的问题，为细胞膜
色谱柱的商品化奠定了基础。

权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 110201418 A 2019.09.06
C N 110201418
A
权　利　要　求　书1/1页CN 110201418 A
1.一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱，其特征在于，该细胞膜色谱柱是将苯甲基鸟嘌呤键合到硅胶上，细胞膜上的SNAP-tag融合受体特异性结合苯甲基鸟嘌呤，使SNAP-tag融合蛋白固定在硅胶表面得到细胞膜固定相，再将细胞膜固定相采用湿法装柱制得。

2.根据权利要求1所述的基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱，其特征在于，所述硅胶为氨基化硅胶。

3.根据权利要求2所述的基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱，其特征在于，苯甲基鸟嘌呤通过三聚氯氰键合到氨基化硅胶上。

4.根据权利要求2所述的基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱，其特征在于，所述氨基化硅胶为氨丙基硅胶。

5.一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将3-氨丙基三乙氧基硅烷键合到硅胶上，制得氨丙基硅胶；
2)采用三聚氯氰修饰氨丙基硅胶，制得三聚氯氰修饰的硅胶固定相；
3)将三聚氯氰修饰的硅胶固定相制备成悬浮液，然后加入等摩尔的6-[[4-(氨基甲基)苯基]甲氧基]-7H-嘌呤-2-胺，充分搅拌反应，制备得到苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶固定相；
4)培养SNAP-tag融合蛋白高表达细胞，当细胞计数不低于107个时，去除培养基，获得细胞，分离出细胞膜；
5)将细胞膜配制成细胞膜悬液，将细胞膜悬液加入步骤3)制得的苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶固定相中，搅拌均匀后静置过夜，得到以苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶为载体的细胞膜固定相；
6)将以苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶为载体的细胞膜固定相采用湿法装柱获得基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱。

6.根据权利要求5所述的基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，步骤1)中的硅胶使用前经活化处理。

7.根据权利要求5所述的基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，步骤4)中，将获得的细胞用Tris-HCl混悬后置于细胞超声破碎仪中进行破碎，然后通过差速离心分离细胞膜。

2。