酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg

实验与应用研究
陈桂花　罗颖照:广州经济技术开发区红十字会医院　广东广州　
510530
谭玉华:广州市丰华生物工程有限公司　广东广州　510630
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HB s Ag
陈桂花　谭玉华　罗颖照
Hb sAg D ETECTION W I TH EL I SA AND RESOLV IN G F I A
CHEN Gu ihua,TAN Yuhua,LUO Yingzhao
【摘　要】　目的　比较两种方法4种试剂对乙型肝炎病毒(HBV )表面抗原(HB s Ag )的检测性能,并探
讨HB s Ag 阳性模式组间及其与HB s Ag 阴性模式组间的HB s Ag 浓度差异。

方法　酶联免疫法(E L I S A )定性检测1205例标本。

其中153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法(TrF I A )定量测试试剂进行HB s Ag 比对检测,其余的1052例标本均再用TrF I A 法进行HB s Ag 定量检测,再对1205例标本HB s Ag 定量结果按抗原抗体模式分组统计分析。

结果　两种方法4种试剂间HB s Ag 阳性检出率均无统计学差异(p >0105),3个厂家的TrF I A 法试剂HB s Ag 定量检测结果相关性良好,r >0195。

TrF I A 法能对012～110ng/m l 的低浓度HB 2s Ag 标本进行有效检测。

研究发现TrF I A 法定量检测未经稀释的HBV 感染者血标本HB s Ag 浓度在012～650.0ng/m l 间。

研究中HB s Ag 阳性模式中除“HB s Ag 、抗-HBc ”阳性模式组与“HB s Ag 、e 抗体(抗-HBe )、抗-HBc ”阳性模式的HB s Ag 浓度差异无统计学意义(p >0105)外,其它HB s Ag 阳性模式间HB s Ag 浓度差异均有统计学意义(p <0105),HB s Ag 阳性模式与HB s Ag 阴性模式间HB s Ag 浓度差异均有统计学意义(p <0105)。

结论　HBe Ag 或抗-HBe 的出现与HB s Ag 的浓度呈一定的关系,HB s Ag 浓度与病毒的复制存在一定的关系。

E L I S A 法HBV M 定性检测结合TrF I A 法HB s Ag 定量检测对HBV 感染诊断和防治具有重要意义。

【关键词】　酶联免疫法　时间分辨荧光免疫法　乙型肝炎病毒　表面抗原 do i:10.3969/j .issn .1671-332X .2009.02.008 HB s Ag 是HBV 感染后血清中首先出现的标志物HBV M ,可作为乙肝的早期诊断和普查项目。

HB s Ag 的检测受到
许多研究者的关注[1-6]
,随着标记免疫方法学的飞跃发展,HB s Ag 检测的灵敏度有了进一步提高,并且定量结果取代了定性报告,为临床诊断提供了更多的信息。

笔者采用了1个厂家的E L I S A 法定性诊断试剂与3个厂家的TrF I A 定量测试试剂对HB s Ag 进行了检测,结果与分析如下。

1　材料与方法1.1　标本　
标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例,及时分离血清,-20℃保存备用。

1.2　仪器与试剂　
ST -360型酶标仪,酶联免疫法HB s Ag 诊断试剂盒(荣盛公司);V ict or 2-D1420时间分辨荧光免疫仪(PE 公司);时间分辨荧光免疫法HB s Ag 定量测试试剂盒(丰华、新波、达安公司);DE M -Ⅲ型自动酶标洗板机和F W Z -Ⅱ型恒温微量振荡仪。

1.3　方法　
E L I S A 法与Tr
F I A 法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。

E L I S A 法对以上1205例标本进行定性检测,按说明书结果判断方法判读阴阳性,对弱阳性的HBV M 、“HB s Ag 、抗
-HB s ”或“HBe Ag 、抗-HBe ”双阳模式的HBVM 均须2孔
复查,仍为阳性者判为阳性。

其中经定性检测的153例标本
再用以上3个厂家的TrF I A 法进行HB s Ag 比对检测。

其余经定性检测的1052例标本均再用广州丰华公司TrF I A 法进行HB s Ag 定量检测。

TrF I A 法如HB s Ag 检测结果≥015ng/m l 时判为阳性,<012ng/m l 时判为阴性;如012ng/m l ≤HB s Ag <015ng/m l 时均须以上3厂家TrF I A 定量测试试剂盒各3孔复检,如有2孔仍为HB s Ag ≥012ng/m l 时判为该试剂盒检测HB s Ag 阳性,如有2家TrF I A 定量测试试剂盒检测HB s Ag ≥012ng/m l 时判为该标本HB s Ag 阳性。

用TrF I A 法HB s Ag 结果结合E L I S A 法相应标本其它HBVM 结果,重新确定HBVM 抗原抗体模式。

1.4　统计与分析　
抗原抗体排列顺序:①HB s Ag;②抗-HB s;③HBeAg;④抗-HBe;⑤抗-HBc 。

以阳性项目的序号代表该阳性项,同一患者血清HBV M 组合称抗原抗体模式(如“①+③+⑤”代表“HB s Ag,HBe Ag,抗-HBc ”同时阳性;“①+④+⑤”代表“HB s Ag,抗-HBe,抗-HBc ”同时阳性)。

对以上4个厂家试剂检测的153例标本HB s Ag 结果进行比较分析,计算各试剂间检测HB s Ag 的粗一致性、约登指数、真阳性符合率、真阴性符合率,并采用配对资料2检验,再对3个厂家的TrF I A 法HB s Ag 定量检测结果进行回归分析。

对广州丰华公司TrF I A 定量试剂检测的1205例标本HB s Ag 结果,按“①+③+⑤”、“①+④+⑤”、“①+⑤”、“①”等抗原抗体模式和“HB s Ag 阴性”模式进行统计,计算平均值(x )和标准偏差(S D ),对组间HB s Ag 浓度差异采用秩和检验。

现代医院2009年2月第9卷第2期　专业技术篇　Modern Hos p ital Feb 2009Vol 9No 2
2　结果
2.1　两种方法4种试剂比对试验　
153例标本HB s Ag检测结果,3个厂家的TrF I A法试剂与E L I S A法试剂HB s Ag检测结果比较,3个厂家的TrF I A法试剂间HB s Ag检测结果相互比较,两种方法4种试剂间HB2 s Ag阳性检出率差异均无统计学意义(p>0105),3个厂家的TrF I A法试剂HB s Ag定量检测结果相关性良好,r>0195,结果详见表1。

表1　2种方法4种试剂检测153例标本HB s Ag结果比较
试剂配对粗一致性
(%)
约登指数
真阳性率
(%)
真阴性率
(%)
2检验(p)
α=0.05,2(0.05)(1)=3.48
回归方程
丰华TrFI A与荣盛E L I S A97.380.947898.6796.150.25(>0.05)——————
新波TrFI A与荣盛E L I S A96.730.935498.6794.870.80(>0.05)——————
达安TrFI A与荣盛E L I S A95.420.911398.6792.31 2.28(>0.05)——————
新波TrFI A与丰华E L I S A99.350.9872100.098.68　0(>0.05)Y=0.9665X+4.7739,r=0.9569达安TrFI A与丰华E L I S A95.420.910197.4093.420.57(>0.05)Y=1.1095X+4.5493,r=0.9686达安TrFI A与新波E L I S A96.090.922697.4494.670.17(>0.05)Y=1.0850X+5.5247,r=0.9566
2.2　抗原抗体模式与HB s Ag检测结果　
TrF I A法HB s Ag检测结果结合E L I S A法相应标本其它HBVM结果,从1205例标本中共检测出10种抗原抗体模式,HB s Ag阳性的模式共4种,TrF I A法检测HB s Ag阳性480例,其中E L I S A法HB s Ag弱阳性36例(015～510ng/m l)和阴性20例(012～110ng/m l,分布在“③+⑤”模式1例,“④+⑤”18例,“⑤”模式1例),TrF I A法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HB s Ag浓度在012～650.0ng/m l间,结果详见表2。

表2　TrF I A法结合EL I S A法检测HBV M
的抗原抗体模式与模式组的HB s Ag浓度
HBV M抗原抗体模式组例数(%)HB s Ag浓度(ng/m l,x±S D)
①+③+⑤a)157(13.0)330.2±143.8
①+⑤b)12(0.996)118.1±146.7
①+④+⑤c)306(25.4)129.3±124.8
①d)5(0.415) 1.5±0.4
HB s Ag阴性模式e725(60.2)0.01±0.05
　注:组间HB s Ag浓度差异采用秩和检验,a)与b)间差异有统计学意义(n=169,u
c
=4189,p<0105);a)与c)间差异有统计学意义(n= 463,u c=12135,p<0105);a)与d)间差异有统计学意义(n=162,u c =3171,p<0105);a)与e)间差异有统计学意义(n=882,u c=18141, p<0105);b)与c)间差异无统计学意义(n=318,u c=0179,p> 0105);b)与d)间差异有统计学意义(n2=5,n1-n2=7,T=27,p< 0105);b)与e)间差异有统计学意义(n=737,u c=5193,p<0105);c)
与d)间差异有统计学意义(n=311,u
c
=3122,p<0105);c)与e)间差
异有统计学意义(n=1031,u
c
=9181,p<0105);d)与e)间差异有统
计学意义(n=730,u
c
=3182,p<0105).
3　分析与讨论
研究中两种方法4种试剂间HB s Ag阳性检出率差异均无统计学(p>0105),3个厂家的TrF I A法试剂HB s Ag定量检测结果相关性良好,r>0195,但试剂间仍存在一定的“灰区”检测范围,仍存在HB s Ag阳性检测不一致现象,提高试剂盒质量进而提高各试剂间的可比性是厂家亟需解决的问题。

HB s Ag是HBV的外壳,它出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关[7]。

HBe Ag或抗-HBe的出现与HB s Ag的浓度呈一定的关系[8]。

研究中HB s Ag阳性模式中除“①+⑤”模式与“①+④+⑤”模式的HB s Ag浓度差异无统计学意义(p>0105)外,其它HB s Ag阳性模式间HB s Ag浓度差异均有统计学意义(p<0105),HB2 s Ag阳性模式与HB s Ag阴性模式间HB s Ag浓度差异均有统计学意义(p<0105)。

“①+③+⑤”模式常发生在急性或慢性乙型肝炎,病毒复制传染性强,HBe Ag是反映HBV体内复制的一个标志物,可在HB s Ag出现的同时或数日后检出, HBe Ag的出现常伴随高浓度HB s Ag检出,HB s Ag浓度越高HBe Ag检出率越高[9]。

“①”模式常发生在急性乙型肝炎潜伏期后期,已有研究报道HB s Ag慢性携带者同时伴HBe Ag 阳性者其HB s Ag的滴定度要比单独HB s Ag阳性者高4～29倍[10]。

“①+⑤”模式常发生在急性或慢性乙型肝炎,抗-HBc的出现通常与病人基本病情的改善有关,有学者报道[10]在大量实验性成人HBV感染者中,70%呈自限性感染,表现为一过性HB s Ag阳性,在症状HB s Ag携带者血中可表现为低浓度HB s Ag,在远期过去感染HBV中,HB s Ag滴度逐渐降低。

部分“①+⑤”模式也可能是HBeAg或抗-HBe 低浓度[11]。

“①+④+⑤”模式常发生在急性乙型肝炎趋向好转或无症状病毒携带者,抗-HBe阳性表明HBV复制减少,抗-HBe常在HB s Ag即将消失或已经消失时可检出[10]。

HB s Ag浓度与病毒的复制存在一定的关系,柴红燕等[9]报道HBV-DNA含量与HBe Ag、HB s Ag的存在有明显关系,HBe Ag、HB s Ag在一定程度上也能反映HBV-DNA的复制程度;若血清中同时检测出了HB s Ag和HBe Ag或HBV DNA,该病人可视为具有传染性。

谢志贤等[12]研究表明, HB s Ag含量在1ng/m l水平以上时,HBV DNA即可出现阳性,HB s Ag含量在10ng/m l水平以上时,HBV DNA阳性率有所增高,并随着HB s Ag含量的增大而增高,说明在此范围内部份HBV感染者体内有大量乙肝病毒复制,并具有传染性,HB s Ag浓度与HBV DNA的存在一定的关系。

E L I S A法是一项经典的标记免疫检测方法,具有灵敏度高、特异性较强、准确性好等优点。

Tr
F I A法作为一项新兴
血府逐瘀胶囊对子宫内膜异位症患者血液流变学及血脂的影响
陈桂红　黄常青　刘　杰
THE AFFECT O F X U E F U Z HU Y U CAPSULE ON T HE BLOOD RHE OLO GY AND BLOOD L I P I D O F PATI EN TS W I TH ENDOM ETR IO S I S
CHEN Gu ihong,HUAN G Changqing,L I U J ie
【摘　要】　目的　探讨血府逐瘀胶囊对子宫内膜异位症患者血液流变学及血脂的影响。

方法　子宫内膜异位症患者口服血府逐瘀胶囊,用血粘度计检测其服用前后血液流变学各项指标的变化;用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和甘油三酯(TG)的变化。

结果　血府逐瘀胶囊能降低子宫内膜异位症患者全血高切、中切低切的血粘度;其治疗前后T C、LDL和TG均有显著降低(p<0101),HDL明显提高(p<0105)。

结论　血府逐瘀胶囊能够使子宫内膜异位症患者的血液流变学和血脂的各项指标明显改善,有显著性差异。

【关键词】　子宫内膜异位症　血府逐瘀胶囊　血液流变学　血脂
do i:10.3969/j.issn.1671-332X.2009.02.009
子宫内膜异位症(Endometri ois,E M T)是妇科常见病、多发病、疑难病症,主要表现为盆腔疼痛、痛经、不孕、月经异常等,严重影响女性身体健康和生活质量。

由于异位内膜周期性出血,反复刺激引起局部充血、炎症、黏连以及结节包块形成,影响局部血行和腑气的通畅[1],因此活血祛瘀行气止痛是治疗本症的根本。

本文用具有活血祛瘀功能的血府逐瘀胶囊治疗子宫内膜异位症,并对患者血液流变学、血脂等各项指标进行检测,结果如下。

基金项目:深圳市科技计划项目(编号:200603259)
陈桂红　黄常青　刘　杰:深圳市宝安区西乡人民医院　广东深圳　5181021　资料与方法
1.1　临床资料
我院2006年1月～2008年3月选择子宫内膜异位症患者36例(参照卫生部制定的《中药(新药)临床研究指导原则》中盆腔子宫内膜异位症的诊断标准[2-3])。

年龄20～40岁,平均3315岁。

病程5个月至8年,平均416年。

1.2　治疗方法
将符合病例条件的病人,口服血府逐瘀胶囊,每次6粒,一日两次,疗程为3个月。

于治疗前后用血粘度计分别测定其血液流变学各指标;用全自动生化分析仪分别测定其血清总胆固醇(T C)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和甘油三酯(TG)。

(接上页)
的标记免疫检测方法,将抗原抗体反应与荧光物质发光和时间分辨三者结合,该技术灵敏度可高达10-18mol/L。

3个厂家的TrF I A法试剂盒HB s Ag最低检出量均可达0.2ng/m l,能有效地检测出低浓度的HB s Ag,研究发现未经稀释的HBV 感染者血标本HB s Ag浓度可达0.2～650.0ng/m l间,TrF I A 法HB s Ag检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。

参考文献
[1]　彭　静,管　青,王　斌,等.HB s Ag检测结果弱反应的分析与
处置[J].临床检验杂志,2008,26(4):284-285.
[2]　滕　龙,傅圣勇.电化学发光法检测HB s Ag的假性低值探讨
[J].临床检验杂志,2007,25(2):149.
[3]　田拥军,覃　莉,刘慎沛,等.8种国产HB s Ag试剂盒检测变异
HB s Ag的效果评价[J].临床检验杂志,2007,25(4):250-252.
[4]　陈仁杰.金标记免疫层析法检测HB s Ag的假阳性分析[J].临
床检验杂志,2007,25(2):160.
[5]　方　筠,张久春,陈　健,等.乙型肝炎病毒表面抗原确认试剂
方法的建立[J].检验医学,2006,21(5):478-480.
[6]　张运洪,秦　苏,何静波,等.EL I S A结合ME I A能有效检测低
水平HB s Ag[J].临床检验杂志,2002,20(2):103.
[7]　Edouard Kurstak著.郭仁等译.病毒性肝炎现状与难点[M].
北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社.1995:40-108.
[8]　林永焕.现代传染病文集[M].第三卷.北京:中国科学技术出
版社,1995:54-58.
[9]　柴红燕,刘　芳,叶光明,等.血清乙型肝炎病毒DNA荧光定
量检测及其与临床的关系[J].检验医学与临床,2002,6(2): 38-45.
[10]孙龙安,李　龙,林　钢.医学特种检验与实验室诊断[M].北
京:人民军医出版社,2002:117-126.
[11]罗开忠,杨　旭,苏先狮,等.时间分辨免疫荧光法检测乙型肝
炎病毒标志物[J].中华肝脏病杂志,2003,11(9):569. [12]谢志贤,董　莹,艾桂萍,等.乙肝病毒DNA与乙型肝炎表面
抗原含量关系的探讨[J].陕西医学检验,2000,15(2):49.。