酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg

实验与应用研究

陈桂花　罗颖照:广州经济技术开发区红十字会医院　广东广州　

510530

谭玉华:广州市丰华生物工程有限公司　广东广州　510630

酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HB s Ag

陈桂花　谭玉华　罗颖照

Hb sAg D ETECTION W I TH EL I SA AND RESOLV IN G F I A

CHEN Gu ihua,TAN Yuhua,LUO Yingzhao

【摘　要】　目的　比较两种方法4种试剂对乙型肝炎病毒(HBV )表面抗原(HB s Ag )的检测性能,并探

讨HB s Ag 阳性模式组间及其与HB s Ag 阴性模式组间的HB s Ag 浓度差异。方法　酶联免疫法(E L I S A )定性检测1205例标本。其中153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法(TrF I A )定量测试试剂进行HB s Ag 比对检测,其余的1052例标本均再用TrF I A 法进行HB s Ag 定量检测,再对1205例标本HB s Ag 定量结果按抗原抗体模式分组统计分析。结果　两种方法4种试剂间HB s Ag 阳性检出率均无统计学差异(p >0105),3个厂家的TrF I A 法试剂HB s Ag 定量检测结果相关性良好,r >0195。TrF I A 法能对012～110ng/m l 的低浓度HB 2s Ag 标本进行有效检测。研究发现TrF I A 法定量检测未经稀释的HBV 感染者血标本HB s Ag 浓度在012～650.0ng/m l 间。研究中HB s Ag 阳性模式中除“HB s Ag 、抗-HBc ”阳性模式组与“HB s Ag 、e 抗体(抗-HBe )、抗-HBc ”阳性模式的HB s Ag 浓度差异无统计学意义(p >0105)外,其它HB s Ag 阳性模式间HB s Ag 浓度差异均有统计学意义(p <0105),HB s Ag 阳性模式与HB s Ag 阴性模式间HB s Ag 浓度差异均有统计学意义(p <0105)。结论　HBe Ag 或抗-HBe 的出现与HB s Ag 的浓度呈一定的关系,HB s Ag 浓度与病毒的复制存在一定的关系。E L I S A 法HBV M 定性检测结合TrF I A 法HB s Ag 定量检测对HBV 感染诊断和防治具有重要意义。 【关键词】　酶联免疫法　时间分辨荧光免疫法　乙型肝炎病毒　表面抗原 do i:10.3969/j .issn .1671-332X .2009.02.008 HB s Ag 是HBV 感染后血清中首先出现的标志物HBV M ,可作为乙肝的早期诊断和普查项目。HB s Ag 的检测受到

许多研究者的关注[1-6]

,随着标记免疫方法学的飞跃发展,HB s Ag 检测的灵敏度有了进一步提高,并且定量结果取代了定性报告,为临床诊断提供了更多的信息。笔者采用了1个厂家的E L I S A 法定性诊断试剂与3个厂家的TrF I A 定量测试试剂对HB s Ag 进行了检测,结果与分析如下。

1　材料与方法1.1　标本　

标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例,及时分离血清,-20℃保存备用。1.2　仪器与试剂　

ST -360型酶标仪,酶联免疫法HB s Ag 诊断试剂盒(荣盛公司);V ict or 2-D1420时间分辨荧光免疫仪(PE 公司);时间分辨荧光免疫法HB s Ag 定量测试试剂盒(丰华、新波、达安公司);DE M -Ⅲ型自动酶标洗板机和F W Z -Ⅱ型恒温微量振荡仪。1.3　方法　

E L I S A 法与Tr

F I A 法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。E L I S A 法对以上1205例标本进行定性检测,按说明书结果判断方法判读阴阳性,对弱阳性的HBV M 、“HB s Ag 、抗

-HB s ”或“HBe Ag 、抗-HBe ”双阳模式的HBVM 均须2孔

复查,仍为阳性者判为阳性。其中经定性检测的153例标本

再用以上3个厂家的TrF I A 法进行HB s Ag 比对检测。其余经定性检测的1052例标本均再用广州丰华公司TrF I A 法进行HB s Ag 定量检测。TrF I A 法如HB s Ag 检测结果≥015ng/m l 时判为阳性,<012ng/m l 时判为阴性;如012ng/m l ≤HB s Ag <015ng/m l 时均须以上3厂家TrF I A 定量测试试剂盒各3孔复检,如有2孔仍为HB s Ag ≥012ng/m l 时判为该试剂盒检测HB s Ag 阳性,如有2家TrF I A 定量测试试剂盒检测HB s Ag ≥012ng/m l 时判为该标本HB s Ag 阳性。用TrF I A 法HB s Ag 结果结合E L I S A 法相应标本其它HBVM 结果,重新确定HBVM 抗原抗体模式。1.4　统计与分析　

抗原抗体排列顺序:①HB s Ag;②抗-HB s;③HBeAg;④抗-HBe;⑤抗-HBc 。以阳性项目的序号代表该阳性项,同一患者血清HBV M 组合称抗原抗体模式(如“①+③+⑤”代表“HB s Ag,HBe Ag,抗-HBc ”同时阳性;“①+④+⑤”代表“HB s Ag,抗-HBe,抗-HBc ”同时阳性)。对以上4个厂家试剂检测的153例标本HB s Ag 结果进行比较分析,计算各试剂间检测HB s Ag 的粗一致性、约登指数、真阳性符合率、真阴性符合率,并采用配对资料2检验,再对3个厂家的TrF I A 法HB s Ag 定量检测结果进行回归分析。对广州丰华公司TrF I A 定量试剂检测的1205例标本HB s Ag 结果,按“①+③+⑤”、“①+④+⑤”、“①+⑤”、“①”等抗原抗体模式和“HB s Ag 阴性”模式进行统计,计算平均值(x )和标准偏差(S D ),对组间HB s Ag 浓度差异采用秩和检验。

现代医院2009年2月第9卷第2期　专业技术篇　Modern Hos p ital Feb 2009Vol 9No 2