黄芪中总蒽醌含量的测定

黄芪中总蒽醌含量的测定

江培

【摘要】目的:探讨黄芪中总蒽醌含量的测定方法.方法:采用差示分光光度法测定

黄芪中的总蒽醌含量.结果:在0.00246~0.01968 mg/mL范围内线性关系良好,线

性回归方程为Abs.=45.69C+0.0013,(r=0.9999),黄芪中总蒽醌的含量为

0.5047%(RSD=0.1040).结论:该方法简单易行,平均加样回收率良好,结果可靠.

【期刊名称】《黑龙江医药》

【年(卷),期】2017(030)002

【总页数】4页(P243-246)

【关键词】差式分光光度法;黄芪;1,8-二羟基蒽醌;总蒽醌

【作者】江培

【作者单位】哈尔滨商业大学药学院哈尔滨 150076

【正文语种】中文

【中图分类】R284

黄芪作为一味传统的补益药，具有增强免疫功能、抗肿瘤、保肝、增强心肌收缩力及广泛的抗菌等药理作用[1]。黄芪的化学成分以蒽醌及其苷类化合物为主，此外，还有萘醌类、萜类、己肽类、多糖类等其他化学成分[2]。蒽醌类化合物（anthraquinones)是从天然植物中分离得到的天然醌类化合物，是迄今为止发现的最重要的也是数量最多的一类化合物[3]。蒽醌类化合物具有多方面的药理活性，具有抗菌消炎，抗肿瘤等作用，故植物中蒽醌类化合物的提取分离以及含量测定也

成为了一个重要的研究课题。本文主要针对黄芪的化学成分—总蒽醌进行提取分

离及其利用比色法进行含量测定的研究。

1.1 实验材料

黄芪，购自哈药集团世一堂大药房，干燥并粉碎后备用。

1.2 实验试剂

1,8-二羟基蒽醌(中国药品生物制品检定所提供，批号14299702)，苯（天津试剂

二厂生产，批号201411128，分析纯），氯仿（天津试剂二厂生产，批号20150311，分析纯），甲醇（成都试剂三厂生产，批号20140912，分析纯），其他试剂均为化学纯。

1.3 实验仪器

紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)、FA-1004电子分析天平(上海

天平仪器厂)、AEL-40SM电子分析天平(SHI-MADZU)、W201B恒温水浴锅(上

海中生生物技术有限公司)。

该实验准备利用氯仿萃取与硫酸水解同步进行的方法，因为在热氯仿环境下游离蒽醌的溶解向正方向移动，萃取效率得到提高。利用Borntragers反应原理，蒽醌

类化合物遇碱显红色或紫红色的这一特性。由于带有游离羟基的蒽醌在碱性条件下或遇到醋酸镁甲醇液能产生此颜色变化，其他蒽类物质和蒽醌不发生该颜色变化[4]。因此，采用差式分光光度法测定样品中总蒽醌含量，该方法能消除背景吸收，排除了其他成分对蒽醌类化合物测定的干扰[5]，且回收率高，结果准确可靠。

2.1 1,8-二羟基蒽醌最适波长的确立

精密称取105℃干燥2h的1,8-二羟基蒽醌10mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准液(0.1g/L)。精密吸取标准液1.0mL2份，分别置于

2个10mL容量瓶中，1份用甲醇稀释至刻度，另1份用0.5%醋酸镁甲醇溶液稀

释至刻度，摇匀。分别用甲醇及0.5%醋酸镁甲醇液作为空白，在400～600nm

区间作二者的吸收光谱，如图1。消除背景吸收后最适波长在510mn处。

2.2 总蒽醌供试品溶液的制备

精密称取黄芪粉末30.0g，置索氏提取器中，加苯150mL提取至溶液无色，水浴蒸干，冷却后，残渣加蒸馏水10mL，20%硫酸5 mL，30mL氯仿回流提取1h，倾入分液漏斗中，静置分层，取氯仿层，加无水硫酸钠脱水、抽滤，滤液水浴蒸干，残渣先加适量0.5%醋酸镁甲醇液溶解，后定容于10mL容量瓶中，为样品溶液1。另取5.0mL提取液，同法处理后，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，为样品溶

液2。

2.3 标准曲线的绘制

精密称取105Ⅰ干燥2 h的1,8-二羟基蒽醌10mg，用甲醇溶解，定容至100ml，精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml各2份，分别置于10mL容量瓶中，1份加0.5%醋酸镁甲醇液稀释至刻度，另1份用甲醇稀释至刻度，摇匀。前者置样品池，后者置参比池中，于510nm处测定各溶液吸收值(以下吸光度均以Abs.表示),，

以Abs为纵坐标,，浓度(以下浓度均以C表示)为横坐标,绘制标准曲线。得标准曲线，y=45.69x+ 0.0013,r=0.999 9，线性范围为0.00246～0.01968 g/L。详见

表1,图2。

2.4 测定方法的考察

2.4.1 精密度

取1,8-二羟基蒽醌标准品溶液(0.1003mg/mL)2mL，置10mL容量瓶中，1份加0.5%醋酸镁甲醇液稀释至刻度，另1份用甲醇稀释至刻度，摇匀。前者置样品池，后者置参比池中，于510nm处连续测定6次，记录其吸光度，结果见表2,峰面积(RSD)为0.114 6%,表明本方法精密度良好。

2.4.2 稳定性

取供试品溶液，在分光光度计上,于510 nm处,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,每隔

10 min进行测定,结果见表3,RSD=0.773 4%,表明90 min内溶液的稳定性良好。

2.4.3 重复性

取同一批黄芪样品6份，每份约0.4g，按2.3.2方法制备供试品溶液，分别显色后于510nm处测定吸光度，结果表明样品中总蒽醌平均含量为0.670

5%,RSD=1.962 2%,重复性良好，结果见表4。

2.4.4 加样回收率

取黄芪粉末6份,每份0.2 g,精密称定,每2份1组,共3组。分别加入1,8-二羟基蒽醌对照品1.0、1.3、1.5 mg,按照“供试品溶液的制备”项下的方法依法制得供试品溶液6份,在分光光度计上,于510 nm处,以0.5%醋酸镁甲醇液为空白,测定吸收度。平均回收率为96.973 8%,RSD=1.054 5%,结果见表5。

2.5 含量测定结果

取粉碎过筛的各黄芪药材粉末按照上述方法制备3份供试品。经测定取其平均值,结果见表6。

2.6 实验结果与讨论

2.6.1 1,8-二羟基蒽醌遇醋酸镁甲醇溶液发生颜色反应，使得吸收峰由429nm左右移动到510nm左右，其他蒽醌或醌类物质则无此颜色变化。因此采用差式分光光度法测定样品中总蒽醌的含量，该方法能消除背景吸收，排除了其他成分对蒽醌类化合物测定的干扰。

2.6.2 总蒽醌在分光光度计上于200～800 nm处扫描,由扫描结果确定检测波长为510 nm。

2.6.3 黄芪中的总蒽醌在0.002 46～0.019 68 mg/mL范围内与吸收度线性关系良好，回归方程为：y=45.69x+0.0013,(r= 0.999 9)。

2.6.4 对测定方法进行考察，该方法精密度良好，加样回收率高，经验证，该方法简单易行，结果可靠。