高效毛细管电泳(1)参考幻灯片
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2020/10/6
5.分离类型
八种分离类型 (1) 毛细管区带电泳（CZE）
最普遍、最基本的一种分 离模式。
(2) 毛细管凝胶电泳（CGE）
将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多 孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有 效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测 定蛋白质、DNA等。
高效毛细管电泳在技术上采 取了两项重要改进。
2020/10/6
2.高效毛细管电泳技术上的重要突破
高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管； 二是采用了高达数千伏的电压。
• 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小 了温度效应，使电场电压可以很高。 • 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小， 柱长增加。 • 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔 板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。
2020/10/6
(3) 毛细管胶束电动色谱（MECC）
在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成一疏水内 核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下，胶束在柱中 移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 > ν电泳 ， 则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样 分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组 分与胶束结合得较牢，流出时间长。可用来分离中性物质， 扩展了高效毛细管电泳的应用范围。
2020/10/6
5.7.2 毛细管电泳仪的基本结构
• 电压：0～30kV。 • 分离柱不涂敷任何固定液。 • 紫外或激光诱导荧光检测器。 （可检测到：10-21～10-19 mol/L）
2020/10/6
5.7.3 高效毛细管电泳的主要特点和应用
•高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 •高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 •高分析速度：可在3min内分离30种阴离子；1.7min分离19 种阳离子；4min可分离10种蛋白质。 •试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样。 •仪器简单操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 不足之处：
第五章 色谱分析法
第七节 高效毛细管电泳
分析法简介
5.7.1 毛细管电泳分 析的基本原理
5.7.2 毛细管电泳仪 的基本结构
5.7.3 高效毛细管电 泳的主要特点 和应用
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（1）
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（2）
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（3）
2020/10/6
3.电泳现象与电渗流现象
电泳现象： 带电离子在电场作用下的迁移，速度ν电泳 电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基, pH>3时, 形成双电层， 在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν 电渗流。
2020/10/6
4. 分离过程 电场作用下，柱中
出现：电泳现象和电渗 流现象。
第六章
结束
•进样不够方便。应用范围相对较窄。
•分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向 与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。
2020/10/6
请选择内容：
5.1 色谱分析法基础 5.2 色谱理论基础 5.3 气相色谱法 5.4 高效液相色谱法
5.5 超临界流体色谱法 5.6 色谱定性与定量分析方法 5.7 高效毛细管电泳分析法简介
Hale Waihona Puke Baidu电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。 阳离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流 >ν电泳时,阴离子
在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒 子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互 分离。
2020/10/6
5.7.1 高效毛细管电泳分析的基本原理
在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的 作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移 的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不 同，迁移速率不同而实现分离。
1.经典电泳分离法的不足
所用分离柱的柱径大，柱 较短，分离效率不高（远低于 HPLC），温度影响大。
5.分离类型
八种分离类型 (1) 毛细管区带电泳（CZE）
最普遍、最基本的一种分 离模式。
(2) 毛细管凝胶电泳（CGE）
将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多 孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有 效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测 定蛋白质、DNA等。
高效毛细管电泳在技术上采 取了两项重要改进。
2020/10/6
2.高效毛细管电泳技术上的重要突破
高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管； 二是采用了高达数千伏的电压。
• 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小 了温度效应，使电场电压可以很高。 • 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小， 柱长增加。 • 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔 板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。
2020/10/6
(3) 毛细管胶束电动色谱（MECC）
在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成一疏水内 核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下，胶束在柱中 移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 > ν电泳 ， 则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样 分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组 分与胶束结合得较牢，流出时间长。可用来分离中性物质， 扩展了高效毛细管电泳的应用范围。
2020/10/6
5.7.2 毛细管电泳仪的基本结构
• 电压：0～30kV。 • 分离柱不涂敷任何固定液。 • 紫外或激光诱导荧光检测器。 （可检测到：10-21～10-19 mol/L）
2020/10/6
5.7.3 高效毛细管电泳的主要特点和应用
•高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 •高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 •高分析速度：可在3min内分离30种阴离子；1.7min分离19 种阳离子；4min可分离10种蛋白质。 •试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样。 •仪器简单操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 不足之处：
第五章 色谱分析法
第七节 高效毛细管电泳
分析法简介
5.7.1 毛细管电泳分 析的基本原理
5.7.2 毛细管电泳仪 的基本结构
5.7.3 高效毛细管电 泳的主要特点 和应用
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（1）
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（2）
2020/10/6
高效毛细管电泳仪器（3）
2020/10/6
3.电泳现象与电渗流现象
电泳现象： 带电离子在电场作用下的迁移，速度ν电泳 电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基, pH>3时, 形成双电层， 在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν 电渗流。
2020/10/6
4. 分离过程 电场作用下，柱中
出现：电泳现象和电渗 流现象。
第六章
结束
•进样不够方便。应用范围相对较窄。
•分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向 与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。
2020/10/6
请选择内容：
5.1 色谱分析法基础 5.2 色谱理论基础 5.3 气相色谱法 5.4 高效液相色谱法
5.5 超临界流体色谱法 5.6 色谱定性与定量分析方法 5.7 高效毛细管电泳分析法简介
Hale Waihona Puke Baidu电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。 阳离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流 >ν电泳时,阴离子
在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒 子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互 分离。
2020/10/6
5.7.1 高效毛细管电泳分析的基本原理
在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的 作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移 的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不 同，迁移速率不同而实现分离。
1.经典电泳分离法的不足
所用分离柱的柱径大，柱 较短，分离效率不高（远低于 HPLC），温度影响大。