免疫标记技术节荧光免疫技术
荧光免疫标记技术
荧光染料的选择与特性
01
02
03
04
荧光染料种类
常见的荧光染料包括异荧光染料特性
不同的荧光染料具有不同的激 发波长和发射波长，可选择适 用于不同检测需求的染料。
荧光染料标记方式
荧光染料稳定性
荧光染料可以通过化学键合、 生物素-亲和素系统等方式与抗 体或抗原结合。
反应条件控制
为了确保抗原-抗体反应的顺利进行，需要控制适宜的反应条件， 如温度、pH值和离子强度等。这些条件会影响抗原和抗体的活性 以及它们之间的结合能力。
荧光染料的标记与染色
选择合适的荧光染料
根据实验需求选择具有特定波长的荧光染料，以便在检测时能够产生明显的荧 光信号。荧光染料应具有高灵敏度、低背景干扰和稳定性好的特点。
标记抗原或抗体
将荧光染料与抗原或抗体结合，形成带有荧光的标记物。标记的过程可以通过 化学方法或生物技术实现，确保荧光染料与抗原或抗体牢固结合。
结果观察与数据分析
荧光显微镜观察
通过荧光显微镜观察抗原-抗体复合物的荧光信号，可以定性或定量分析样本中 的抗原含量。观察时需注意控制激发波长和发射波长，以获得最佳的荧光信号。
数据分析
利用相关软件对荧光信号进行定量分析，通过测量荧光强度、荧光分布和荧光色 彩等信息，计算抗原浓度或细胞数量等指标。数据分析有助于提高实验结果的准 确性和可靠性。
04
荧光免疫标记技术的优缺点
优点
高灵敏度
荧光免疫标记技术能够检测到低浓度的抗原或抗 体，具有较高的灵敏度。
特异性高
荧光免疫标记技术通常采用特异性的抗体或抗原 ，能够针对特定的目标进行检测，具有较高的特 异性。
流式细胞术
利用荧光免疫标记技术对细胞 表面抗原进行标记，通过流式 细胞仪进行检测和分析，可以 对细胞进行分群、计数和功能 研究。
荧光免疫标记技术
适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液，此法标记抗体比较 均匀，非特异性染色也比较少。
【主要试剂与器材】 1．器材 （1）铁立架、蝴蝶夹、层析柱、洗脱瓶、搅拌器、磁棒、
紫外分光光度计 （2）烧杯、试管、滴管、吸管、洗耳球、pH试纸、黑纸 2．试剂 （1）抗体 （2）异硫氰基荧光黄（FITC） （3）葡聚糖凝胶（Sephadex G-25） （4）pH9.5，0. 5M 碳酸缓冲液 （5）pH7.0，0.005M 磷酸缓冲液
免疫标记技术的应用 标记物与抗原、抗体的连接技术； 标记后的抗原、抗体进行特异性检测的实验设计原理 以及相应的检测仪器的使用方法。
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）
是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应 的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量 的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗 体结合部位，检测出抗原或抗体。
荧光免疫标记技术
免疫标记（immunolabelling technic）
是指用一些易测定的、具有高度敏感性的标记物质：荧光素、放射 性核素、酶、胶体金、生物素、铁蛋白及化学（或生物）发光剂等作为 追踪物，标记特异性的抗原、抗体分子进行的抗原、抗体反应。
通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原、抗体的性 质与含量。并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微 镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化 测定。
免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微 示踪的精确性相结合。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不 影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。
免疫--荧光免疫技术 图文版
荧光素要求
有能与蛋白质形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易 解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。 荧光效率高，与蛋白质结合后，仍保持较高的荧光效率。 荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。 与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。 标记方法简单、安全无毒。 与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
荧光偏振
当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期（对于荧光素约持续 4纳秒）保 持静止，发射光将位于同样的偏振平面。如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平 面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直 的和水平的偏振平面检测发射光光强（发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标 记的分子的迁移率有关）。如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高 如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。
4.5
Tb3+-PTA
14
Dy3+-PTA
3.0
荧光寿命(ns) 65000 60000 714000 925000 96000 1000
时间分辨荧光免疫测定 标记方法
双功能螯合剂 1-（对-苯偶氮）-EDTA 异硫氰酸苯基-EDTA 异硫氰酸苯甲基-DTTA 二乙烯三胺五乙酸（DTPA）
荧光（fluorescence）
荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃 迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释 放出能量，称为荧光。
发射光谱和激发光谱
发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样 品发射荧光的强度。
激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发 光激发样品记录的相应的荧光发射强度。
荧光免疫试验
免疫荧光技术的几种实验方法及其分类
免疫荧光技术的几种实验方法及其分类免疫荧光技术的几种实验方法及其分类免疫荧光技术的几种实验方法及其分类1、免疫标记法及其分类1）荧光免疫法：原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。
底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。
结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。
该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。
以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。
除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。
洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。
最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。
传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2）放射免疫法放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。
然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。
RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng／ml水平。
但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。
近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。
3）酶联免疫法(ELISA)ELISA法有竞争法和夹心法两种。
竞争法是基于标准或血清Mb和微孑L 板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg／L，线性范围达1 000ug／L。
夹心ELISA法与EIA具有良好的相关性(r＝0.92)。
ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。
常用的免疫标记技术
常用的免疫标记技术免疫标记技术是一种用于检测和分析生物分子的方法，其中利用特定的抗体或其他免疫物质标记目标分子，从而使这些分子能够被观察和测量。
以下是一些常用的免疫标记技术：1.免疫荧光技术（Immunofluorescence）：在这种技术中，用于检测目标分子的抗体被标记上荧光染料。
通过荧光显微镜观察样本，可以定位和定量目标分子的位置和数量。
2.免疫酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）：这是一种广泛用于检测抗体或抗原的技术。
ELISA 利用酶标记的抗体或抗原与目标分子结合，然后通过酶的底物反应来产生可测量的信号。
3.免疫印迹技术（Western Blot）：Western Blot用于检测蛋白质。
蛋白质被电泳分离，然后通过免疫印迹将其转移到膜上。
接着使用特定抗体标记的酶或荧光物质来检测目标蛋白质。
4.免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）：IHC用于在组织切片中检测特定抗原的存在。
切片上的抗原与标记有酶、荧光染料或其他标记的抗体结合，通过显微镜观察抗原的分布。
5.流式细胞仪技术（Flow Cytometry）：该技术通过激光照射细胞，测量细胞表面或内部的荧光标记物，以分析细胞的类型、状态和功能。
6.蛋白质质谱法（Mass Spectrometry）：将样品中的蛋白质离子化，并通过质谱仪测量质量。
免疫质谱结合了免疫标记和质谱技术，可用于检测和鉴定蛋白质。
7.免疫电镜技术（Immunoelectron Microscopy）：在电子显微镜下观察样本，通过标记的抗体来可视化细胞或亚细胞结构中的特定蛋白质。
8.免疫磁珠技术（Immunomagnetic Bead Assay）：使用带有磁珠的抗体，通过磁场将目标分子分离出来。
常用于细胞分离和分析。
这些免疫标记技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域发挥着关键作用，可以用于检测和定量各种生物分子，如蛋白质、抗体、核酸等。
5免疫荧光技术(修改后)-2解析
生物素 生物素
亲和素
生物素 生物素
亲和素— 生物素在ELISA中使用：
三.ELISA结果的判定
（一）肉眼判定
与阳性、阴性对照颜色比较：
结果判定
1.若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；
2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判 定为阳性；
3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照 孔之间则判定为弱阳性。
（二）片子的制作：
1.常做切片、涂片、印片，要求薄、 均匀，并与玻片充分固定。固定后不 能被洗脱。
2.注意保持抗原完整性
3.不同材料固定方法不同（无水已醇、 丙醇、聚甲醛等）
（三）荧光抗体染色法
1.直接法
待测标本固定（Ag？）
洗涤，
AgAb
+ Ab
• 快、直接、干扰因素少
• 用于检测抗原
• 每检测一种抗原需标记相应的荧光抗 体,较麻烦
固相载体 聚苯乙烯
Ag 或 Ab 吸 附 到 固 相 载体上的过程,称为 包被
实验中所需酶标抗体的制备方法 同荧光抗体制备：
纯化后的抗体+酶 透析去除游 离酶 测定酶标抗体工作浓度
试验中有关术语及试剂：
包被(coat)：将Ag或Ab吸附在固相
载体上的过程，又称固相化或吸附。包被后， 不能被洗脱。包被缓冲液：PH9.6 CB
C.显微镜：普通的光学显微镜。
光路程序：
白炽光源 —— 发射紫外光or兰紫 光 —— 激发滤板 ——紫外光
——被检物（荧光染色标本）——紫 外光＋荧光 —— 抑制滤板——荧光 （显微镜下可见）
隔
光 源
热 滤 片
目镜 阻挡滤镜
激 发 滤 载玻片 片
物镜 聚光器
临床免疫学和免疫检验荧光免疫技术讲义
第八章荧光免疫技术第一节概述荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。
一、荧光的基本知识1.荧光：荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。
2.发射光谱：发射光谱是指固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光强度谱图。
激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。
荧光物质在吸收光能后，即刻发射荧光，一旦停止供能，荧光随即消失。
3.激发光谱：激发光谱是指固定检测发射光荧光波长，用不同波长的激发光照射样品所记录到的相应的荧光发射强度谱图。
4.荧光效率；在一定范围内，荧光强度与激发光强度呈正相关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。
5.荧光寿命：荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。
6.荧光淬灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、酚、1-、硝基苯等）作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。
7.荧光偏振。
二、荧光物质（一）荧光色素1.异硫氰酸荧光素（FITC）:为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或乙醇等溶剂。
分子量为389.4kD, 最大吸收光波长为490〜495nm，最大发射光波长为520〜530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。
其主要优点是:①人眼对黄绿色较为敏感；②通常切片标本中的绿色荧光少于红色荧光。
2.四乙基罗丹明（RB200）：不溶于水，易溶于乙醇和丙酮。
性质稳定，可长期保存。
最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595〜600nm，呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。
4.藻红蛋白（R-RE）：最大吸引光波长为565nm，最大发射光波长为578nm,呈明亮的橙色荧光。
（二）其他荧光物质1.镧系螯合物：其中以致3+应用最广。
EU3+螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
临床免疫学检验-荧光免疫技术
标记方法：搅拌法(适合大样品) 透析法(适合小样品)
标记抗体的纯化：透析法、凝胶过滤法
标记免疫物的分离与鉴定
1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：凝胶过滤法
2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义
争结合抗体。反应平衡后，与抗体结合的荧光 标记抗原的量与标本中抗原浓度的量呈反比。 由于抗体的分子量远大于抗原的分子量，游离 的荧光标记抗原与结合抗体的荧光标记抗原所 产生的偏振荧光强度相差甚远。因此在FPIA中 测定的偏振荧光强度与标本中抗原的浓度呈反 比。通过小分子抗原标准品与荧光偏振强度关 系建立标准曲线，可检测小分子抗原的浓度。
BG：325-500
OG：410-650
(exciting the fluorochrome) ↓
each droplet (cell) emits the fluorescence
(small electrical change)
10. Flow cytometry & Fluorescence
• Fluorochromes have the ability to absorb energy from light an emit it at a longer wavelength.
• 某些物质能够从外部接受能量而进入激 发态,当其从激发态回复至基态时,过剩 的能量以电磁波的形式发射称为发光(荧 光).
ห้องสมุดไป่ตู้
• 时间分辨 • Stokes位移（激发光谱和发射光谱的波长
差）
• 较窄的发射光谱（613nm +- 10nm)
第六节 免疫标记技术
第十一章血清学试验第六节免疫标记技术免疫标记技术是利用抗原抗体反应的特异性和标记分子极易检测的高度敏感性相结合形成的试验技术。
免疫标记技术主要有荧光抗体标记技术、酶标抗体技术和同位素标记抗体技术。
它们的敏感性和特异性大大超过常规血清学方法，现已广泛用于传染病的诊断、病原微生物的鉴定、分子生物学中基因表达产物分析等领域。
其中酶标抗体技术最为简便，应用较广。
这里主要介绍荧光抗体标记技术和酶标抗体技术。
一、荧光抗体标记技术荧光抗体标记技术（fluorescent-labelled antibody technicque）是用荧光色素标记在抗体或抗原上，与相应的抗原或抗体特异性结合，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光，以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。
（一）原理荧光素在10-6的超低浓度时，仍可被专门的短波光源激发，在荧光显微镜下可观察到荧光。
荧光抗体标记技术就是将抗原抗体反应的特异性、荧光检测的高敏性、以及显微镜技术的精确性三者结合的一种免疫检测技术。
（二）荧光色素荧光色素是能产生明显荧光，又能作为染料使用的有机化合物。
主要是以苯环为基础的芳香族化合物和一些杂环化合物。
它们受到激发光(如紫外光)照射后，可发射荧光。
可用于标记的荧光色素有异硫氰酸荧光黄(FITC)、四乙基罗丹明(RB 200)和四甲基异硫氰酸罗丹明（TMRITC）。
其中FITC应用最广，为黄色结晶，最大吸收光波长为490～495nm,最大发射光波长520～530nm，可呈现明亮的黄绿色荧光。
FITC分子中含有异硫氰基，在碱性(pH9.0～9.5)条件下能与IgG分子的自由氨基结合，形成FITC-IgG结合物，从而制成荧光抗体。
抗体经荧光色素标记后，不影响与抗原的结合能力和特异性。
当荧光抗体与相应的抗原结合时，就形成了带有荧光性的抗原抗体复合物，从而可在荧光显微镜下检出抗原的存在。
（三）荧光抗体染色及荧光显微镜检查1．标本片的制备标本制作的要求首先是保持抗原的完整性，并尽可能减少形态变化，抗原位置保持不变。
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• 荧光寿命
荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定 程度所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同。
• 荧光淬灭
荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减 弱甚至消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高温（ ≥20℃）、苯胺、酚、硝基苯、I-等 。
AbF+ Ag （组织/细胞） 紫外线 检测特异性荧光
Байду номын сангаас
AbF-Ag
二、方法类型
1.直 接 法 2.间 接 法 3.双标记法
直 固定Ag（待测）＋Ab*——AgAb*
接 法
Ag？
AbF
• 快，直接、干扰因素少；常用于检测Ag • 特异性高但敏感度偏低 • 检测一种Ag，需标记一种Ab，较麻烦
间
接 法
激发光 荧光
检测
分类 荧光抗体技术（定位、定性）
荧光免疫分析 （定量）
一、荧光的基本知识
• 荧光（fluorescence）
荧光物质吸收激发光的能量后，电子从 基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，发 射出的波长大于激发光波长的光。
激发光谱
激发光
基态（荧光物质）
发射光谱
发射光（荧光）
激发态 基态
• 荧光效率 荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率。
碘化丙啶（PI） 488nm
Eu3+螯合物
340nm
620nm（橙红色）
595nm（红色） 620nm 613nm
应用
FAT、荧光偏振免疫测定
FITC的衬比染色或双标记 FAT
FITC的衬比染色或双标记 FAT 双标记FAT、流式细胞术 橙红色 时间分辨荧光免疫测定
三、荧光抗体的制备
制备免疫血清 亲和层析
（RB200 橘红）
CD4
三、关键技术
1.标本制作 2.荧光抗体染色 3.荧光显微镜检查 4.荧光抗体染色结果判读
标 组织切片：冷冻切片、石蜡切片 本 印片：肝、脾、淋巴结等器官或组织 制 涂片：各种体液、穿刺液、细菌和细胞悬液 作 培养细胞：单层培养细胞
冷冻切片：操作简单，抗原损失少，组织细 胞结构欠清晰 石蜡切片：组织细胞结构清楚，抗原损失多
前言
• 荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光 检测技术的敏感性和直观性相结合而建立的一种 标记免疫技术。
第一节 基本知识
荧光免疫技术：
用荧光素标记Ab或Ag ，与待测标Ag或 Ab结合， 通过检测荧光，确定标本中有无相应的Ab或Ag 。
AbF（AgF）+ Ag（Ab） AbF-Ag /（AgF–Ab）
* 荧光免疫检测中避免荧光淬灭的发生； 消除非特异性荧光（本底）的干扰。
• Stokes位移
荧光物质从激发态回到基态的过程中，由于 部分能量丢失而导致发射光波长比激发光波长， 两者波长之差。 • 荧光偏振
荧光物质经单一平面的偏振光照射后，吸收 光能并发出单一平面的偏振荧光的现象。
P FH - FL FH + FL
二、常用的荧光物质
荧光物质
异硫氰酸荧光素 (FITC)
四乙基罗丹明 (RB200)
最大吸收光谱
490nm～495nm
570nm～575nm
最大发射光谱
520nm～530nm （黄绿色）
595nm～600nm （橙红色）
四甲基异硫氰酸 罗丹明 (TRITC)
藻红蛋白（PE）
550nm 490nm-560nm
免疫标记技术节荧光免疫技术
第十七章 荧光免疫技术
本章要点
1. 荧光免疫技术的基本原理 2. 荧光的基本知识 3. 荧光抗体染色的方法及其原理 4. 荧光抗体的制备 5. 荧光免疫测定的类型及其原理 6. 免疫荧光技术在医学检验中的应用
目录
1 基本知识 2 荧光免疫显微技术 3 时间分辨荧光免疫测定 4 荧光偏振免疫测定 5 免疫芯片技术
固定剂：乙醇、甲醇、丙酮、甲醛等 保 存：4℃、-20℃
• 荧光抗体染色
于已固定的标本上滴加经相关试剂（ 含适当稀释的荧光抗体），置湿盒内25℃ ～37℃温育30分钟左右或4℃过夜；然后 用PBS充分洗涤，待干燥后镜检。
• 荧光显微镜检查（荧光显微镜）
光 源：高压汞灯 氙灯或卤素灯
滤光片：隔热、激发和吸收 光 路：透射光、落射光 聚光器：明视野、暗视野
Ag
荧光素标记抗抗体
Ab
抗－Ab*
• 制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab • 既可检测Ag，又可检测Ab。 • 灵敏度高
双
两种荧光素分别标记两种不同的特异性
标 抗体，与同一标本不同抗原表位反应，荧光
记 显微镜观察两种颜色荧光。如：具CD3、CD4 法 表位的Th细胞。
CD3
（FITC 黄绿） Th
相差聚光器 镜 头：消色差镜头
荧光显微镜的基本结构
隔热滤光片：阻断红外线通过而隔热。 激发滤光片：位于光源和物镜之间，使紫外线
（激发光）透过。 吸收滤光片：位于物镜和目镜之间，阻断激发光
而使发射的荧光透过，保护眼睛。
荧光显微镜的基本结构
光路 透射光：照明光 线从标本下方经 聚光器透过标本 进入物镜。 落射光：照明光 线从标本上方落 射到标本上，经 反射进入物镜。
离子交换层析法
纯化抗体荧光素 搅拌法
标记抗体
透析法
纯化
透析法 凝胶过滤法
鉴定
实际应用
第二节 荧光免疫显微技术
荧光素标记抗体与标本片中组织或细胞抗原结 合，洗涤除去游离的荧光抗体后，于荧光显微镜下 观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在部 位。
定性和定位检测，或对自身 抗体进行定性和滴度测定
一、基本原理
荧光显微镜光路图
透射荧光光路(a)
落射荧光光路(b)
三、荧光抗体染色及结果判断
• 荧光显微镜检查（结果判断）
设立实验对照:阳性对照和阴性对照 区分特异和非特异染色 阳性细胞显色分布:胞质型、胞核型和膜表面型
“-”：无或极微弱 “+”：较弱但清晰可见
“++”：明亮
“+++”：耀眼
对照光：“-”或“±”
• 临床应用
自身抗体检测
第四节 应用
抗核抗体(均质型)
抗核抗体(斑点型) 抗核抗体(核膜型)
荧光抗体技术的应用
病原体检测
细菌（藤黄微球菌 ) 寄生虫（猴胚肾细胞内弓形虫）
阳性：特异荧光强度“+”以上
效价：呈"+"的血清最高稀释度
四、方法评价与应用
• 方法评价 优点：可用于抗原或抗体的定位、定
性检查，既有抗原抗体反应的高度特异性， 又能在荧光显微镜下清晰地显示其形态，直 观性强。
缺点：荧光容易消退，难以制备永久 性标本，非特异荧光常干扰结果判断。
一、荧光抗体技术的应用